膀胱尿路上皮癌及尿沉淀细胞P16基因甲基化检测

目的探讨膀胱尿路上皮癌组织及尿沉淀细胞中P16基因启动子的甲基化状况及其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)的方法检测55例膀胱癌组织及尿沉淀细胞P16基因启动子异常甲基化频率。分析其甲基化程度与膀胱尿路上皮癌临床病理参数之间的关系。结果膀胱尿路上皮癌组织及尿沉淀细胞P16基因甲基化阳性率分别为27.3%(15/55)和21.8%(12/55);癌组织及尿沉淀细胞P16基因甲基化阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。浸润性和浅表性膀胱尿路上皮癌组织及尿沉淀细胞P16基因甲基化阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。P16基因甲基化在不同病理分级和不同性别间其差异无统计学意义(P>0.05)。结论 P16基因甲基化是膀胱尿路上皮癌发生的早期事件,与膀胱尿路上皮癌的浸润性发展相关。尿沉淀细胞P16基因启动子异常甲基化状态可作为无创性诊断膀胱尿路上皮癌并且判断其预后的分子标志物。

抗凋亡基因bcl-2启动子CpG岛的高甲基化状态见于28.3%(13/46例)的膀胱癌患者尿沉淀细胞DNA

目的:检测上海地区膀胱癌患者尿沉淀细胞中3个肿瘤相关基因启动子CpG岛的甲基化谱式异常频率,继而评估其应用前景。方法:采用甲基化特异性PCR方法分析尿沉淀细胞DNA中DAPK1、bcl2和hTERT3个基因的启动子CpG岛甲基化状态,并通过RTPCR方法评估DAPK1基因在膀胱癌细胞系中的表达状态。结果:对膀胱癌细胞系中DAPK1基因的启动子CpG岛甲基化状态及其表达(mRNA水平上)所做的分析,确立了高甲基化状态与表达静息化之间的相关性。对46例临床确诊的膀胱癌患者和84例非膀胱癌对照(包括前46例术后的36例)的尿沉淀细胞中DNA甲基化的分析发现,仅bcl2基因的高甲基化见之于28.3%(13/46例)的膀胱癌患者,而84例的对照中均为去甲基化状态。结论:在美国膀胱癌患者尿沉淀细胞中频发DNA高甲基化的靶点在上海地区膀胱癌患者人群中频率很低,因此寻找在后者中频发DNA高甲基化的新靶点实属必要。

尿沉淀细胞DNA的甲基化谱式分析和膀胱癌的诊断

目的:寻找并评估通过对尿沉淀细胞DNA甲基化分析检出膀胱癌的基因组合。方法:甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)。结果:对3株膀胱癌细胞系进行的20个基因启动子区域CpG岛甲基化状态分析发现,除BRCA1以外其他基因至少在细胞株的1个等位基因呈高甲基化状态。对40例膀胱癌组和3组非膀胱癌对照组的尿沉淀细胞DNA进行了6个基因甲基化状态分析发现,SALL3在膀胱癌组甲基化率为67.5%(27/40),MT1A为50.0%(20/40),HPP1为50.0%(20/40),MYOD1为37.5%(15/40),BRCA1为32.5%(13/40),TMS1为5.0%(2/40)。这6个基因在3个非膀胱癌对照组,即非肿瘤性泌尿生殖系统疾病患者23例、脑外科患者6例和正常人群7例均呈去甲基化状态,所以可以受试基因中任一个基因呈现高甲基化状态作为膀胱癌的指征,该法检出膀胱癌的敏感性为90.0%(36/40)。结论:对这5个基因在尿沉淀细胞DNA中甲基化状态的检测可望有效地检出膀胱癌。

膀胱移行细胞癌尿沉淀细胞INK4a和ARF基因启动子异常甲基化及临床意义

目的:探讨膀胱癌患者尿沉淀细胞中INK4a/ARF基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测35例膀胱癌患者尿沉淀细胞INK4a/ARF基因启动子甲基化异常频率,同时以30例非肿瘤性泌尿系疾病患者作为对照。卡方检验(χ2)分析其甲基化程度与膀胱癌临床病理参数之间的关系。结果:膀胱癌尿沉淀细胞INK4a/ARF基因甲基化阳性率分别为25.7%(9/35)和42.9%(15/35),两个基因联合时甲基化阳性率为48.6%(17/35)。浸润性(≥pT2)和表浅性(≤pT1)膀胱癌尿沉淀细胞INK4A/ARF基因甲基化阳性率之间的差异有统计学意义(P<0.01)。INK4a/ARF基因甲基化在不同病理分级、膀胱癌初发与复发和不同性别间其差异无统计学意义(P>0.05)。INK4a与ARF基因启动子甲基化呈正相关关系(r=0.415,P<0.05)。结论:INK4a/ARF基因甲基化不仅是膀胱癌发生的早期事件,而且与膀胱癌的浸润性发展相关。尿沉淀细胞INK4a/ARF基因启动子异常甲基化状态可作为非侵入性诊断膀胱癌并且判断其预后的分子标志物。