脑组织一氧化氮合成酶的特性及其与NADPH－diaphorase相关性研究

采用Ｌ－~３Ｈ精氨酸转化法实验，建立了一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）测定法，并对大鼠和牛脑组织ＮＯＳ的生化特性以及大鼠脑组织ＮＯＳ的分布进行研究。结果表明：大鼠和牛小脑提取液ＮＯＳ酶活性存在时间和剂量依赖性，大鼠小脑ＮＯＳ底物Ｌ－Ａｒｇ的Ｋｍ值为１．６μｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为２３．９ｐｍｏｌ·ｍｇ^（－１），ｍｉｎ^（－１）；大鼠小脑ＮＯＳ依赖于Ｃａ^（２＋）、钙调蛋白（ＣａＭ）、尼克酰胺脱氢酶Ⅱ（ＮＡＤＰＨ）和四氢生物喋呤（ＢＨ＿４），其ＥＣ＿（５０）分别为０．５５ｍｍｏｌ／Ｌ、３３ｎｍｏｌ／Ｌ、３２．５μｍｏｌ／ Ｌ、０．４３μｍｏｌ／Ｌ。３ｍｍｏｌ／ＬＥＧＴＡ可以完全抑制大鼠小脑提取液ＮＯＳ活性；１ｍｍｏｌ／ＬＣａＭ拮抗剂三氟啦嗪（ＴＦＰ）能完全抑制ＮＯＳ活性，其ＩＣ＿（５０）为１．７２μｍｏｌ／Ｌ；ＮＯＳ抑制剂ＮＧ－甲基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＭＡ）能够竞争性抑制ＮＯＳ活性，其ＩＣ＿（５０）为１．５６μｍｏｌ／Ｌ。对与ＮＯＳ具有同源性尼克酰胺脱氢酶Ⅱ黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）活性进行研究，发现ＮＯＳ仅是ＮＡＤＰＨ－ｄ活性的一部分。大鼠神经组织中小脑ＮＯＳ活性最高，其次为嗅球、下丘脑和纹状体，而脊髓最低；大鼠神经组织?

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶4上调乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ表达的研究

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)与肝细胞蛋白——尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶4(NADHDH4)结合机制及其调节功能。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术,参照HBVayw基因序列与NADHDH4cDNA序列全编码区设计相应引物,以pCP10质粒及肝母细胞瘤细胞系HepG2基因组DNA为模板,扩增SPⅡ和NADHDH4的DNA片段,将其分别克隆至pCAT3及pcDNA3.1(-)中,构建pCAT3-SPⅡ报告基因表达载体和pcD-NA3.1(-)-NADHDH4真核表达载体,以其质粒共转染HepG2细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测pCAT3-SPⅡ报告基因表达载体对pcDNA3.1(-)-NADHDH4真核表达载体的调节活性。结果成功构建了pCAT3-SPⅡ报告基因表达载体和pcDNA3.1(-)-NADHDH4真核表达载体,pCAT3-SPⅡ实验组酶表达为pCAT3的2.8倍,而pcDNA3.1(-)-NADHDH4+pCAT3-SPⅡ实验组酶表达约为pCAT3-SPⅡ的5倍,结果显示NADHDH4对HBVSPⅡ具有上调作用。结论共转染实验证实了NADHDH4对SPⅡ有明显的上调作用,为进一步阐明乙型肝炎病毒致病的分子生物学机制奠定了基础。

大鼠乌头碱中毒心肌酶的研究(Ⅲ)——线粒体NADHD的组织化学和细胞化学研究

本文用组织化学和细胞化学方法分别对乌头碱染毒后不同时间组大鼠心肌NADHD进行了光镜和电镜观察。结果表明:乌头碱染毒后30分钟,2小时和4小时的大鼠心肌NADHD活性明显降低并有定位改变,而染毒后12、24小时的心肌NADHD活性有所回升。证实产能较多的NADH氧化呼吸链在乌头碱中毒时受到抑制。

一氧化氮合酶在大鼠杏仁基外侧核传入神经元内的分布

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)在大鼠杏仁基外侧核(BLA)传入投射神经元中的分布。方法:采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色相结合的方法。结果:双标神经元(NADPH-d/CTb)主要分布在孤束核、蓝斑、臂旁内侧核、中缝背核、中央灰质背侧部、丘脑室旁核、下丘脑室旁核、下丘脑室周核、下丘脑腹内侧核以及杏仁内侧核等神经核团。结论:NOS在大鼠BLA传入投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与BLA的功能调节。

