噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究

调查了北京地区２５份水样，其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌，检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４），其他３株菌仅部分被裂解，依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４），荧光假单胞菌（９／２４），鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌，为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。

海洋噬菌蛭弧菌对对虾病原菌及其他细菌的寄生作用

用宿主双层琼脂平板法，测定海洋噬菌蛭弧菌对２５株对虾病原菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的寄生作用，结果表明噬菌蛭弧菌菌株不同寄生的范围不同，但所有供试寄主细菌都能被某些蛭弧菌寄生，形成清晰的噬斑．

噬菌蛭弧菌预防对虾弧菌感染的应用研究

采用16S rDNA特异引物对63F和842R对蛭弧菌标准菌株Bdellovibrio bacteriovorus 109-J和实验菌株Bd-9913进行了PCR鉴定,使用Bd-9913菌株分别对3株虾类病原菌溶藻弧菌Vibrio alginolysticus LS01、HF09,副溶血弧菌V.parahaemolyticusV28以及1株大肠埃希氏菌Escherichiacoli CH-42进行裂解。结果表明,105PFU/ml的Bd-9913对于109CFU/ml的宿主菌具有较好的裂解效果。采用3.0×105PFU/ml Bd109-J和Bd-9913分别与饲料混合(v/w)后投喂3.0g左右的凡纳滨对虾幼虾,14d内未发现对虾异常,且在对虾肠道内检测不到Bd109-J及Bd-9913,证明二者对于凡纳滨对虾幼虾是安全的。对正常养殖了50d的室外集约化虾池水体分别泼洒终浓度0.3mg/L的二氯异氰脲酸、0.3mg/L季胺盐络合碘和3.0×105PFU/ml蛭弧菌,后者对于抑制水体弧菌活菌浓度的效果明显优于化学消毒剂。当每隔20d左右分别进行一次上述水体处理,通过比较体内弧菌感染的对虾个体数,发现从肝胰腺分离到弧菌的对虾数量二者无显著差异,但从血淋巴分离到弧菌的对虾数量,蛭弧菌处理组显著少于化学消毒剂处理组,显示了蛭弧菌在预防对虾弧菌感染方面的优越性。

噬菌蛭弧菌预防和治疗斑点叉尾鮰细菌性败血病的初步研究

进行噬菌蛭弧菌预防和治疗斑点叉尾鱼回细菌性败血病试验 ,结果 :在试验水体中加入嗜水气单胞菌对斑点叉尾鱼回进行感染 ,同时在水体中加入噬菌蛭弧菌 ,当水中的噬菌蛭弧菌浓度达到 10 5个 /ml以上时有预防斑点叉尾鱼回败血病的效果 ;采用背肌注射嗜水气单胞菌的方法对斑点叉尾鱼回进行感染 ,然后在水体中加入噬菌蛭弧菌 ,结果试验鱼全部死亡 。

噬菌蛭弧菌和粘红酵母对中国对虾生长及非特异免疫因子的影响

将噬菌蛭弧菌(Bd)、粘红酵母(Rh)及二者混合物分别以1%的比例添加到中国对虾基础饲料里,同时以基础饲料为对照。采用连续投喂的方法,饲喂1.5cm左右的稚虾25d,分别测定第5、10、15、20和25天的酚氧化酶、超氧化物歧化酶、溶菌活力等免疫因子活性。试验结束后,试验组中Rh组存活率达到63%,Bd组和Bd+Rh组分别为45%和40%,二者间无显著差异(P>0.05)。投喂Rh组的增长率、增重率至少高于其他组10.72%和105.05%,比对照组高出36.37%和320.22%。试验组酚氧化酶活力、超氧化物歧化酶活力、溶菌活力从第10天起均高于对照组两倍左右。试验结果表明,饲养实验结束7d后,用鳗弧菌攻毒,在8d内,对照组的死亡率显著高于试验组(P<0.05),试验组免疫保护率为50%～65%,以Rh组最为显著。试验结果表明,微生态制剂能有效促进对虾的生长及提高免疫因子的活性;从免疫水平和生长水平综合考虑,建议单独使用粘红酵母,添加量为1%左右为宜。

噬菌蛭弧菌——水产动物病害生物防治的新工具

噬菌蛭弧菌(以下简称蛭弧菌)是一类专门以捕食细菌为生的寄生性细菌,具有独特的裂解细菌的生物学特性,虽然我国对蛭弧菌的研究滞后于国外,但是利用它作为养殖水体环境中的天然生物改良剂和“活性抗生素”,仍然具有广阔的发展前景。从蛭弧菌的研究历程、蛭弧菌生物学特性包括其分布、宿主范围、生活周期、保藏、噬菌条件、除菌效果、安全性等方面,剖析了研发中存在的问题,进一步提出了研究的方向。

