尼克酰胺-N-甲基转移酶在链脲佐菌素致糖尿病猴胰岛中的高表达及意义

目的:本文旨在明确尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在链脲佐菌素(STZ)致糖尿病猴胰腺中的表达及其定位,进而分析NNMT在β细胞损伤中的重要作用。方法:应用基因芯片技术筛选STZ致糖尿病猴胰腺组织差异表达基因,选择NNMT作为研究对象。半定量RT-PCR及Western印迹法分别从mRNA及蛋白水平验证该差异,然后应用免疫组化技术观察该蛋白在胰腺内外分泌细胞中的表达情况。结果:NNMT在正常猴胰腺中仅有微弱表达,但在STZ致糖尿病猴胰腺中其mRNA及蛋白水平均明显上调。免疫组化结果显示该差异表达主要表现在胰岛β细胞分布区。结论:NNMT可以催化对维持细胞功能极为重要的尼克酰胺甲基化,其在糖尿病β细胞内表达上调可能会引起细胞内能量代谢障碍而导致β细胞损伤。

尼克酰胺-N-甲基转移酶的研究进展

尼克酰胺-N-甲基转移酶(nicotinamide N-methyltransferase,NNMT)的主要功能是将尼克酰胺(nicotinamide,NAM)甲基化,生成甲基尼克酰胺(N1-methylnicotinamide,MNA)。最初NNMT被发现是因其甲基化功能在多种组织的代谢过程中起着非常重要的作用,例如脂肪组织、肝脏、癌组织等。近年又有研究发现,NNMT在炎性反应、肿瘤形成等过程中也具有重要的作用,然而其作用机制尚未被阐明。因此,NNMT是一种非常具有研究潜力的蛋白。本文旨在对NNMT近年来的相关研究进展做一简要综述。

尼克酰胺-N-甲基转移酶在肺腺癌间质中的表达及其生物学功能

目的探讨尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在肺腺癌间质中的表达水平及过表达NNMT对肺腺癌细胞生物学功能的影响。方法(1)收集150例肺腺癌患者手术切除的组织标本。免疫组织化学染色检测癌组织和间质细胞中NNMT的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征及预后间的关系。(2)分别转染过表达NNMT质粒(NNMT组)和对照质粒(control组)构建稳定表达NNMT的肺成纤维细胞系HFL-1,采用荧光定量PCR(qPCR)、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法(Western blot)检测NNMT表达水平。(3)收集过表达NNMT及control组HFL-1细胞的培养上清,分别和肺腺癌A549、PC9细胞进行共培养,通过细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验以及划痕愈合实验比较2种培养液对A549、PC9细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响。结果(1)免疫组化染色显示,150例患者组织标本中65例癌细胞中NNMT呈高表达,83例间质细胞中NNMT呈高表达。有淋巴结转移和病理分期Ⅲ~Ⅳ期患者肿瘤间质细胞中NNMT高表达比例较高,且肿瘤间质中高表达NNMT患者的总生存率明显低于低表达者。(2)成功构建了稳定过表达NNMT的HFL-1细胞,Western blot、qPCR、细胞免疫荧光染色均提示NNMT组NNMT表达高于control组。(3)细胞共培养结果显示,与control组相比,表达NNMT的肺成纤维细胞系的培养液可以显著促进A549和PC9细胞的增殖、克隆形成、迁移以及侵袭。结论肿瘤间质表达的NNMT与肺腺癌的恶性进展密切相关,可能是肿瘤靶向生物治疗的潜在靶点。

烟酰胺-N-甲基转移酶在癌症发生发展中的作用研究进展

烟酰胺-N-甲基转移酶(nicotinamide N-methyltransferase, NNMT)利用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将烟酰胺转变为1-甲基烟酰胺。NNMT在肝脏组织、脂肪组织和某些癌组织中高表达,并在神经退行性疾病、肥胖和糖尿病患者的特定细胞中也呈现表达增加的趋势,因而国内外对NNMT的关注度上升。本文概述了NNMT在癌细胞迁移和侵袭、耐药性、凋亡、自噬等方面的作用,并对相关上下游的分子通路进行综述。

