尼非韦罗微乳热敏原位凝胶相变性和体外释药行为

目的以尼非韦罗(nifeviroc,NFVR)为模型药物制备一种微乳-热敏原位凝胶(microemulsion thermosensitive in situ gel,ME-TISG),并对该凝胶的制剂学性质进行考察。方法用温控(75℃)相图方法制备尼非韦罗微乳(nifeviroc microemulsion,NFVR/ME),并将其载入泊洛沙姆407(Poloxamer 407,P407)形成的凝胶中,用动态激光散射粒度仪及透射电子显微镜测定其粒径、ζ电位及形态,利用高级旋转流变仪对凝胶流变学进行研究;采用无膜溶出模型研究在频率100 r·min-1下,NFVR/ME的释放与凝胶溶蚀之间的关系。结果不同浓度NFVR/ME的平均粒径为36.30~38.25 nm,且呈圆整均一球体,ζ电位-7.15^-7.22 mV,相转变温度为29.5℃,胶凝温度为34.5℃,NFVR/ME-TISG在低温(<25℃)时为牛顿流体,黏度很小;随着温度升高,黏弹性增大,在35~37℃表现出典型的假塑性流体特征,复数黏度随着剪切速率的升高而逐渐减小,呈现剪切变稀现象。ME中NFVR的释放率受控于凝胶的溶蚀速率,二者呈现良好的线性关系(R2=0.98),遵循零级动力学特征,这种由溶蚀控制药物释药的方式可以避免突释效应。结论热敏原位凝胶是一种具有应用前景的新型阴道释药系统。

羟丙基-β-环糊精包合物中尼非韦罗含量测定和稳定性考察

目的尼非韦罗是一种新型抗艾滋病药物,羟丙基-β-环糊精(hydroxypropyl-β-cyclodextrin,HP-β-CD)包合物增加尼非韦罗的水溶性和稳定性。文中采用反相高效液相色谱法测定环糊精包合物中尼非韦罗含量及考察其相关稳定性。方法采用GL Sciences Inertsil ODS柱(4.60×250 mm,5μm),检测波长265 nm,柱温30℃。以甲醇(A相)-复方醋酸缓冲液(B相,pH4.5)(65∶35,v/v)为洗脱流动相,采用等速度洗脱,流速为1 ml/min,采用外标法定量。结果尼非韦罗与各有关物质分离良好。在20.10~180.90μg/ml的浓度范围内,尼非韦罗峰面积与浓度具有良好线性关系(r=0.9999);重复性好[相对标准差(relative standard deviation,RSD)<1.5%];稳定性好(RSD<1.5%);加样回收率为100.5%(n=9)。结论此方法检测包合物中尼非韦罗含量操作简便、准确、灵敏度高、可靠。尼非韦罗经HP-β-CD包合后相关稳定性有明显提高。

抗艾滋病药物F18和尼非韦罗在Solutol HS15形成复合制剂后的高效液相色谱测定

目的:解决F18和尼非韦罗二者水溶性差的问题,并建立F18和尼非韦罗两种药物混合物的高效液相色谱(HPLC)检测条件。方法:采用GL Sciences Inertsil ODS柱(4.60 mm×250 mm,5μm),检测波长265 nm,柱温30℃。以甲醇(A相)-复方醋酸缓冲液(B相,pH4.5)(65∶35,V/V)为洗脱流动相,采用等速度洗脱,流速为1 ml.min-1。结果:Solutol HS15能够很好地溶解F18和尼非韦罗,二者的出峰时间分别为34.3和14.2 min,最小检测限1μg.ml-1,20～180μg.ml-1的线性关系良好。结论:本研究所建立的分析检测条件为后续的研究提供有效的检测和分析手段,为以后的阴道杀微生物剂稳定制剂及联合用药奠定了基础。

尼非韦罗阴道温敏原位凝胶的流变学研究

目的:应用动态流变实验测定温度敏感型原位凝胶的流变性质,以预测其在体胶凝(相变)行为。方法:通过处方筛选,确定以泊洛沙姆407和188作为基质,制备尼非韦罗阴道温敏原位凝胶(NFVR-TISG)。通过差示扫描热量法(DSC)测定NFVR-TISG胶凝温度。采用动态流变学实验测定NFVR-TISG在不同温度下相变过程中的流变参数,及NFVR-TISG经模拟阴道夜稀释(5∶1)后的流变参数。结果:NFVR-TISG在室温条件下为黏弹性较低的牛顿流体,温度升至29℃时形成凝胶状态;相变行为表现为黏弹性呈指数增长,相角降低;流变学结果显示的胶凝温度与DSC结果(30.4℃)基本一致;模拟阴道液稀释后NFVR-TISG约在35℃发生相转变。结论:体外流变学特点显示NFVR-TISG符合临床阴道局部用药物要求。用于体外评价的动态流变学实验可反映温敏凝胶的黏弹性流体力学特点。

