尿液脱落细胞糖代谢异常检测方法在尿路上皮病变诊断中的应用

尿路上皮病变主要包括炎症和肿瘤。尿路上皮发生癌变后,部分肿瘤细胞会随尿液排出,因此,尿脱落细胞学检查已成为尿路上皮癌(urothelial carcinoma,UC)诊断和术后随访的主要方法之一。UC细胞依赖有氧糖酵解,作为维持其无限生长和增殖的主要能量来源,称为瓦博格(Warburg)效应。利用肿瘤细胞代谢异常、通过免疫荧光的方法检测糖酵解关键酶HK2蛋白的表达,可以有效地识别尿液中高糖酵解活性的异常细胞。该技术在UC无创诊断中的敏感性为90%,特异性为88%[1],同时也可以用于其他体液样本中脱落肿瘤细胞的检测,如浆膜腔积液、脑脊液、血液等[2-3]。本科室采用细胞糖代谢异常检测方法,对可疑UC患者的尿液进行检测,旨在探讨该法在尿路上皮病变诊断中的应用价值。

尿液脱落细胞块切片的制备

目的 制作尿液脱落细胞块切片,并观察制备效果。方法 收集36例疑似尿路上皮癌患者的新鲜晨尿样本,离心后取尿液沉渣,裂解沉渣中红细胞后加入固定液固定尿液脱落细胞,将尿液脱落细胞富集后制备尿液脱落细胞团,将尿液脱落细胞团脱水后石蜡包埋,以制备尿液脱落细胞块。将尿液脱落细胞块切片,苏木素—伊红染色(HE)后显微镜下评估切片细胞数量(一个视野中细胞所占面积>40%为制备成功)。将制备成功的尿液脱落细胞块切片分别进行免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)检测,IHC染色清晰,定位准确,阳性细胞与背景分辨清晰视为检测成功,FISH检测荧光信号对比清晰,背景干净且75%以上细胞核中有杂交信号视为检测成功。结果HE染色显微镜下评估后36例份尿液脱落细胞块切片中21例份制备成功、15例份因细胞过少无法满足后续诊断要求。21例份尿脱落细胞块切片HE染色后显微镜下可见细胞单层平铺,背景干净,核仁清晰,细胞核和胞质对比清晰。21例份尿脱落细胞块切片IHC染色后荧光显微镜下细胞定位准确,细胞内颗粒清晰,染色强度适宜。21例份尿脱落细胞块切片FISH染色后荧光显微镜下细胞核形态轮廓清晰,荧光红绿信号对比清晰,背景干净。结论成功制备尿液脱落细胞块切片。尿液脱落细胞块切片后可用于常规HE染色、IHC和FISH检测,显微镜下可见背景干净,细胞染色效果较好,细胞核仁清晰。

不同预处理方法对提取尿液脱落细胞mRNA质量的影响

目的 探索合适的处理尿标本的方法获得尿脱落细胞mRNA。方法 比较尿液容量、尿液标本冻存时间、处理方式对提取尿液脱落细胞RNA的产量与质量的影响,并进行qPCR的试验。结果 40 ml尿液标本组及10 ml尿液标本组RNA总量均值分别为886.94±222.93 ng及211.22±62.01 ng,两组A260nm/A280nm比值分别为1.80±0.10和1.77±0.09; 尿液标本量与RNA总量相关（t=3.604,P=0.002）,不同尿液标本量RNA质量差异无统计学意义（t=0.708,P值〉0.05）。实时离心提取及冰冻保存尿液7天后提取两种预处理方法RNA总量分别为886.94±945.84 ng及881.50±829.02 ng,A260nm/A280nm比值分别为1.80±0.10及1.80±0.87; RNA总量与A260nm/A280nm比值差异无统计学意义（t=-0.221-0.085,P值均〉0.05）。直接冰冻尿液标本与TRIzol保存沉渣细胞两种预处理方法RNA总量分别为637.81±525.24 ng及639.86±535.42 ng,A260nm/A280nm比值分别为1.84±0.13及1.83±0.96; RNA总量与A260nm/A280nm比值差异无统计学意义（t=-0.47-0.293,P值均〉0.05）。尿脱落细胞mRNA中可以检测到足细胞的标记蛋白WT-1,podocin和synaptopodin的基因表达。结论 尿液标本量是提取脱落细胞RNA量的关键因素,-80℃低温冻存尿标本7天或Trizol预处理冻存均对提取尿液沉渣细胞RNA数量和质量无影响。

生存蛋白在膀胱癌患者尿液脱落细胞中的表达及临床相关性研究

目的研究生存蛋白(Survivin)在膀胱癌患者尿液脱落细胞中的表达及临床相关性。方法本文选取2016年9月-2018年9月在我院就诊的膀胱癌患者50例,分为膀胱癌组,选取同时期在我院就诊的膀胱良性病变患者20例,分为良性组,选取同一时期在我院健康体检的志愿者20例,分为正常组。尿液脱落细胞DNA提取,实时荧光定量PCR检测Survivin在尿液脱落细胞中的表达。结果膀胱癌组尿液脱落细胞中Survivin表达高于正常组和良性组,良性组尿液脱落细胞中Survivin表达高于正常组,具有统计学差异(P<0.05)。有肌层浸润患者Survivin表达89.29%高于无肌层浸润患者54.55%,具有统计学差异(P<0.05)。T分期≥T2期患者Survivin表达86.67%高于T分期<T2期患者50.00%,具有统计学差异(P<0.05)。病理分级G2-G3级患者Survivin表达88.89%高于病理分级G1级患者47.83%,具有统计学差异(P<0.05)。结论 Survivin在膀胱癌患者尿液脱落细胞中显示高表达,其表达水平与患者肌层浸润、T分期、病理分级有关,参与膀胱癌发展。