尼克酰胺-N-甲基转移酶在多种肿瘤组织中的表达及其在甲状腺乳头状癌中的预后价值

目的探讨尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在多种肿瘤组织中的表达及其在甲状腺乳头状癌中的预后价值。方法收集2016年1月至2021年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院和浙江中医药大学附属第三医院168例结直肠癌、75例胃癌、178例肺癌、15例肝癌、60例甲状腺癌、7例前列腺癌、74例乳腺癌、14例肾癌的手术切除组织石蜡样本,其中58例甲状腺乳头状癌及另外19例甲状腺炎组织样本收集时间为2016年1月至12月。制备免疫组织化学试剂盒,并进行性能测试。选择胃癌、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌组织标本及癌旁组织标本(距肿瘤边缘3 cm)和正常组织标本(距癌旁组织边缘5 cm以上)。采用免疫组织化学试剂盒检测正常组织标本、不同肿瘤组织及其癌旁组织中NNMT蛋白的表达;使用X-tile软件结合甲状腺乳头状癌肿瘤组织和癌旁组织NNMT诊断肿瘤的受试者工作特征曲线,明确NNMT诊断肿瘤的最佳临界值为41.5,NNMT蛋白低表达为<41.5,高表达为≥41.5。比较不同临床病理特征甲状腺乳头状癌患者的NNMT蛋白表达情况;采用Kaplan-Meier法分析甲状腺乳头状癌患者的总生存;采用Cox比例风险模型对总生存的影响因素进行多因素分析。结果制备的免疫组织化学试剂盒有效期至少为12个月,具有良好的批内、批间重复性及良好的稳定性和特异性。NNMT蛋白在结直肠组织、肺组织、甲状腺组织、前列腺组织、乳腺组织、肾组织以及胃组织中均不表达或偶见低表达。NNMT蛋白在结直肠癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺癌、肺癌、前列腺癌组织中均高表达;在相应的癌旁组织中均低表达。甲状腺炎组织、甲状腺乳头状癌组织以及癌旁组织中NNMT蛋白高表达率分别为15.79%(3/19)、68.97%(40/58)、31.03%(18/58),甲状腺乳头状癌组织NNMT蛋白高表达率高于甲状腺炎组织和癌旁组织。甲状腺乳头状癌患者中,NNMT蛋白高表达组40例,低表达组18例。不同年龄、性别、分化程度、肿块长径、TNM分期、淋巴结转移情况、血清抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平患者的NNMT蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。58例患者中位总生存时间为18.5个月,5年总生存率为90.0%;肿块长径≥2 cm患者的总生存较肿块长径<2 cm患者差(P<0.001);有淋巴结转移患者的总生存较无淋巴结转移患者差(P=0.041);NNMT蛋白高表达患者总生存较低表达患者差,血清TgAb高水平患者总生存较血清TgAb低水平患者差,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。肿块长径(HR=35.56,95%CI 2.64~478.25,P=0.007)、NNMT蛋白表达(HR=308.12,95%CI 2.21~42958.20,P=0.023)、血清TgAb水平(HR=142.85,95%CI 1.88~10854.25,P=0.025)为甲状腺乳头状癌患者总生存的独立影响因素。结论NNMT在多种肿瘤组织中高表达。NNMT表达与甲状腺乳头状癌患者的预后相关,NNMT高表达的患者较低表达患者预后差。

分子化合物4-甲氧基苄基-N-甲基-4-苯乙烯酮-2-苯乙酰胺抑制肺癌细胞NCI-H1299转移的研究

探讨以转录因子叉头框C1(Forkhead box C1,FOXC1)蛋白结构为基础设计合成的标题化合物对肺癌细胞NCI-H1299的抑制作用。利用分子对接技术评估FOXC1与标题化合物的结合能力;MTT检测标题化合物对细胞增殖能力的影响;分别用5、10μmol/L标题化合物作用肺癌细胞NCI-H129912 h,Transwell实验检测标题化合物对细胞的迁移和侵袭能力的影响;构建稳定表达荧光素酶的肺癌细胞LUC-NCI-H1299,左心室注入小鼠体内构建转移瘤模型,分为对照组、低剂量(4 mg/kg)和高剂量(8 mg/kg)组,尾静脉注射治疗,观察化合物对肿瘤在体内转移的影响。结果表明FOXC1与标题化合物对接结合能为-6.9 kcal/mol,体外实验结果显示,化合物以剂量依赖方式抑制细胞增殖,其中低剂量和高剂量组对细胞的迁移和侵袭均有抑制效果,且高剂量组抑制效果更显著,体内研究发现,与对照组相比,标题化合物能有效抑制肺癌在体内的转移。综上,标题化合物与FOXC1能有效对接,在体外可抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,在体内可减少肺癌细胞的转移。

