尿外泌体miR-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌临床结局的预测价值

目的 探讨尿外泌体微小RNA(miR)-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌(BUC)临床结局的预测价值。方法 2017年1月~2022年3月,从我院泌尿外科选取152例BUC病人作为验证集。另外,从我院体检中心选择了126例非癌对照。采用实时荧光定量PCR法检测尿外泌体miR-29c表达水平。结果 验证集BUC病人尿外泌体miR-29c水平低于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而尿外泌体miR-17-5p水平和miR-590-5p水平比较无明显差异(P>0.05)。尿外泌体miR-29c水平诊断BUC的ROC曲线下面积为0.969(95%CI:0.953~0.986),相应的敏感性和特异性分别为92.1%和90.2%。亚型分析中,非器官局限性BUC病人尿外泌体miR-29c水平较器官局限性BUC病人进一步降低(P=0.009)。预后分析中,尿外泌体miR-29c高表达组病人总生存期、无病生存期和疾病特异性生存期均更长(P<0.05)。结论 尿外泌体miR-29c低水平是BUC病人不利的预后因子,有希望作为器官和非器官局限性BUC不良临床结局的预测标志物。

血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1对七氟醚后处理低氧/复氧心肌细胞损伤的作用

目的探讨心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1在七氟醚(SEV)后处理的低氧/复氧(H/R)心肌细胞中的作用。方法借助GEO数据库筛选在MIRI中差异表达的miRNAs,通过H/R处理心肌细胞以构建MIRI细胞模型。干预经SEV后处理的MIRI细胞模型中miR-29b-3p和IGF1的表达,随后通过MTT检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测各组心肌细胞中炎性因子(IL-1β和TNF-α)的变化。结果与Normal组比较,miR-29b-3p在MIRI大鼠血浆外泌体中表达增强(P<0.05),miR-29b-3p和IGF1的靶向结合关系被证实(P<0.05)。SEV后处理后,H/R刺激的心肌细胞中miR-29b-3p的表达降低,而IGF1的表达升高(均P<0.05)。血浆外泌体中miR-29b-3p过表达可明显抑制SEV后处理的H/R细胞存活率,加重细胞凋亡和炎性反应,敲减miR-29b-3p则相反(均P<0.05)。挽救实验数据表明,过表达IGF1可部分逆转过表达miR-29b-3p对SEV后处理的H/R细胞损伤的影响(均P<0.05)。结论血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1促进SEV后处理的H/R心肌细胞损伤。

脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

背景:间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的:研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用,并探讨相关机制。方法:①首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞,通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞,采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定,从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体;②通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型,研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论:①脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态,直径分布在50-140 nm范围内,表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101,并可被PC12细胞成功摄取;②脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡,并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强,随着外泌体中miR-29b-3p表达的降低而减弱,其发挥作用的机制与脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达及抑制凋亡蛋白Bax的表达相关。