噬菌蛭弧菌BDF-H16长期简易保藏方法研究

实验使用自来水双层检测法与平板计数法,研究了不同的保护液、保藏温度和保藏载体的选择对蛭弧菌长期保藏的影响,以及对优化保藏条件下的蛭弧菌复苏率和复苏蛭弧菌的噬菌能力检测,并且对保藏期限内宿主菌的存活情况与蛭弧菌的存活情况的相互影响做了首次的报道。结果表明:以1/100 NB等低营养液体为保护液、琼脂为载体、加入适量宿主菌于4℃,蛭弧菌保存可达2年以上,保存期内蛭弧菌的复苏率和出斑数目较对照组都有极其显著的提高(P<0.01)。宿主菌与蛭弧菌浓度在保藏期内呈下降趋势,在宿主菌浓度下降到106cfu/mL之前,蛭弧菌浓度下降至103pfu/mL;在宿主菌的浓度下降到104cfu/mL之后,蛭弧菌的数目下降至1.0×102pfu/mL。实验结束时,二元保藏中宿主菌/蛭弧菌浓度比保持在104/102。

水产用噬菌蛭弧菌研究进展

噬菌蛭弧菌是一种专门以捕食细菌为生的寄生性细菌,国内外学者已经在水产用噬菌蛭弧菌靶向特异性引物的设计、分离检测方法的改进、菌种资源的分离、噬菌机制、生态作用研究、应用效果研究等方面取得了较大的进展,但与国外研究水平相比,与我国水产养殖在世界上的地位相比,在菌种变异控制技术、噬菌机制、有效的安全性评价体系和方法、新制剂研发、合理使用技术等方面的研究存在较多的不足。鉴此,我国应当借鉴人和畜禽益生菌研究的新技术与新成果,不断解决水产用噬菌蛭弧菌研究与应用中存在的问题,加快其在我国水产养殖中的应用。

噬菌弧菌,一类被严重低估的噬菌益生菌

噬菌弧菌(Bacteriovorax),又称嗜盐噬菌弧菌,隶属于噬菌弧菌科(Bacteriovoracaceae)。虽然噬菌弧菌在分类地位上与隶属于蛭弧菌科(Bdellovibrionaceae)、蛭弧菌属(Bdellovibrio)的噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)明显不同,但却与噬菌蛭弧菌具有相同的噬菌天性。因此,噬菌弧菌作为一类体积小、运动能力强、能有效裂解革兰氏阴性菌的噬菌益生菌(Ottaviani等,2018),具有噬菌谱广、噬菌活性高、环境适应性强、无毒无害、多重功效等独特优势,是一种具有广阔发展前景的抗生素和化学消毒剂的替代品。本文从噬菌弧菌的噬菌原理入手,概述了噬菌弧菌在水产养殖中应用的独特优势,以期加深水产从业者对噬菌弧菌的认识,促进噬菌弧菌助力水产养殖绿色低碳高质量发展。

噬菌蛭弧菌的分离及初步鉴定

采用双层平板法,以滤膜过滤的方法来收集噬菌蛭弧菌,以嗜水气单胞菌(Aeromonas hudrophila)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescent)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)为宿主菌,进行噬菌蛭弧菌的分离研究;并在此基础上,通过接触酶检测和寄生性确认对噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)进行了初步的鉴定。结果表明未使用滤膜过滤,采用自来水琼脂双层平板法分离噬菌蛭弧菌的效果较好;并经过接触酶和寄生性检测初步鉴定此BD-SP01菌株为噬菌蛭弧菌。

噬菌蛭弧菌对乌鳢养殖水质的影响

为了探讨噬菌蛭弧菌制剂净化水质和病害防治的效果,试验以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度为1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,观察7 d内养殖池的pH、DO、NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数等主要水质指标以及乌鳢死亡数目的变化。向乌鳢养殖池加入噬菌蛭弧菌后,试验组与对照组相比,NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数明显减少(p<0.05),DO明显增大(p<0.05),但pH变化不明显(p>0.05);乌鳢死亡率也明显减少(p<0.05)。试验结果表明,以0.75 mL/m2的用量向乌鳢养殖池泼洒浓度1.0×108pfu/mL的噬菌蛭弧菌制剂,有利于提高DO含量及乌鳢存活率,降低NH3-N、NO2--N含量及弧菌总数。