尼克酰胺转甲基酶通过介导细胞内活性氧影响肝癌细胞铁死亡的作用研究

目的探究尼克酰胺转甲基酶介导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)在肝癌细胞铁死亡中的影响及其机制。方法选取2019年3月至2020年2月于笔者医院接受治疗的40例原发性肝细胞癌患者作研究对象,分别取患者的癌旁组织标本及肝癌组织标本。使用串联液相质谱仪检测细胞中甲基尼克酰胺(methyl nicotinamid,MNA)表达,使用流式细胞仪检测ROS及过氧化脂质的平均荧光强度,采用蛋白质印迹法(Western blot)法检测人肝癌细胞(SK-Hep-1、Hep3B)细胞表达的情况变化。采用免疫组化法检测癌旁组织、肝癌组织中尼克酰胺转甲基酶(nicotinamide N-methyltransferase,NNMT)及ROS水平,采用CCK-8法检测不同铁浓度细胞的生存活性。结果肝癌组织组中的MNA水平较癌旁组织组有所提升差异有统计学意义(P<0.05)。与癌旁组织组比较,肝癌组织组的ROS平均荧光强度表达升高,过氧化脂质平均的荧光强度表达降低,SK-Hep-1、Hep3B细胞表达量上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,NNMT组2、10、20及25μmol/L的细胞生存活性水平升高(P<0.05)。与NNMT组比较,铁抑制组不同铁浓度(2μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、25μmol/L)的细胞生存活性表达下降差异有统计学意义(P<0.05)。结论经尼克酰胺转甲基酶介导可引导产生ROS及能量紊乱,提高了肿瘤细胞的死亡率。

尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

尼克酰胺N-甲基化酶（nicotinamide N—methytransferase，NNMT）是S-腺苷-L一蛋氨酸依赖的胞质酶。其主要的生物学作用是参与生物转化，催化一些吡啶衍生物，如吡啶、喹林、β-咔林等的甲基化。这种酶存在人体内多种组织中，其中在肝脏组织中表达量最大，而在其他组织，如。肾脏、肺、骨骼肌、心脏、脑组织仅有微量表达。

烟酰胺-N-甲基转移酶在胃癌中高表达并与预后负相关:基于生物信息物信息学方法

目的探讨烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在胃癌中的表达、生物学功能和临床病理学意义。方法运用公共数据库GEO、Oncomine及TCGA分析筛选与胃癌分型和临床预后相关的基因;利用STRING、GSEA、DAVID、Cytoscape等软件分析预测与候选基因相关的分子通路,构建蛋白质相互作用关系网络;通过q RT-PCR分析候选基因在28例胃癌和配对癌旁组织中m RNA的差异表达;CCK8增殖实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室细胞运动实验等分析NNMT表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果NNMT在多个数据库分析中呈高表达且与胃癌预后负相关;通路分析显示,NNMT高表达与细胞外基质受体和细胞黏附分子等细胞粘附相关通路以及细胞因子受体等分子通路相关;而NNMT低表达可能与碱基错配修复和核黄素代谢等生物过程相关。蛋白相互作用分析显示,NNMT可能与AURKA等16个差异表达的蛋白存在相互作用关系,且与TAGLN、PTRF、AKAP12、IGF2BP2蛋白存在较高的共表达趋势。在临床组织标本中,q RT-PCR结果显示,胃癌组织中NNMTm RNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。在胃癌细胞系中,NNMT的过表达可显著促进细胞增殖、侵袭和迁移,而NNMT敲除可对细胞增殖、侵袭和迁移产生明显的抑制作用。结论NNMT在胃癌中异常高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移;NNMT高水平表达与胃癌患者预后呈负相关,提示NNMT可能为胃癌预后相关分子。

