尼克酰胺N-甲基化酶基因多态性对血清同型半胱氨酸的影响

目的探讨尼克酰胺N-甲基化酶(NNMT)A/G基因多态性与血清总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系,及其与叶酸和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T多态性的相互作用。方法采用横断面研究,选择日本某公司健康男性员工221例(40～64岁)为研究对象,应用LightTyper溶解曲线法和PCR-RLFP的方法分别检测NNMT A/G和MTHFR/C677T基因型。结果NNMT A/G各基因型受检者的血清tHcy水平间差异无统计学意义(P=0.254)。低叶酸水平者中NNMT GG基因型者与A等位基因携带者(GG和AA+AG)的tHcy水平间差异有统计学意义(P=0.029),而这种差异在中、高叶酸水平者间均无统计学意义(P值分别为0.428、0.871);叶酸与NNMT A/G基因多态性存在相互作用(P=0.008)。低叶酸水平者NNMT A/G和MTHFR C677T两种基因型存在相互作用(P=0.034),携带NNMT GG基因的MTHFR TT基因型者其tHcy浓度与其他基因型个体间差异有统计学意义(P<0.001)。结论NNMTA/G多态性不是影响日本健康男性血清tHcy水平的独立危险因素,但其可能与叶酸、MTHFR C677T多态性存在相互作用而影响血清tHcy水平。

烟酰胺N-甲基转移酶的研究进展

烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)是一种甲基化酶,在体内能使烟酰胺(NAM)甲基化,生成N1-甲基烟酰胺(MNAM)从体内排出。近来的研究表明NNMT除了能够清除NAM外,还可以通过消耗甲基供体及生成活性代谢产物参与脂肪及肝脏等组织的多种代谢途径调节。本文对近年来研究发现的NNMT在生理和病理状态下的作用以及治疗干预新途径进行综述。

尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

尼克酰胺N-甲基化酶（nicotinamide N—methytransferase，NNMT）是S-腺苷-L一蛋氨酸依赖的胞质酶。其主要的生物学作用是参与生物转化，催化一些吡啶衍生物，如吡啶、喹林、β-咔林等的甲基化。这种酶存在人体内多种组织中，其中在肝脏组织中表达量最大，而在其他组织，如。肾脏、肺、骨骼肌、心脏、脑组织仅有微量表达。

SHNH法和NHS-MAG_3法标记的^(99m)Tc-寡聚核苷酸的比较

比较研究采用联肼尼克酰胺(Hydrazino Nicotinamide Derivative,SHNH)法和N-羟基琥珀酰胺基S-乙酰巯基乙酰三氨基乙酸(N-hydroxysuccinimidyl S-acetylmercaptoacetyltriglycline,NHS-MAG3)法以99mTc标记反义寡聚核苷酸(Antisense Oligonucleotide,ASON)的标记物的放射化学和生物学特性。合成SHNH和NHS-MAG3后,分别以SHNH和NHS-MAG3为双功能络(螯)合剂,用99mTc标记ASON;比较标记物99mTc-SHNH ASON和99mTc-MAG3-ASON的体内外稳定性、兔血浆蛋白结合、正常BALB/C小鼠体内分布及结肠腺癌HT29细胞摄取的情况。结果显示,采用NHS-MAG3法标记的标记物99mTc-MAG3-ASON的标记率和稳定性明显高于SHNH法标记的标记物99mTc-SHNH-ASON(P<0.05)、血浆蛋白结合率显著低于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05);99mTc-MAG3-ASON在血液、心脏、胃、肠的分布显著低于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05),而在肝、脾的分布略低于99mTc-SHNH-ASON(P>0.05),但在肾的分布显著高于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05);99mTc-MAG3-ASON的HT29细胞摄取率显著高于99mTc-SHNH-ASON(P<0.05)。因此,采用NHS-MAG3法的标记物99mTc-MAG3-ASON的放射化学和生物学特性明显优于SHNH法的标记物99mTc-SHNH-ASON。