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过miR-181c对脊髓损伤的修复作用研究

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的miR-181c对脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSC,流式细胞术检测CD29、CD90、CD45及CD34表达。根据转染物质的不同分为Control组(未处理)、miR-181c组(转染miR-181c mimc质粒)及miR-NC组(转染miR-NC质粒)。提取外泌体,用透射电子显微镜观察外泌体形态。构建SCI大鼠模型,造模后1 h,SCI+外泌体组大鼠尾静脉注射BMSC来源的外泌体;SCI+miR-181c组大鼠尾静脉注射转染miR-181c mimic的BMSC来源的外泌体;SCI+miR-NC组大鼠尾静脉注射转染miR-NC的BMSC来源的外泌体;Sham组、模型组大鼠尾静脉注射等体积的0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。处理后第1天、第3天、第7天、第14天及第28天采用行为学评分(BBB)评估大鼠的运动功能,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测脊髓组织、外泌体中miR-181c,脊髓组织中TNF-α、IL-1βmRNA水平,Western blot检测脊髓组织中Cleaved半胱胺酸蛋白酶第三型(Caspase 3)、Caspase 3、Bcl关联X蛋白(Bax)及B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl2)蛋白,BMSC、外泌体中CD9、CD63表达水平。结果透射电子显微镜下观察,BMSC来源的外泌体呈类圆形,直径约50~100 nm。Control组与miR-NC组外泌体中miR-181c表达水平差异无统计学意义(t=0.297,P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-181c组外泌体miR-181c表达水平升高(1.03±0.21 vs 0.34±0.04)(t=7.813,P<0.05)。与SCI组比较,SCI+外泌体组脊髓组织miR-181c表达水平升高(0.42±0.06 vs 0.23±0.03)(t=9.500,P<0.05)。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组脊髓组织miR-181c表达水平升高(0.22±0.03 vs 1.32±0.13)(t=18.440,P<0.05)。SCI+miR-181c组大鼠BBB评分高于SCI+miR-NC组(t=18.440,P<0.05)。SCI+外泌体组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平均低于SCI模型组(P<0.05),SCI+miR-181c组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平低于SCI+miR-NC组(P<0.05)。与SCI组比较,SCI+外泌体组大鼠脊髓组织中Cleaved Cas pase 3/Caspase 3、Bax表达水平降低,Bcl2表达水平升高,脊髓组织凋亡率降低(P<0.05)。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组大鼠脊髓组织中Cleaved Caspase 3/Caspase 3、Bax表达水平降低,Bcl2表达水平升高,脊髓组织凋亡率降低(P<0.05)。结论BMSC来源的外泌体中miR-181c可修复脊髓损伤,机制可能与抑制炎症、抗凋亡有关。

上皮性卵巢癌患者血清外泌体miR-200c与组织NRP1表达、辅助化疗反应及预后的关系

目的:探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清外泌体微小RNA(miR)-200c与组织神经纤毛蛋白1(NRP1)表达、化疗反应及预后的关系。方法:纳入2018年2月至2022年10月期间在本院接受初级减瘤手术和辅助化疗的135例EOC患者,另外纳入30例良性肿瘤患者作为对照。术前3 d采集患者血清样本,提取并纯化血清外泌体,通过实时荧光定量PCR法检测血清外泌体miR-200c表达水平。术中收集135例EOC癌组织、48例癌旁正常组织和30例良性肿瘤组织样本,通过免疫组织化学法评估组织NRP1蛋白表达。118例患者术后完成至少6个疗程的标准化疗方案,化疗完成后>6个月无复发视为化疗敏感。化疗耐药定义为原发性化疗难治性患者或化疗完成后≤6个月复发。结果:EOC组织中NRP1蛋白阳性表达率高于癌旁正常卵巢组织和良性肿瘤组织(P<0.001)。与良性肿瘤患者相比,EOC患者血清外泌体miR-200c表达水平显著降低(P<0.001)。血清外泌体miR-200c水平可良好地区分EOC患者和良性肿瘤患者,ROC曲线下面积(AUC)为0.955(95%CI 0.921~0.989)。EOC患者血清外泌体miR-200c水平与组织NRP1表达呈负相关(P<0.001)。血清外泌体miR-200c表达水平在化疗耐药组患者中更低(P<0.001),其预测EOC患者化疗反应的AUC为0.846(95%CI 0.769~0.924)。Cox回归和Kaplan-Meier预后分析显示,血清外泌体miR-200c低表达是导致EOC患者更短总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的独立危险因素(P<0.05)。结论:血清外泌体miR-200c低表达与组织NRP1高表达、化疗耐药及预后不良有关,有希望作为术前预测EOC化疗反应和预后的生物标志物。