烟酰胺-N-甲基转移酶在结直肠癌中的表达及其与上皮间质转化的关系

目的探讨烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在结直肠癌组织中的表达水平及其与上皮间质转化(EMT)的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测80例结直肠癌组织及其相应癌旁组织NNMT mRNA的表达情况,采用免疫组织化学法检测NNMT、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达情况,比较不同临床病理特征患者癌组织NNMT mRNA的表达量;采用定量PCR检测SW480结肠癌细胞株及经NNMT抑制剂处理后的SW480细胞NNMT、E-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达情况。结果结直肠癌组织中NNMT mRNA表达量高于癌旁组织(P<0.05),不同年龄、性别、淋巴结转移、原发肿瘤-区域淋巴结-远处转移(TNM)分期、肿瘤直径、血清癌胚抗原水平患者间NNMT mRNA表达量差异均无统计学意义(均P>0.05)。免疫组化结果显示,结直肠癌组织中NNMT及波形蛋白表达高于癌旁组织,而E-钙黏着蛋白的表达则低于癌旁组织(P<0.05)。经NNMT抑制剂处理后,SW480细胞中NNMT、波形蛋白的表达降低,E-钙黏着蛋白表达上调(P<0.05)。结论 NNMT在结直肠癌组织中表达上调,并可能通过EMT参与结直肠癌的发生发展。

缺氧诱导因子1α(HIF1α)下调HepG2细胞中甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)基因的表达

目的 探讨乏氧对甘氨酸-N-甲基转移酶（Glycine-N- methyltransferase,GNMT）表达的影响,以及GNMT与缺氧诱导因子1α （hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF1α）表达之间的关系。方法 HepG2,293T,H460 3株细胞常规培养并设立常氧组和乏氧组,待细胞生长至50%~60%融合后,将乏氧组细胞放入1%氧气乏氧箱继续培养24 h,常氧组继续常规培养24 h后,运用半定量PCR,实时荧光定量PCR方法分析HepG2,293T,H460 3株细胞乏氧后相对于常氧GNMT基因的表达变化;通过小RNA干扰方法敲低HepG2细胞中HIF1α基因和HIF2A基因,运用实时荧光定量技术检测干扰效率,并检测GNMT基因的表达变化。结果 乏氧能够下调HepG2,293T,H460 3株细胞中GNMT基因的表达,HepG2细胞中抑制最明显;3株细胞的GNMT基因表达抑制率分别为68%,17%,21%;在HepG2细胞中敲低HIF1α基因能够引起GNMT表达明显上调,而敲低HIF2A后GNMT表达无明显变化。结论 在HepG2细胞中乏氧可能通过HIF1α下调GNMT的表达。

烟酰胺N-甲基转移酶的研究进展

烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)是一种甲基化酶,在体内能使烟酰胺(NAM)甲基化,生成N1-甲基烟酰胺(MNAM)从体内排出。近来的研究表明NNMT除了能够清除NAM外,还可以通过消耗甲基供体及生成活性代谢产物参与脂肪及肝脏等组织的多种代谢途径调节。本文对近年来研究发现的NNMT在生理和病理状态下的作用以及治疗干预新途径进行综述。

烟酰胺N甲基转移酶在食管癌中的表达及机制研究

目的探讨烟酰胺N甲基转移酶(NNMT)在食管癌中的表达及机制。方法采用免疫组化法检测84例食管癌及癌旁正常组织中NNMT的表达,将siRNA NC(对照组)、siRNA NNMT(siRNA组)转染到EC9706食管癌细胞,Realtime PCR检测NNMT mRNA表达,CCK-8实验检测细胞活力,Hoechst染色检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测NNMT、Wnt1a、β-catenin、CyclinD1、MMP-9蛋白表达。结果NNMT在食管癌组织(59/84,70.23%)中的阳性表达显著高于癌旁正常组织(4/84,4.69%)(χ^(2)=76.825,P<0.05)。与对照组比较,siRNA组NNMT mRNA[(0.56±0.05)vs(1.00±0.10),t=5.903,P<0.05]及蛋白表达量[(0.74±0.07)vs(1.56±0.16),t=7.321,P<0.05]均下调,细胞活力[(0.39±0.04)vs(0.62±0.06),t=5.832,P<0.05]降低,细胞凋亡率[(32.46±3.24)%vs(3.31±0.32)%,t=6.431,P<0.05]提高,细胞侵袭数目[(32.47±3.25)vs(189.32±18.90),t=6.321,P<0.05]减少,Wnt1a[(0.41±0.04)vs(0.15±0.01),t=5.842,P<0.05]、β-catenin[(0.34±0.03)vs(0.17±0.02),t=5.216,P<0.05]、CyclinD1[(1.12±013)vs(0.39±0.04),t=6.438,P<0.05]、MMP-9[(0.87±0.09)vs(0.31±0.03),t=5.128,P<0.05]表达量均下调。结论NNMT在食管癌组织中高表达,下调NNMT可以抑制EC9706食管癌细胞增殖与侵袭,与阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。

