尼福地平对豚鼠耳蜗功能和噪声性听力损失的影响

目的观察L-型钙通道阻滞药尼福地平对耳蜗功能的影响及其对噪声性听力损失(noise-inducedhearingloss,NIHL)的保护作用。方法健康杂种豚鼠40只,随机分为四组:人工外淋巴液组;尼福地平组;人工外淋巴液加噪声暴露组;尼福地平加噪声暴露组。四组动物按分组条件分别行耳蜗外淋巴液灌流,给予噪声暴露或不给噪声暴露,从圆窗记录复合动作电位(compoundactionpotential,CAP)阈值和微音电位(cochlearmicrophonics,CM)幅值,上述两个指标在灌流前和灌流120分钟各记录一次。结果人工外淋巴液组灌流前后的CAP阈值和CM幅值无显著差异(P>0.05);尼福地平组灌流后CAP阈值升高、CM幅值下降(P<0.05)。尼福地平加噪声暴露组及人工外淋巴液加噪声暴露组,噪声暴露后较噪声暴露前CAP阈值升高和CM幅值下降(P<0.05),CAP阈值升高和CM幅值降低程度,前组比后组低(P<0.01)。结论尼福地平可能作用于耳蜗毛细胞上的L-型钙通道,对耳蜗功能有抑制作用并对NIHL有部分保护作用。

尼福地平对过氧化氢所致听力损失的拮抗作用

目的在体观察尼福地平 L-型钙通道阻断剂可否对过氧化氢所致的听力损失起到拮抗作用。方法实验动物分为4组,分别为人工外淋巴液组、0.5μM尼福地平组、200μM H_2O_2组和200μM H_2O_2+0.5μM尼福地平组。通过全耳蜗灌流,记录灌流2 h 后的复合动作电位(compound action potential,CAP)、耳蜗微音电位(cochlear microphonic,CM),了解各组耳蜗功能的变化,并用 PI 和 Hoochst 双染色方法观察耳蜗内细胞损伤情况。结果灌流2 h 后 H_2O_2+尼福地平组的 CAP 阈移和 CM 幅度变化较单独的 H_2O_2组减小,两者比较差异有显著性。形态学发现 H_2O_2组毛细胞存活率约54±9%;尼福地平组毛细胞存活率约9r7±2%;H_2O_2+尼福地平组未见明显的细胞坏死。结论尼福地平作为 L-型钙通道阻断剂可部分拮抗 H_2O_2所致的听力损失。

钙离子通道基因TRPC6转染HEK293电生理特性研究

目的建立TRPC6基因在HEK293细胞稳定表达的方法,并对TRPC6通道的电生理特性进行研究,以排除其他因素的影响而更加准确地研究该单独的离子通道的特性。方法应用TRPC6基因转染于不表达TRPC6离子通道的HEK293细胞,给予该离子通道特异性激动剂二酰基甘油类似物OAG(1-oleoyl-acetyl-sn-glycerol);应用尼福地平阻断高阈值Ca2+通道,细胞内液成分含Cs+以阻断K+通道;全细胞膜片钳记录TRPC6通道电流在HEK293细胞的表达。钳制电位在-50 mV。采用Ramp刺激方式(斜坡电压):间隔15 s,连续80个刺激,记录20 min。结果 HEK293细胞电流为171.8 pA,给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG,测得HEK293细胞表达的TRPC6通道电流为2 920.98pA,膜电流明显增大,说明TRPC6离子通道已成功地转染到HEK293细胞上。Ramp方式刺激HEK293细胞显示,在灌流液中给予激动剂OAG后,从3 min开始,电流逐渐增大,到5 min左右达最大值,经洗脱后又逐渐下降。在灌流液中给予尼福地平,电流幅度未下降,在227.9～998.8 pA之间。未加激动剂OAG时,从正常HEK293细胞记录到的TRPC6离子通道电流较小,约为171.8 pA。给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG,记录的该通道电流增加,可达2 920.98 pA。HEK293细胞转染TRPC6后给予尼福地平及激动剂OAG,离子通道电流为3 137.16 pA,未能阻断Ca2+电流。结论正常足细胞TRPC6通道的电流较小,给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG,可激活该通道从而增加TRPC6电流。尼福地平不能阻断转染到HEK293细胞上的TRPC6通道电流。