尼非韦罗微乳热敏原位凝胶的稳定性和流变性考察

目的：研究Nifeviroc微乳热敏原位凝胶（NFVR／ME-TISG）的稳定性和流变性。方法：通过稳定性试验，考察凝胶在d5和d10的外观性状、pH值、粒径和Zeta电位有无变化；高级流变仪检测在10～45℃内，凝胶的弹性模量G′,黏性模量G″和相位角δ的变化及变化特征。结果：稳定性试验显示，在d5和d10的凝胶外观性状、pH值、粒径和Zeta电位无明显变化；流变仪测其相转变温度为30℃；在低温（〈25℃）时为牛顿流体，黏度很小；随着温度升高（30和35℃）时，黏弹性模量升高，相角较低，不随频率增加而改变，表现出典型的假塑性流体特征。结论：NFVR／ME-TISG稳定性较好，具有随温度改变黏弹性流变力学特点。

尼非韦罗微乳热敏凝胶对小型猪阴道黏膜炎症刺激性的研究

目的:研究尼非韦罗微乳热敏凝胶(NFVR/ME-TISG)对小型猪阴道黏膜的炎症刺激性。方法:将9只雌性小型猪随机分为基质凝胶组、NFVR/ME-TISG组(25 mg·d^(-1))和壬苯醇醚-9(N-9)凝胶组(25 mg·d^(-1))。肌注苯甲酸雌二醇后12 d,开始阴道给药5 m L·d^(-1),连续7 d,给药前和末次给药后24与72 h,收集阴道灌洗液(cervicovaginal lavages,CVL),流式细胞仪检测CVL中的中性粒细胞,末次给药后72 h收集阴道组织,苏木素伊红染色法(hematoxylin&eosin,HE)评价小型猪阴道黏膜组织溃疡、坏死、细胞浸润、出血、充血、水肿等指标,免疫组织化学法(immuno-histochemical,IHC)检测阴道黏膜组织中CD_(45)^+表达的分布。结果:与基质凝胶组相比,N-9凝胶组CVL中炎性细胞的中性粒细胞数目明显增加(P<0.01),阴道黏膜出现上皮局部脱落、炎性细胞增多、出血和水肿,CD_(45)^+累积光密度(integrated optical density,IOD)值(33.95±6.69)显著增高(P<0.05);而NFVR/ME-TISG组未见明显变化。结论:NFVR/ME-TISG未明显引起小型猪阴道黏膜的炎症刺激性,安全性较好,有望作为阴道外用杀微生物剂候选物进一步研发。

Nifeviroc微乳热敏原位凝胶对大鼠阴道和阴道细胞的毒性研究

目的制备Nifeviroc微乳热敏原位凝胶（NFVR／ME—TISG），并对其体内外毒性进行评价。方法纳米粒度仪检测微乳的平均粒径和PDI，流变仪检测微乳凝胶在不同温度（10～45oC）下复数粘度的变化。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度NFVR／ME—TISG和Nifeviroc热敏原位凝胶（NFVR-TISG）对阴道上皮细胞系VK2／E6E7的细胞活性影响。16只SD大鼠分成NFVR／ME—TISG和NFVR—TISG组，分别给药0．2ml（次／d，10d），第11天麻醉处死，取阴道组织进行苏木素一伊红（HE）染色，根据WHO公认的Eckstein评价标准，对阴道粘膜进行评分。结果在4℃条件下，12个月内微乳的平均粒径和PDI无明显变化；从10℃升至29~C时，NFVR／ME—TISG复数粘度随温度指数性升高，发生相转变；MTT结果显示NFVR／ME—TISG对VK2／E6E7细胞活性影响低于NFVR—TISG；大鼠阴道组织病理结果显示NFVR／ME—TISG组和NFVR．TISG组阴道组织评分小于2，差异无统计学意义（P=0．118）。结论微乳体系稳定，制成的凝胶具有热敏性，低温下为牛顿流体，高温下呈现剪切变稀的假塑流体特征，微乳凝胶制剂与普通凝胶制剂相比对阴道上皮细胞具有一定的保护作用，阴道刺激性评分在临床可接受范围。