心肺转流期间尼克酰胺磷酸核糖转移酶的变化及其与糖代谢的相关性分析

目的探讨心肺转流（CPB）期间尼克酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）水平的变化及其与糖代谢的关系。方法择期心瓣膜置换术患者36例，于麻醉后5min（T1）、阻断主动脉后5min（T2）、复温后5min（T3）、开放主动脉后5min（T4）、术毕后5min（T5）从中心静脉抽取血标本，检测血清NAMPT、胰岛素水平和全血血糖水平并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），分析NAMPT水平的变化及其与糖代谢的关系。结果与T1时比较，T2～T5时患者血清NAMPT、血清胰岛素、血糖和HOMA-IR均明显升高（P〈0．05），且均在L时达到峰值。血清胰岛素水平与NAMPT具有显著正相关（r=0．873，P〈0．01）。结论心瓣膜置换术CPB期间NAMPT和胰岛素的变化具有正相关性，NAMPT可能参与了糖代谢。

苯乙醇胺-N-甲基转移酶G-390A基因多态性与长沙地区汉族人群原发性高血压易感性的关联

目的:探讨苯乙醇胺-N-甲基转移酶(PNMT)G-390A基因多态性与长沙地区汉族人群原发性高血压遗传易感性的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的分析方法,在400例原发性高血压患者和388例健康人群中对PNMT基因G-390A位点进行基因分型。结果:高血压病例组PNMT基因G-390A多态位点GG,GA和AA基因型频率分别为39.3%,50.0%和10.8%,对照组G-390A多态位点GG,GA和AA基因型频率分别为43.6%,45.6%和10.8%;病例与对照组间基因型分布无统计学差异(P=0.433);高血压病例组G-390A等位基因的频率为35.8%,对照组为33.6%,G-390A等位基因频率在高血压病例与对照组中分布也无统计学差异(P=0.378);经Logistic回归分析显示,PNMTG-390A多态性与原发性高血压的发病风险无关;通过对性别进行分层分析,男性病例组与对照组之间PNMTG-390A的基因型分布具有统计学差异(P<0.05),病例组A等位基因频率显著高于对照组(P=0.046);女性病例和对照组间G-390A多态基因型和等位基因频率分布均无统计学差异(P>0.05)。结论:PNMTG-390A的遗传多态性可能与长沙地区汉族人群男性原发性高血压的易感性相关。s.

尼克酰胺磷酸核糖转移酶功能研究进展

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt),又称为前B细胞克隆增强因子(PBEF)和内脏脂肪素(Visfatin),近年来由于其多方面的功能在尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物学、代谢、炎症等领域成为研究热点。作为NAD生物合成限速酶,Nampt调节NAD依赖蛋白如脱乙酰基酶的活性,并在胰岛β细胞分泌胰岛素中起重要作用。Nampt尚可作为具有免疫调节功能的炎症细胞因子,参与多种急慢性炎症性疾病的发病。本综述总结Nampt上述不同功能,并讨论其与2型糖尿病的关系。

小鼠烟酰胺N-甲基转移酶基因的克隆及其表达

目的克隆和表达小鼠烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)基因。方法设计特异引物,利用逆转录PCR克隆小鼠NNMT编码cDNA序列,并进行序列测定;然后通过PCR扩增,双酶切回收cDNA片段定向重组到载体pEGFP-N3中,采用PCR和酶切鉴定重组表达质粒;最后将其转染到真核细胞中,通过Western杂交检测其表达,用激光共聚焦显微镜检测其细胞分布。结果经RT-PCR获得了小鼠NNMT的编码cDNA序列,经测序证实克隆序列完全正确;PCR和酶切鉴定表明绿色荧光蛋白(GFP)标记的NNMT表达质粒pNNMT-GFP成功构建;转染至HEK293T细胞中,Western杂交检测到绿色荧光蛋白融合的NNMT特异表达,显微观察表明NNMT分布在细胞质中。结论成功构建了NNMT的表达质粒,并在小鼠中实现其表达。

