左卡尼汀抑制尿毒症血清诱导的红细胞衰亡

目的:探讨左卡尼汀对尿毒症患者红细胞的保护作用及机制。方法:将2%健康人红细胞悬液在以下3组不同的体外培养液中孵育:对照组(C组)、尿毒症血清组(U组)和尿毒症血清+左卡尼汀组(L组)。分别在孵育24和48 h时,留取红细胞,使用流式细胞术检测红细胞衰亡(用磷脂酰丝氨酸表达率代表红细胞衰亡)和红细胞活性氧簇(ROS)的含量,并采用酶联免疫法检测红细胞谷胱甘肽(GSH)的含量。结果:红细胞衰亡随孵育时间延长而增加,U组较C组明显增加,L组较U组明显降低。U组的红细胞ROS生成较C组明显增加,而红细胞GSH生成明显减少。L组的红细胞ROS生成较U组明显减少,而GSH生成明显增加。结论:尿毒症血清诱导正常红细胞加速衰亡,且衰亡率具有时间依赖性。而左卡尼汀可以抑制尿毒症血清诱导的红细胞衰亡,其机制可能与抗氧化有关。

高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响

目的高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法来观察高糖、尿毒症血清对人腹膜间皮细胞VEGF表达的影响。结果高糖、尿毒症血清组VEGF表达明显高于正常对照组。结论高糖、尿毒症血清可促进人腹膜间皮细胞VEGF的表达,可能导致腹膜新生血管的形成,从而引起腹膜超滤衰竭。

尿毒症血清活化Notch信号通路调控血管平滑肌细胞表型转化

目的研究尿毒症血清对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化影响,探讨动静脉内瘘(arteriovenous fistula,AVF)狭窄及失功的机制。方法 (1)弹性纤维染色(elastic-Van Gieson staining,EVG)比较内膜厚度,免疫组化法观察α-SMA、FSP-1、PCNA的表达;(2)培养人主动脉平滑肌细胞株(human aortic smooth muscle cells,HASMCs),分为无血清组(control,Ctl)、10%正常血清组(normal serum group,NS)、5%～20%尿毒症血清组(uremia serum group,US),检测平滑肌细胞α-SMA、SMMHC、SM22α、FSP-1、PCNA的表达;(3)Western blot检测各组平滑肌细胞N1ICD蛋白的表达,QPCR检测细胞Notch1-3、Hes1、Hes5的mRNA表达,并比较Notch信号抑制剂DAPT预处理24h对细胞SM22α、SMMHC、FSP-1、PCNA、Hes1的mRNA表达的影响;(4)免疫组化染色检测Jagged1的表达,ELISA法检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Jagged1的表达,并用Western blot法检测HASMCs的Jagged1蛋白表达。结果 (1)内瘘内膜显著增厚,增生内膜α-SMA呈阳性表达;与正常血管比较,增生内膜FSP-1、PCNA阳性表达增加,差异均有统计学意义(FSP-1:Ctl-A:P=0.024,Ctl-V:P=0.011;PCNA:Ctl-A:P=0.002;Ctl-V:P=0.005);(2)与10%NS组相比,10%US组细胞α-SMA、SM22α蛋白表达下降,而FSP-1、PCNA蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P=0.002;P=0.001;P=0.001;P<0.001),且上述指标与尿毒症血清呈浓度依赖性;10%US组细胞SM22α、SMMHC的mRNA表达下降,而FSP-1、PCNA的mRNA表达增加,差异有统计学意义(P=0.014;P=0.003;P=0.045;P=0.001);(3)与10%NS组比较,10%US组细胞N1/CD蛋白的表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.001);10%US组细胞Notch 1,3、Hes 1、Hes 5的mRNA表达增加,差异有统计学意义(P值分别为<0.001,0.025,<0.001,0.035),Notch2的表达无统计学差异(P=0.907);DAPT预处理可上调SM22α、SMMHC的mRNA表达,下调FSP-1、PCNA及Hes1的mRNA表达,差异均有统计学意义(P=0.003;P=0.020;P=0.036;P=0.009;P<0.001);(4)内瘘组织Jagged1的表达增加,主要位于增生内膜;与10%NS组相比,10%US组HASMCs及HUVEC的Jagged1蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(P值分别为0.001,0.005)。结论尿毒症血清通过上调配体Jagged1的表达,激活Notch信号通路,促进VSMC表型由收缩型向合成型转变,可能是AVF内膜增生的机制之一。