早期糖尿病肾病患者尿高迁移率族B1蛋白、尿外泌体miR-129表达水平及临床意义研究

目的探讨早期糖尿病肾病(DN)患者尿外泌体miR-129、尿高迁移率族B1蛋白(HMGB1)表达水平,分析其临床意义。方法选取自2018年7月至2019年12月长江大学附属仙桃市第一人民医院收治的168例2型糖尿病患者作为研究对象,根据Mogensen分期将患者分为单纯糖尿病组(n=93)与早期DN组(n=75),另选取50例健康者纳入非糖尿病组。采集受试者尿液样本,采用实时荧光定量聚合酶链反应法和酶联免疫吸附测定法检测尿外泌体miR-129和尿HMGB1表达。采用Pearson法分析尿外泌体miR-129、尿HMGB1水平与随机血糖、尿白蛋白/肌酐比值(UALB/Cr)、估算的肾小球滤过率(eGFR)的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估尿外泌体miR-129和尿HMGB1对早期DN的诊断价值。结果单纯糖尿病组、早期DN组患者尿外泌体miR-129表达均低于非糖尿病组、尿HMGB1水平和空腹血糖水平均高于非糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.05)。而单纯糖尿病组患者尿外泌体miR-129表达和eGFR值均高于早期DN组,尿HMGB1水平、空腹血糖和UALB/Cr比值均低于早期DN组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,早期DN患者尿外泌体miR-129表达与尿HMGB1水平、UALB/Cr比值均呈负相关性(P<0.05),与eGFR则呈正相关性(P<0.05)。经双荧光素酶报告基因分析,miR-129模拟物和HMGB1-3’UTR-WT1或HMGB1-3’UTR-WT2共转染后,可降低荧光素酶活性(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,尿外泌体miR-129、尿HMGB1诊断早期DN的ROC曲线下面积分别为0.83(95%可信区间0.76~0.91)和0.72(95%可信区间0.63~0.80),灵敏度为76.3%和63.4%,特异度为77.5%和72.0%。而联合诊断的ROC曲线下面积为0.96(95%可信区间0.90~0.99),灵敏度和特异度分别为90.0%和91.8%。结论早期DN患者尿外泌体miR-129表达降低,HMGB1蛋白水平升高,联合检测尿外泌体miR-129和尿HMGB1水平对DN早期诊断有一定的参考价值。

血浆外泌体miR-29c在血管性认知障碍患者中的表达及意义

目的探讨血浆外泌体miR-29c在血管性认知障碍(VCI)患者中的表达及意义。方法68例VCI患者为观察组,另选取65例健康志愿者为健康组,通过实时荧光定量聚合链式反应(qRT-PCR)检测两组血浆外泌体miR-29c的表达水平及认知功能〔蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分〕;通过酶联免疫吸附试验检测两组血清同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)、叶酸(FA)和维生素(Vit)B12水平。Pearson相关性分析观察组血浆外泌体miR-29c与MoCA评分、血清中Hcy、CRP、FA和VitB12水平的相关性。结果观察组血浆外泌体miR-29c表达水平显著高于健康组(P<0.05);观察组MoCA评分中注意、语言、执行、记忆、计算力、定向力及视结构技能各子项评分及总评分均显著低于健康组(P<0.05);观察组Hcy、CRP水平显著高于健康组(P<0.05),FA和VitB12水平显著低于健康组(P<0.05);观察组血浆外泌体miR-29c表达量与MoCA评分、FA、VitB12水平均呈负相关(P<0.05),与Hcy、CRP水平均呈正相关(P<0.05)。结论VCI患者血浆外泌体miR-29c表达水平升高,MoCA评分、FA、VitB12、Hcy、CRP有望成为VCI潜在的诊断标志物。

儿童原发性肾病综合征患者尿液外泌体miR-23b-3p水平变化及其临床意义

目的检测尿液外泌体miR-23b-3p在儿童原发性肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者中的水平,评估其作为NS辅助诊断指标的临床价值。方法收集2017年3～11月在解放军东部战区总医院住院并确诊的98例NS患儿(NS组)和南京医科大学附属儿童医院95例年龄、性别相匹配的健康儿童(对照组)的晨尿标本及临床资料。实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测miR-23b-3p在尿液外泌体中的含量。应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)、相关性分析等评估其作为儿童NS诊断指标的临床价值。结果 miR-23b-3p在NS组尿液外泌体中的浓度明显高于对照组[13.44(4.47,31.40)fmol/L vs 3.94(2.76,7.15)fmol/L,差异有统计学意义,U=1 899,P<0.000 1],且在治疗缓解后显著下降[10.62(4.38,37.72)fmol/L vs 2.84(1.53,4.92)fmol/L,W=695,P<0.000 1]。miR-23b-3p诊断NS的ROC曲线下面积(AUC)为0.796(95%CI:0.734～0.858),敏感度为84.7%,特异度为64.2%。相关性分析显示,NS患儿尿液外泌体miR-23b-3p与血清总蛋白(r=-0.377)、清蛋白(r=-0.309)水平呈显著负相关,与血清总胆固醇(r=0.266)、三酰甘油(r=0.318)呈显著正相关,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。结论 miR-23b-3p在NS患儿尿液外泌体中的含量显著升高,且在治疗缓解后明显降低,有望作为儿童NS辅助诊断和治疗效果监测的潜在指标。