烟酰胺N-甲基转移酶在肿瘤及代谢相关性疾病中的研究及潜在研究领域进展

烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)是体内重要的甲基化酶,参与许多药物和外源性化合物的生物转化,近几年已成为肿瘤研究的新亮点之一。随着研究的深入,学者逐渐发现NNMT在肥胖和糖尿病等代谢相关疾病中发挥重要作用,有望成为治疗靶分子。本文基于现有研究,总结NNMT在肿瘤及代谢相关性疾病中的应用进展,并探讨其在高血压等心脑血管疾病以及肾损伤等疾病中的潜在诊断及治疗价值,旨在为临床及科研提供新的线索。

不同运动模式的减肥效果与烟酰胺N-甲基转移酶表达的相关性

目的:分析不同运动模式对大鼠的减肥效果以及脂肪和肝脏组织中烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)表达的影响。方法:根据不同的运动训练模式,将60只DA大鼠随机分为安静对照组、有氧运动组和无氧运动组各20只,在运动前和运动训练6周结束后,对3组大鼠的体重、体长进行测量,并对Lipschitz指数进行计算;运动训练6周结束后,采用Western blot免疫印迹法测定根部和脂肪组织NNMT蛋白的表达。结果:6周运动训练结束后,与安静对照组比较,有氧运动组、无氧运动组大鼠的体重、Lipschitz指数均有明显的降低,组间差异有统计学意义(P<0.05);6周运动训练结束后,与安静对照组比较,有氧运动组、无氧运动组大鼠脂肪组织的NNMT蛋白表达均明显提高,而肝脏组织中的NNMT蛋白表达均明显降低,其中无氧运动组脂肪组织的NNMT蛋白表达提高程度明显大于有氧运动组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:有氧和无氧运动训练对大鼠均能产生明显的减肥效果,并且分别对脂肪和肝脏组织NNMT蛋白表达产生明显的提升和抑制作用,而无氧运动对脂肪组织NNMT蛋白表达的提升程度明显强于有氧运动。

甲基化转移酶3对食管癌细胞增殖、迁移及谷氨酰胺代谢的影响

目的探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达;CCK8试验、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验检测METTL3抑制剂STM2457对人食管鳞状癌细胞系Eca109和KYSE150增殖及迁移的影响;流式细胞术、TUNEL染色试验检测其对细胞周期及凋亡的影响;TMT/iTRAQ定量蛋白质组法分析其对下游相关信号通路的影响;谷氨酰胺和谷氨酸检测试验及Western blot法分析其对食管癌细胞谷氨酰胺代谢的影响。结果METTL3在食管癌组织中的表达显著上调(t=5.024,P<0.0001)。STM2457抑制Eca109和KYSE150细胞的METTL3表达后,显著抑制了细胞的增殖及迁移能力,细胞周期在G0/G1期发生阻滞,细胞凋亡率增加,同时降低了谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量,并下调了谷氨酰胺代谢相关蛋白丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运载体2(alanine-serine-cysteine transporter 2,ASCT2)、谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)和谷氨酸脱氢酶1(glutamate dehydrogenase 1,GLUD1)的表达。METTL3敲低后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著降低(谷氨酰胺摄取量:t为24.52~41.01,P均<0.01;谷氨酸生成量:t为8.431~11.83,P均<0.01);METTL3过表达后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著升高(谷氨酰胺摄取量:t分别为5.803和56.13,P均<0.01;谷氨酸生成量:t分别为11.06和4.695;P均<0.01)。METTL3敲低后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺代谢相关蛋白ASCT2、GLS和GLUD1表达水平显著下调,而METTL3过表达后,ASCT2、GLS和GLUD1蛋白表达水平显著上调。结论METTL3在食管癌中高表达,并可能通过介导食管癌细胞谷氨酰胺代谢促进细胞增殖。