噬菌蛭弧菌对池塘水中细菌总数的影响

在池塘水中加入噬菌蛭弧菌 ,30 d后试验组水中的噬菌蛭弧菌数量从最初的 1.7× 10 4 pfu/ m L 上升到 2 .6× 10 4 pfu/ m L,细菌总数由最初的 5 .7× 10 6 cfu/ m L 下降到 1.4× 10 5cfu/ m L;对照组水中的细菌总数变化不明显。试验结果表明 ,在池塘水中加入噬菌蛭弧菌可以导致细菌总数的下降。

成都市主要河流水中噬菌蛭弧菌的调查

本文对成都市５条主要河流水中的噬菌蛭孤菌进行了调查，结果表明，所查的５条河流中均有噬菌蛭弧菌存在，其平均含量为２．１×１０４ＰＦＵ／ｍｌ，最高达１．０×１０６ＰＦＵ／ｍｌ，最低为４．０×１０２ＰＦＵ／ｍｌ，且噬菌蛭弧菌的含量与河流的污染程度有关，污染越严重则本菌含量越高，同时，根据噬斑特征的差异，从水样中分纯了五株蛭弧菌，不同的菌株其噬菌能力不同。

噬菌蛭弧菌Bd-9五种保藏方法的比较研究

作者对噬菌蛭弧菌Bdellovibriobacteriovorus的不同保藏方法进行了试验研究,并对其保藏效果进行了比较,结果表明,5种保藏方法中以冷冻干燥法保藏效果最好,21个月的复活率为100%,其次为4℃营养肉汤液保藏法和-20℃甘油保藏法,17个月复活率均为67%。

噬菌蛭弧菌对草鱼池水质及细菌群落的影响

研究了噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)对草鱼池水质及细菌群落的影响。结果表明,噬菌蛭弧菌对养殖环境的主要水化指标具有明显的改善作用,试验组的平均COD、NH3-N、硫化物显著低于对照组(P<0.05),试验组的DO显著高于对照组(P<0.05),而试验组与对照组的pH值差异不显著(P>0.05);池水细菌总数及致病菌的数量也随着噬菌蛭弧菌浓度的增加而发生几何级数减少。

噬菌蛭弧菌在罗非鱼养殖生产中的防病效果

[目的]为了探讨噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)在罗非鱼养殖生产中的防病效果。[方法]向罗非鱼养殖池泼洒不同浓度的噬菌蛭弧菌或光合细菌,观察1个生产周期内养殖池的细菌总数和大肠菌群的变化及罗非鱼的发病情况和产量。[结果]噬菌蛭弧菌用量在5×107PFU/m3以下时,随着用量的增加,细菌总数和大肠菌群的减少幅度越来越明显,罗非鱼因细菌病导致的死亡也明显减少,产量明显提高;噬菌蛭弧菌与光合细菌配合使用的效果更好;单用光合细菌时,细菌总数和大肠菌群的减少幅度较小,发生较严重的细菌病,不能达到防病的效果。[结论]在罗非鱼养殖生产中,噬菌蛭弧菌的使用量为5×107PFU/m3即可达到预防细菌病的目的。

蛭弧菌的分离培养及其对病原菌噬菌作用的初步研究

用来源于猪、鸡、羊和人的病原菌为宿主,从河水、土壤中分离到12株噬菌蛭弧菌。它们的特性为:绝大部分菌株接种营养琼脂不形成菌落,在含有宿主菌的自来水琼脂平板上形成无菌落生长的透明噬斑,最适温度为25—37℃,可使含有浓厚的宿主菌的自来水悬液数日内裂解澄清。其形态为弧瓜形或杆形,大小为1.0～7.5×0.25～0.8μm,端生一根长鞭毛,有的鞭毛包被鞘膜。其宿主范围较广,可裂解多种G^-菌,如:鸡白痢沙门氏菌。猪霍乱沙门氏菌、羔羊大肠杆菌、弗氏志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌;鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌以及变形杆菌等,但均不裂解猪丹毒杆菌、猪巴氏杆菌及枯草杆菌。动物试验初步表明,有的蛭弧菌株对雏鸡白痢有缓解症状及延长病鸡生命的作用。

自然水体中噬菌蛭弧菌与大肠菌群数细菌总数之间的关系

本文调查了３９份水样中噬菌蛭弧菌、大肠菌群、细菌总数，发现水样中噬菌蛭弧菌与大肠菌群数呈现高度正相关（ｒ＝０．７６４９，Ｐ＜０．００５），与细菌总数也呈高度正相关（ｒ＝０．８９９，Ｐ＜０．００５），当细菌总数在１０３个／ｍｌ以下，大肠菌群数在９５个／Ｌ以下时，噬菌蛭弧菌的检出为０，随水体中细菌总数的增加，噬菌蛭弧菌含量也增加。