特发性肾病综合征患儿尿液外泌体miR-194-5p水平及其临床价值

目的探讨特发性肾病综合征(idiopathic nephrotic syndrome,INS)患儿尿液外泌体miR-194-5p水平及其作为辅助诊断标志物的临床价值。方法收集101例INS患儿和98例性别、年龄相匹配的健康儿童尿液标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-194-5p在尿液外泌体中的含量;ROC曲线、相关性分析等评估其对INS患儿的诊断价值。结果 INS组尿液外泌体miR-194-5p水平明显高于健康人对照组[2.420(0.650,9.515)fmol/L vs 0.360(0.220,0.653)fmol/L,U=1 552,P<0.01],且其中44例患者在治疗缓解后明显下降[0.975(0.375,4.358)fmol/L vs 0.320(0.145,0.523)fmol/L,W=708,P<0.01];伴有高尿蛋白的INS患儿miR-194-5p水平明显高于伴有低尿蛋白患儿[8.430(7.225,13.070)fmol/L vs 2.130(1.180,3.090)fmol/L,U=0,P<0.01];miR-194-5p诊断INS的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.843(95%CI:0.789~0.897)。相关性分析显示,INS患儿尿液外泌体miR-194-5p与血清清蛋白(r=-0.300)水平呈负相关,与血清总胆固醇(r=0.278)、24 h尿蛋白(r=0.296)呈正相关(P均<0.01)。结论 INS患儿尿液外泌体miR-194-5p含量明显升高,与24 h尿蛋白、血清清蛋白和胆固醇水平密切相关,有望作为辅助诊断儿童INS的非侵入性分子标志物。

糖尿病肾病病人尿外泌体DPP-4、Cys C、α1-MG和转铁蛋白联合检测的临床价值

目的:探讨糖尿病肾病病人尿外泌体二肽基肽酶-4(exosome-DPP-4)、胱抑素C(Cys C)、α1-微球蛋白(α1-MG)和尿转铁蛋白(TRU)联合检测的临床价值。方法:检测40例健康对照组和120例糖尿病病人[正常蛋白尿组(40例)、微量蛋白尿组(40例)和大量蛋白尿组(40例)]尿外泌体DPP-4和尿Cys C、α1-MG、TRU、IgG、微量白蛋白水平,应用Pearson相关分析评价各项目间的相关性,采用受试者工作特征曲线评估DPP-4、Cys C、α1-MG、TRU、IgG等诊断糖尿病肾病的价值。结果:糖尿病肾病病人尿液外泌体中的DPP-4、尿α1-MG含量高于对照组(P<0.05),且随着尿蛋白含量的增加而上升(P<0.05~P<0.01);Cys C、TRU、IgG水平在正常蛋白尿组与对照组差异无统计学意义(P>0.05),在微量蛋白尿组、大量蛋白尿组Cys C、TRU、IgG水平均高于对照组(P<0.05~P<0.01)。尿外泌体DPP-4与α1-MG、Cys C、TRU、IgG呈正相关关系(P<0.05)。DPP-4、α1-MG、Cys C、TRU、IgG以及DPP-4与α1-MG、Cys C、TRU联合检测水平的受试者工作特征曲线下面积为0.742、0.736、0.843、0.868、0.836和0.899;DPP-4、α1-MG、Cys C及TRU联合检测灵敏度为93.42%,特异度为86.90%,阳性预测值为86.59%,阴性预测值为93.59%。结论:尿外泌体DPP-4、尿Cys C和尿α1-MG、TRU联合检测对糖尿病肾病的早期诊断具有较高的临床价值。