缺氧对大鼠纹状体边缘区AChE和NADPH-d含量的影响及其与学习记忆的关系

目的观察大鼠缺氧后纹状体边缘区(MrD)的病理改变及乙酰胆碱酯酶(AChE)和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)的含量改变,探讨缺氧对纹状体边缘区的损害及与学习记忆的关系。方法建立40只大鼠缺氧模型(予氧含量为8%、氮气含量为92%的混合气,5h/d,连续5d)并对其进行Y迷宫实验,缺氧5d后处死动物观察其脑组织切片HE染色和AChE和NADPH-d组织化学染色情况并与对照组比较。结果(1)大鼠缺氧前后Y迷宫实验成绩差异显著。(2)AChE组化结果显示,正常大鼠纹状体可见大量AChE阳性反应纤维和少量阳性细胞,MrD内AChE染色略淡;缺氧后纹状体其他部分AChE染色无明显变化,而MrD则明显加深。(3)NADPH-d组化反应显示,MrD内NADPH-d阳性细胞多呈梭形,纹状体内阳性细胞数较其他区域多;缺氧后阳性细胞形态变化不明显,但数目明显少于正常对照。结论缺氧可导致大鼠学习记忆功能下降以及MrD内AChE、NADPH-d染色的明显改变。这些改变较纹状体其他区域更为明显,表明MrD对于缺氧较敏感,缺氧后AchE和NADPH的减少可能与学习记忆功能的下降有关。

GABA与NOS在大鼠杏仁皮质核神经元内的共存

本文采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPHd)组织化学和γ氨基丁酸(GABA)免疫组化双重染色相结合的方法,观察杏仁皮质核(Co)神经元内GABA与NADPHd的共存。结果显示GABA样阳性神经元多散在分布于杏仁皮质后内侧核(PMCo)和杏仁皮质后外侧核(PLCo),以小型为主,中型较少;NADPHd阳性神经元多散在分布于PMCo、PLCo、杏仁皮质前核(ACo),以中、小型神经元为主;双标神经元(GABA/NADPHd均阳性)多散在分布于PLCo,以中、小型神经元为主。大鼠Co内有GABA与NADPHd共存的神经元,提示一氧化氮(NO)对Co内的GABA能神经元可能有调控作用。

NOS在大鼠杏仁皮质核传入神经元内的分布

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在杏仁皮质核传入投射神经元中的分布。方法采用霍乱毒素B亚单位(CTb)逆行追踪和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组织化学双重染色相结合的方法。结果双标神经元(NADPH/CTb)主要分布在孤束核(Sol)、蓝斑(LC)、臂旁内侧核(MPB)、中缝背核(DR)、中央灰质外侧部(CGL)、中央灰质背侧部(CGD)、丘脑室旁核(PV)、下丘脑室旁核(Pa)、下丘脑室周核(Pe)、下丘脑腹内侧(VMH)核以及杏仁内侧核(ME)等神经核团。结论NOS在大鼠杏仁皮质核传入投射神经元中主要分布于上述核团,并且提示NO参与杏仁皮质核的功能调节。

大鼠杏仁皮质核内γ-氨基丁酸与一氧化氮共存神经元分布及对痛觉信息传递的调控(英文)

背景:大鼠杏仁复合体分布有较多的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元,γ-氨基丁酸也是广泛地存在于哺乳动物中枢神经系统的一种重要的抑制性神经递质,γ-氨基丁酸与一氧化氮合酶是否在大鼠杏仁复合体内共存目前尚不清楚。目的:采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学和免疫组化双重染色相结合的方法,观察杏仁皮质核内是否存在γ-氨基丁酸与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶共存的神经元。设计:以实验动物为研究对象,验证性对照研究。单位:两所大学的解剖教研室。材料:实验于2004-05/06在浙江大学医学院解剖教研室完成。选择SD大鼠6只,雌雄不拘,体质量250～300g。干预:制备大鼠脑组织冠状连续冰冻切片,取4套切片分别用作尼氏染色、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学和γ-氨基丁酸免疫组化双重染色以及检查抗体特异性的对照实验。计数杏仁皮质核核团内γ-氨基丁酸标记神经元数目、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元数目以及还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶/γ-氨基丁酸双标神经元的数目,计算出双标阳性神经元数占单标阳性神经元数的百分比。内氏染色用作核团定位。

NOS阳性神经元在小鼠嗅球的形态与分布

目的:观察小鼠嗅球各层一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)阳性神经元的形态与分布.方法:采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)法显示NOS阳性神经元在小鼠嗅球中的形态与分布.结果:NOS阳性细胞群主要位于嗅球边缘的嗅小球层和中央腔周围的颗粒层;强阳性神经元主要位于嗅球边缘的嗅小球层内;僧帽细胞层偶见深染的NOS阳性僧帽细胞和簇细胞;弱阳性神经元分布于内颗粒细胞层,浅染且形态较小.结论:小鼠嗅球内有NOS阳性神经元的表达,这种明显的分布可能与小鼠嗅觉灵敏有关,僧帽细胞层深染的NOS阳性僧帽细胞可能与小鼠对气味感知能力相关.

电刺激足三里穴对肠缺血再灌注损伤的治疗作用

肠道的缺血再灌注损伤普遍存在于创伤、休克、肠梗阻以及器官移植手术中，目前认为其损伤机理与超氧自由基的大量产生有重要关系。早期采用有效措施对减轻肠损伤有重要意义。在临床上，电针对肠缺血再灌注损伤的恢复的确有疗效。但对其治疗作用机制的报道较少。为此，本实验应用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase，NADPH-d）组织化学方法和生化检测技术，