NNMT基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达

目的利用pGEX-4T-2表达系统表达制备尼克酰胺N-甲基转移酶(NNMT)抗原。方法根据NCBI核苷酸数据库编码为gi:12652950人NNMTcDNA序列,设计合成编码NNMT的DNA引物,并分别在5'端和3'端设计BamHI和XhoI位点,利用RT-PCR从人肝组织中克隆NNMT基因,经T-A克隆、亚克隆至pGEX-4T-2表达载体,重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),经异丙基-β-D-硫代乳糖苷诱导表达,Glu-tathioneSepharose4B亲和层析制备融合蛋白(GST-NNMT)。通过DNA测序来证实质粒pGEX-4T-2DNNMT的正确性,SDS-PAGE电泳以及Western-blot判断GST-NNMT蛋白的准确性。结果限制性内切酶和DNA测序结果表明,编码NNMT蛋白的DNA序列准确插入到pGEX-4T-2多克隆位点,成功构建表达质粒pGEX-4T-2DNNMT。菌液超声破碎后,融合蛋白主要存在于裂解上清液中,表达量约占菌体总蛋白表达量的20%,每升菌液可表达融合蛋白约4.5mg。Western-blot证实制备的蛋白为GST-NNMT。结论成功地利用基因重组技术制备了NNMT,为制备抗NNMT单克隆抗体和ELISA试剂盒打下基础。

交感神经系统内一氧化氮合酶对血管平滑肌增殖的影响

目的探讨交感神经系统中的一氧化氮合酶(NOS)对血管平滑肌增殖的影响及调控。方法用三氯化铁(FeCl3)损伤颈总动脉建立大鼠平滑肌增殖模型,实验分为假手术组、术后存活1d组、5d组,在5d组中加设注射抑制剂N-硝基-L精氨酸(LNNA)组,每组6只大鼠,采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)组织化学染色和荧光金(FG)逆向追踪双标,观察颈交感神经节和脊髓中间外侧核神经细胞一氧化氮合酶的变化;苏木素-伊红(HE)染色观察血管平滑肌增殖变化。结果血管损伤后1d、5d组的颈交感神经节中有较多NADPH-d染色阳性细胞表达,尤其5d组更明显;手术侧的T1～T3脊髓侧角NADPH-d阳性细胞数也增多,而抑制剂组的NADPH-d阳性细胞数明显减少;HE染色可见血管损伤后有平滑肌增殖,而抑制剂组增殖更明显。结论损伤颈总动脉后颈交感神经节和T1～T3脊髓侧角内的NOS活性增强,可能参与血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控。

过表达NNMT对SMMC7721肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨尼克酰胺-N-甲基化酶(NNMT)对人肝癌细胞株SMMC7721恶性生物学行为影响。方法分别对转染NNMT基因SMMC7721/NNMT组(简称S/NNMT)、对照组SMMC7721细胞组(简称S)及转染pcDNA3.1空质粒SMMC7721/pcDNA3.1(简称S/P)组细胞进行MTT增殖实验、克隆形成实验、黏附实验、侵袭实验等,以研究过表达NNMT对细胞生物学行为的影响。结果 MTT法检测结果显示S/NNMT组细胞增殖速度、克隆形成率与S组、S/P组比较差异无统计学意义(P>0.05),S/NNMT组细胞异质黏附能力明显高于S组、S/P组细胞(P<0.001);Transwell侵袭力实验结果显示S/NNMT组细胞OD值明显高于其余两组(P<0.001)。结论 NNMT可以使肝癌细胞的恶性表形发生变化,使其侵袭转移能力增强。

NNMT在肾透明细胞癌的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究NNMT在肾透明细胞癌中的表达情况及对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常肾小管上皮细胞株HKC、肾癌细胞株786-O及30例肾透明细胞癌组织、相应癌旁组织中NNMT的mRNA和蛋白的表达水平,并分析NNMT的mRNA水平与临床病理参数的关系。化学合成针对NNMT特异的siRNA序列,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染进786-O细胞中,利用RT-PCR和Western blot法检测NNMT在786-O细胞中的表达水平,用Transwell小室法检测肾癌细胞786-O侵袭能力的变化。结果:NNMT在肾癌细胞786-O中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞株HKC(P<0.001);肾透明细胞癌组织和对应的癌旁组织中NNMT的mRNA相对表达量分别为(1.582±0.2145)、(0.1269±0.04279),两组比较P<0.001。NNMT的mRNA水平与肿瘤大小、临床分期有关(P<0.05);Tran-swell法检测结果显示降低NNMT的表达后786-O细胞的侵袭能力明显下降。结论:NNMT在肾透明细胞癌组织和细胞中表达升高,可能在肾癌发生、发展过程中发挥重要作用。