尿液外泌体miR-494-3p在急性肾损伤患者中的表达水平及诊断价值

目的 探讨急性肾损伤(AKI)患者尿液外泌体miR-494-3p的表达水平,并分析其作为生物标志物的临床应用价值。方法 收集2019年1月至2021年12月该院131例新诊断未经治疗的AKI患者和96例健康对照者。提取尿液外泌体,随机将其纳入训练集(48例AKI患者和48例健康对照者)和验证集(83例AKI患者和48例健康对照者)。提取RNA,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测尿液外泌体中miR-494-3p的相对表达水平,分析其在AKI患者和健康对照者中的差异,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并计算曲线下面积(AUC)。结果 训练集miR-494-3p在AKI患者和健康对照者尿液中呈差异表达(P<0.05)。训练集尿液外泌体miR-494-3p诊断AKI的AUC为0.740(95%CI:0.640~0.824),灵敏度为68.75%,特异度为75.00%。相对于健康对照者,尿液外泌体miR-494-3p在验证集AKI患者中同样也呈高表达(P<0.05),验证集尿液外泌体miR-494-3p诊断AKI的AUC为0.761(95%CI:0.679~0.831),灵敏度为72.29%,特异度为70.83%。尿液外泌体miR-494-3p相对表达水平与患者年龄、性别及疾病分期无关(P>0.05)。结论 尿液外泌体miR-494-3p在AKI患者中呈高表达,对AKI具有一定的临床诊断价值。

腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测对胃癌腹膜转移的诊断价值

目的探讨腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测对胃癌腹膜转移的诊断价值。方法纳入2017年5月至2020年6月荆门市第二人民医院收治的胃癌患者298例,其中胃癌腹膜转移患者87例作为转移组,胃癌无腹膜转移患者132例作为无转移组,胃癌预后良好患者79例作为对照组。通过实时荧光定量PCR检测受试患者腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达水平。用受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)分析腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测对胃癌腹膜转移的诊断价值。结果转移组腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达水平均高于无转移组和对照组(P<0.05),无转移组与对照组腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测用于鉴别胃癌腹膜转移患者与胃癌无腹膜转移患者的灵敏度分别为93%、91%、92%,特异度分别为93%、92%、91%。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合检测对胃癌腹膜转移诊断的灵敏度为94.25%,特异度为90.99%,准确度为91.95%。结论腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达水平可作为诊断胃癌腹膜转移的潜在标志物。

术前血清外泌体miR-29b与根治性胃切除术后复发及组织MMP-2表达的关系

目的:分析胃癌(GC)患者围手术期血清外泌体miR-29b与根治性胃切除术后复发及组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的相关性。方法:收集2011年1月至2017年5月于我院行根治性胃切除术的107例GC患者的临床数据进行分析。采用实时荧光定量聚合酶链反应及Western blotting分析血清外泌体miR-29b表达及组织MMP-2表达。随访观察GC患者术后复发情况。结果:GC组织MMP-2蛋白相对表达量高于癌旁组织[1.39(0.96,2.10)vs.0.77(0.56,1.38),P<0.001]。Spearman秩相关分析显示,GC患者血清外泌体miR-29b表达与GC组织MMP-2蛋白表达呈负相关关系(rs=-0.426,P<0.001)。单因素及多因素COX回归分析表明,血清外泌体miR-29b表达为GC患者根治术后复发的独立预测因子(P<0.001)。相对于血清外泌体miR-29b高表达组,低表达组患者术后的无复发生存期(RFS)更短(χ^(2)=29.177,P<0.001)。结论:血清外泌体miR-29b表达与组织MMP-2表达呈负相关关系,其可作为预测GC根治性胃切除术后复发的生物标志物。

腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合对胃癌腹膜转移的诊断价值

目的探讨腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合对胃癌腹膜转移的诊断价值。方法纳入2019年5月—2020年6月我院收治的胃癌患者298例,其中胃癌腹膜转移患者87例为研究组、胃癌非腹膜转移患者132例为转移组、胃癌预后良好患者79例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测受试人员腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达水平。用受试者工作特征曲线(ROC)的AUC分析腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p检测在胃癌腹膜转移中的诊断意义。结果研究组患者腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达量均高于转移组和对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05),研究组患者与对照组患者腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p鉴别研究组患者与转移组和对照组患者的灵敏度分别为93%,91%,92%,特异度分别为93%,92%,91%。腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p联合对研究组的诊断的灵敏度为94.25%,特异度为90.99%,准确性为91.95%。结论腹腔灌洗液外泌体中miR-21、miR-320c、miR-1225-5p的表达量检测可作为诊断胃癌腹膜转移的潜在标志。