不同血液净化方法清除维持性血液透析患者血清蛋白结合类尿毒症毒素的效果比较

探讨血液透析及联合血流灌注清除血清蛋白结合类尿毒症毒素的效果。方法 选取我院收治的70例维持性血液透析患者,随机分为单透析组和联合灌流组,各35例。单透析组患者常规血液透析治疗,联合灌流组联合应用血液灌流治疗,患者血液透析前后均取样,腹静脉采血。采用HPLC-MS/MS法检测血清标本中硫酸吲哚酚(IS)、硫酸对甲酚(PCS)及马尿酸(HA)浓度;并计算其浓度下降率。同时,监测患者血液透析前后肾功能指标变化。结果 联合灌流组透析后IS(13.69±4.23μg/mL)、HA(5.98±0.96μg/mL)水平显著高于单透析组(21.03±4.26μg/mL、7.21±1.63μg/mL)(P<0.05),两组PCS(16.93±4.25μg/mL、17.25±4.36μg/mL)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合灌流组透析后IS[(57.26±10.23)%]、HA[(52.39±11.35)%]血清浓度下降率显著高于单透析组[(35.65±9.76)%、(32.02±10.18)%](P<0.05),两组PCS血清浓度下降率[(54.36±9.56)%、(54.43±9.49%)]无统计学意义(P>0.05)。结论 在硫酸吲哚酚(IS)及马尿酸(HA)等蛋白结合类毒素控制方面,血液透析相对欠佳,结合血液灌流模式效果更佳,且有助于改善患者肾功能指标,有助于提升血液透析效果,有助于改善患者预后,应用价值较高。

非透析终末期尿毒症患者血清对外周血单个核细胞IL-18分泌的影响

目的探讨非透析终末期尿毒症(ESRD)患者混合血清及不同分子质量血清对外周血单个核细胞(PBMCs)、白细胞介素18(IL-18)分泌的影响。方法分离非透析ESRD患者混合血清,采用超滤离心装置分离非透析ESRD患者不同分子质量血清,同时用Ficoll密度梯度离心分离14例非透析ESRD患者PBMCs,将非透析ESRD患者不同分子质量的血清与非透析ESRD患者PBMCs,共同培养72h,用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测试验对象的血清和培养上清液中IL-18浓度。结果 (1)非透析ESRD患者外周血IL-18含量显著高于对照组,差异有统计学意义P<0.001);(2)非透析ESRD患者大分子质量血清刺激同源PBMCs分泌IL-18较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论分子质量大于10000U的尿毒症毒素是刺激PBMCs引起IL-18分泌增加的主要毒素,提示大分子质量尿毒症毒素可能是导致非透析ESRD患者微炎性反应状态的独立危险因素。

尿毒症患者血清PTH对大鼠肾小球系膜细胞体外增殖及PI3KAktmTOR信号通路的影响

目的探讨尿毒症患者血清甲状旁腺激素(PTH)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)体外增殖及磷脂酰肌醇-3/蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的影响。方法选取2015年1月~2018年9月成都市第三人民医院肾内科收治的72例尿毒症患者,根据血清PTH水平分为正常组16例、轻中度增高组33例、重度增高组23例,常规体外培养大鼠GMC细胞,比较3组12、24、48 h GMC细胞光密度值、GMC细胞周期时相分布、mTOR、Caspase-3表达情况。结果重度增高组12、24、48 h GMC细胞光密度值均高于正常组、轻中度增高组,且轻中度增高组12、24、48 h GMC细胞光密度值均高于正常组(P<0.05);3组GMC细胞光密度值在12、24、48 h随时间推移逐渐递增(P<0.05);与正常组相比,轻中度增高组、重度增高组GMC细胞进入S、G2/M期明显增多(P<0.05);重度增高组GMC细胞进入S、G2/M期细胞多于轻中度增高组(P<0.05);轻中度增高组、重度增高组mTOR表达量高于正常组,Caspase-3表达量低于正常组(P<0.05);重度增高组mTOR表达量高于轻中度增高组,Caspase-3表达量低于轻中度增高组(P<0.05)。结论尿毒症患者血清可导致GMC增殖,且甲状旁腺功能亢进可促进GMC增殖,提高PI3K/Akt/mTOR信号通路表达,PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂可能有助于抑制GMC增殖,延缓尿毒症患者肾功能衰竭进程。

不同血液净化方法清除维持性血液透析患者血清蛋白结合类尿毒症毒素的效果比较

目的比较不同血液净化方法清除维持性血液透析患者血清蛋白结合类尿毒症毒素的临床效果。方法选取维持性血液透析患者68例作为研究对象,随机分为试验组和对照组。对照组应用血液透析,试验组应用血液透析联合血液灌流,比较2组患者血清蛋白结合类毒素的清除效果。结果试验组患者的硫酸吲哚酚(IS)、硫酸对甲酚(PCS)及马尿酸(HA)浓度下降率均明显高于对照组(P<0.01)。结论与单纯血液透析相比,血液透析联合血液灌流能够更好地清除维持性血液透析患者硫酸吲哚酚、硫酸对甲酚及马尿酸等血清蛋白结合类尿毒症毒素。

应用PCR法检测尿毒症病人血清HCV-RNA

对接受血液透析和输过异体血的113例尿毒症病人,进行PCR检测,结果血清抗HCVIgG阳性率61%,其中HCV-RNA检出率65.2%;而抗HCV-IgG阳性病人HCV-RNA阳性率为9.0%.HCV-RNA阳性总检出率74.2%,HBV-M血清标志物阳性检出率51.3%,阳性者HBV-DNA检出率48.2%;阳性者HBV-DNA检出率3.6%.