外泌体中circ_0044366调控肿瘤相关成纤维细胞MMP2的表达促进结直肠癌转移的机制研究

背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是全球癌症死亡的主要原因之一,大量研究发现,环状RNA(circular RNA,circRNA)作为miRNA分子海绵参与CRC细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等病理生理学过程,circRNA/miRNA/靶基因/靶蛋白轴可能是CRC发生的重要原因之一。探讨CRC细胞来源circ_0044366介导的细胞间通讯调控对CRC进展的影响及其作用机制。方法:选取2018年1月—2019年12月于天津医科大学肿瘤医院诊治的46例CRC患者血清样本为观察组,取同期收治的46例非癌症患者血清样本作为对照组;选取同期CRC手术切除(术前均未接受过放疗和化疗)的CRC患者的肿瘤组织标本和配对癌旁标本40对,利用测序筛选出CRC患者及非癌症人群血清差异表达的环状非编码RNA circ_0044366并预测miR-29b的靶基因。免疫组织化学染色法检测肿瘤组织与癌旁组织中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分别检测用SW480细胞外泌体(SW480 exosomes,480 exos)或circ_0044366敲低的SW480细胞外泌体(circ_0044366-deleteSW480 exosomes,480 exos circ_0044366 del)共培养及用miR-29b mimics/inhibitor/NC mimics/inhibitor转染的肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)的MMP2蛋白的表达水平。采用细胞功能回复实验分别检测同时转染过表达circ_0044366质粒与miR-29b mimics、同时转染降表达circ_0044366质粒与miR-29b inhibitor后MMP2蛋白的表达水平,验证circ_0044366与miR-29b之间的相互调控对MMP2表达的调控作用。采用实时荧光定量聚合酶链反应(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测MMP2 mRNA、circ_0044366和miR-29b的表达水平。建立体内转移模型:给BALB/c裸小鼠分别皮下注射SW480细胞悬液、稳定过表达circ_0044366(circ_0044366-overexpression,circ_0044366-OE)的SW480细胞及敲低circ_0044366(circ_0044366-knockdown,circ_0044366-KD)的SW480细胞悬液,与未移植瘤裸小鼠共计4组,验证circ_0044366对肿瘤迁移的影响。结果:与非癌症人群血清外泌体相比,在CRC血清外泌体中circ_0044366的表达水平与组织中MMP2蛋白的表达水平显著相关(P<0.05)。采用生物信息软件预测circ_0044366与miR-29b的作用靶点及MMP2 mRNA的3’非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)miR-29b结合位点,通过荧光素酶报告基因实验证实靶点;通过转染上调miR-29b后MMP2蛋白表达明显下降,而下调miR-29b后MMP2蛋白表达明显升高;上调circ_0044366后MMP2蛋白表达明显升高,而下调circ_0044366后MMP2蛋白表达明显下降。细胞功能回复实验结果显示,同时上调或下调circ_0044366和miR-29b时MMP2蛋白表达水平变化不显著。体内实验显示,circ_0044366-KD组瘤体中circ_0044366含量及MMP2蛋白的表达水平降低,而circ_0044366-OE组瘤体中circ_0044366含量及MMP2蛋白的表达水平显著升高。结论:CRC外泌体中circ_0044366转运至CAF中,通过吸附miR-29b促进MMP2表达进而促进肿瘤转移。敲低CRC细胞中的circ_0044366有望通过调控miR-29b/MMP2轴来抑制CRC的侵袭和转移。

血清外泌体miR-29C表达水平与老年手术患者术后认知功能障碍的相关性

目的探讨血清外泌体miR-29C表达水平与老年手术患者术后认知功能障碍(POCD)的相关性。方法选取2021年1月至2022年1月于山西医科大学第二医院择期行脊柱手术的老年患者119例,于术前1 d和术后1、7、21 d对入选患者行蒙特利尔认知评估(MoCA)量表评分,依据术前1 d与术后1 d的MoCA量表评分是否下降≥2分将所选患者分为POCD组(51例)和非POCD组(68例),并对所有患者术前1 d和术后1 d的S100-β、神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度及血清外泌体miR-29C表达水平进行检测和分析。Pearson相关分析MoCA量表评分与S100-β、NSE、miR-29C的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线评价S100-β、NSE、miR-29C对老年手术患者发生POCD的预测价值。结果POCD组患者术后1、7及21 d的MoCA量表评分均较术前1 d明显下降(均P<0.05),而非POCD组患者仅术后1 d的MoCA量表评分均较术前1 d明显下降(P<0.05)。两组患者术后1 d的S100-β、NSE浓度及血清外泌体miR-29C的表达水平均较术前1 d明显升高(均P<0.05),且POCD组患者术后1 d时S100-β、NSE浓度及血清外泌体miR-29C的表达水平均明显高于非POCD组(均P<0.05)。POCD组患者术后1 d的MoCA量表评分与血清外泌体miR-29C的表达水平呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,术后1 d的NSE、S100-β、外泌体miR-29C的表达水平预测老年手术患者发生POCD风险的曲线下面积(AUC)分别为0.891、0.908、0.918。结论老年手术患者POCD的发生与血清外泌体miR-29C表达水平的升高有关,且血清外泌体miR-29C的表达水平与MoCA量表评分呈负相关,对其早期监测可对老年患者术后POCD的发生发展、病情判断及临床干预提供依据。

血液外泌体携带miR-140-3p负调控泛素结合酶E2C抑制小细胞肺癌的增殖和上皮-间质转化

目的探究血液外泌体携带miR-140-3p是否能够通过靶向泛素结合酶E2C(ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C)调控小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的恶性进展。方法该研究由生物信息学分析、临床研究、细胞分析和动物实验构成。从GEO数据库下载SCLC相关的微小RNA(microRNA,miRNA)数据集GSE19945、mRNA数据集GSE40275和GSE60052。采用T-test检测miR-140-3p在数据集中的正常组织和SCLC组织中的表达差异,并通过数据库分析miR-140-3p在不同组织和细胞外泌体中的表达情况。收集2021年12月—2022年12月在永州市中心医院切除的SCLC组织和配对癌旁组织,并于研究开始前7 d选择健康志愿者。通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测SCLC患者和健康志愿者组织样本中miR-140-3p和UBE2C的表达水平分布情况,并根据表达量的中位数将SCLC患者分为低表达组和高表达组,分析miR-140-3p和UBE2C的表达水平与患者病理参数的相关性。选择20只雄性裸鼠,随机分为miR-140-3p、UBE2C的模拟物阴性对照组和模拟物对照组4组,每组5只。采用免疫组化检测系统对裸鼠肿瘤组织切片进行检测。结果共纳入患者45例,健康志愿者30人。SCLC恶性进展与miR-140-3p和UBE2C的表达量显著相关。SCLC患者血液来源的外泌体中的miR-140-3p表达较低。过表达miR-140-3p可抑制SCLC细胞的增殖(47.33±2.52 vs.107.67±10.69,P<0.05)、迁移[(11.63±2.62)%vs.(31.77±4.30)%,P<0.05]和侵袭(44.33±3.06 vs.102.67±8.50,P<0.05),并促进其凋亡[(14.48±1.20)%vs.(10.14±1.21)%,P<0.05]。生物信息学分析得到miR-140-3p的靶基因UBE2C。体外实验进一步表明,miR-140-3p可直接靶向UBE2C来抑制SCLC细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化并促进其凋亡。小鼠异种移植实验表明,miR-140-3p mimic能显著抑制肿瘤生长。结论血液外泌体miR-140-3p和促癌基因UBE2C可能是潜在的抑制SCLC恶性进程的靶点。

不同年龄段人群尿液外泌体中miR-150-5p对肾脏衰老的影响

目的探讨尿液外泌体miR-150-5p在不同年龄段人群中表达量的变化及miR-150-5p在肾脏衰老过程中的作用.方法选择2014年1月至2016年12月于北京友谊医院老年医学科就诊的76例为研究对象,其中青年组15例,中年组35例,老年组26例,提取尿液外泌体,利用实时定量荧光PCR法检测miR-150-5p表达情况,并通过Logistic回归分析评估不同含量miR-150-5p与年龄、性别、高血压病史、冠心病病史、高脂血症之间的相关性;在人肾小管上皮细胞HK2细胞中过表达和敲低miR-150-5p后,通过蛋白质印迹法分析HK-2细胞中上皮细胞黏附分子相关蛋白表达量情况;通过细胞学实验明确miR-150-5p过表达或敲低后对HK-2细胞增殖、细胞周期的影响.结果Logistic回归分析发现年龄与尿液外泌体中miR-150-5p相对含量密切相关(P<0.05),老年组尿液外泌体内miR-150-5p相对含量(1.33±0.41)较青年组(0.88±0.40)明显增加(P<0.05),且随着年龄增长,尿液外泌体内miR-150-5p相对含量与肾小球滤过率水平成反比.体外实验发现在肾小管上皮细胞HK-2中敲低miR-150-5p后上皮细胞黏附分子Zo-1、E-Cadherin表达量略有下降;而过表达miR-150-5p后,Zo-1、E-Cadherin表达略有增高,miR-150-5p可能影响HK-2细胞的凋亡.结论尿液外泌体miR-150-5p在老年组人群中表达量略有增加,且与肾功能相关;miR-150-5p可影响肾小管上皮细胞中部分上皮细胞黏附分子相关蛋白的表达,有望成为肾脏衰老相关性基因之一.

乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响

目的探讨乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响及可能机制。方法小鼠乳腺癌细胞4T1、小鼠正常乳腺细胞HC11分别采用条件培养基培养并从中分离纯化外泌体,采用Western blot法检测4T1细胞、HC11细胞外泌体肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)、CD63、CD9、高尔基体基质蛋白(Golgi matrix protein,GM130)相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测miR-181a-5p相对表达量。小鼠成肌细胞C2C12分化为肌管细胞后分为对照组(正常培养)、条件培养基组(与4T1细胞培养基共培养)和细胞松弛素D(cytochalasin D,cytoD)组(胞吞抑制剂cytoD处理细胞后与4T1细胞培养基共培养),采用Western blot法检测肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)、肌萎缩蛋白-1(Atrogin-1)蛋白相对表达量。取人胚胎肾细胞HEK293T,采用荧光素酶报告基因实验验证miR-181a-5p与N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)的靶向关系。C2C12肌管细胞分为空白对照组(不进行转染)、miR-181a-5p过表达组(转染miR-181a-5p mimic)、阴性对照组(转染miR-NC)、NDRG2敲低组(转染NDRG2siRNA),采用Western blot法检测4组细胞MHC、Atrogin-1、NDRG2蛋白相对表达量。结果4T1细胞外泌体miR-181a-5p相对表达量(0.91±0.07)及TSG101、CD63、CD9蛋白相对表达量(1.51±0.03、1.46±0.08、1.43±0.06)均高于HC11细胞(0.40±0.04、0.83±0.08、0.79±0.43、0.70±0.03)(P<0.05),GM130蛋白相对表达量(0.46±0.03)低于HC11细胞(1.14±0.05)(t=17.160,P<0.001)。条件培养基组细胞MHC蛋白相对表达量(0.86±0.17)低于对照组(1.59±0.08)、cytoD组(1.34±0.07)(P<0.05),Atrogin-1蛋白相对表达量(1.12±0.05)高于对照组(0.77±0.05)、cytoD组(0.87±0.03)(P<0.05);cytoD组细胞MHC、Atrogin-1蛋白相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-181a-5p靶向NDRG2。miR-181a-5p过表达组、NDRG2敲低组细胞MHC(1.17±0.09、0.73±0.08)、NDRG2(0.73±0.06、0.59±0.05)蛋白相对表达量均低于阴性对照组(1.52±0.11、1.64±0.09)、空白对照组(1.86±0.07、1.37±0.06)(P<0.05),Atrogin-1蛋白相对表达量(0.99±0.06、0.89±0.08)均高于阴性对照组(0.49±0.03)、空白对照组(0.53±0.10)(P<0.05);阴性对照组细胞MHC、Atrogin-1、NDRG2蛋白相对表达量与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌4T1细胞来源的外泌体miR-181a-5p靶向结合并下调NDRG2蛋白表达,加重C2C12肌管萎缩,促进恶病质进展。