膀胱癌尿液脱落细胞角质素mRNA表达检测方法的建立

目的 :建立采用RT PCR对膀胱癌尿液脱落细胞CK8和CK2 0的mRNA表达进行分析的实验方法。方法 :从 2 2例膀胱癌患者尿液脱落细胞中提取总RNA ,采用RT PCR和特异性引物进行逆转录、扩增 ,并用琼脂糖凝胶电泳进行分析。结果 :从所有标本中提取的总RNA均有较好纯度和均一性 ;2 2例标本均表达CK8mRNA ,1 8例标本表达CK2 0mRNA。结论 :RT PCR是一种敏感、快捷的检测膀胱癌尿液脱落细胞中CK8、CK2 0mRNA表达的方法 ,可采用此方法从分子水平对膀胱癌患者尿液脱落细胞表达产物进行无创性检测 ,为研究膀胱癌的发病机制。

尿液脱落细胞学及肿瘤标志物检查在膀胱肿瘤诊断中的临床应用价值

目的:探讨尿液脱落细胞学及肿瘤标志物检查对膀胱肿瘤诊断的临床应用价值。方法:回顾性分析2017年3月—2018年10月期间于我院接受治疗的96例膀胱肿瘤患者的临床资料,所有入选者均需采集晨尿,接受尿液脱落细胞学及肿瘤标志物(膀胱肿瘤特异性抗原)检查,分析检测结果以及诊断效能。结果:以病理诊断结果为金标准,尿液脱落细胞学诊断准确度为50.00%,膀胱肿瘤特异性抗原诊断准确度为77.08%,均低于联合检测的90.63%,差异有统计学意义(χ^2=37.951、6.501,P=0.000、0.011);三种不同检查方式诊断特异度与阳性预测值对比,差异无统计学意义(χ^2=2.691、0.152,P=0.260、0.927);联合检测诊断敏感度与阴性预测值均高于尿液脱落细胞学及膀胱肿瘤特异性抗原检测结果,差异有统计学意义(χ^2=67.338、21.961,P均=0.000)。结论:膀胱肿瘤患者经过尿液脱落细胞学及肿瘤标志物联合检测,可获得良好的诊断效能,利于为临床诊治提供有效参考。

无痛性血尿40例尿液脱落细胞检查分析

近几年来，为探讨无痛性血尿脱落细胞检出的阳性率，我院将40例无痛性血尿的尿液标本进行离心沉淀，采用苏木素-伊红染色，在显微镜下找脱落细胞，结果阳性6例，阳性率15％，为早期发现泌尿系肿瘤(特别是膀胱肿瘤)提供了实验室依据，现将结果分析如下。

人工阅片协同人工智能TPS辅助阅片系统可提高尿液脱落细胞学检查的灵敏度及准确率

《中华病理学杂志》2023年第12期发表了朱琳等的研究文章。研究结果显示,人工智能TPS辅助阅片系统实现了尿液脱落细胞学智能化阅片,人工阅片协同人工智能TPS辅助阅片系统可有效提高阅片的灵敏度及准确率,降低漏诊风险。

尿液脱落细胞学联合细胞代谢异常检测在尿路上皮病变诊断中的价值分析

探究在尿路上皮细胞病变诊断中采取尿液脱落细胞学检测联合细胞代谢异常(U能)检测的价值。方法 从2022年5月至2022年8月本院收治的可疑尿路上皮病变患者中抽选88例作为主要研究对象,所有患者均分别接受尿液脱落细胞学检测和U能检测,对比检测结果。结果 U能检测联合尿液脱落细胞学检测阳性率明显高于单独尿液脱落细胞学检测准确率和单独U能检测准确率,差异具有统计学意义(P<0.05)o同时U能检测联合尿液脱落细胞学检测诊断准确性、特异性、灵敏性均明显高于单独U能检测、单独尿液脱落细胞学检测,差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论 在尿路上皮病变中采取尿液脱落细胞学检测联合U能检测能够很好地诊断尿路上皮病变,准确率高,临床应用价值高。

激光显微捕获技术用于尿液脱落细胞DNA检测

目的采用激光显微捕获技术(LCM)捕获尿液脱落细胞,并进行STR分型。方法收集10份健康成人尿液样本,根据储存时间分组,其中新鲜尿液组(≤24h)分别采用Chelex-100及LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,储存尿液组(>24h)再分为4℃组和室温组,分别在4～30d内不同时间点采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA;各组提取的模板DNA进行扩增及SRT分型检验。结果新鲜尿液组采用LCM联合DNA IQTM提取法提取DNA,所有样本均可检出全部基因座(16个),采用Chelex-100法则在部分基因座上出现等位基因丢失、非特异性扩增、峰值低等现象;4℃储存10d和室温储存4d以内的尿液经检验可明确判读12个以上基因座,4℃20～30d及室温7d,可检出7个以上基因座。结论 LCM技术可用于尿液检材的DNA分型检验,且检材应尽可能4℃保存并尽快检验。

尿液脱落细胞端粒酶活性测定在膀胱癌术后复发监测中的应用

目的探讨尿液脱落细胞端粒酶活性测定在膀胱癌术后复发监测中的价值。方法定期收集60例膀胱癌患者术后3年的尿液,采用PCR-ELISA法检测尿液中脱落细胞端粒酶活性,用以指导膀胱镜检查并确定诊断。结果14例患者的尿液脱落细胞端粒酶活性呈阳性,其中10例确诊复发;而2例复发的患者端粒酶活性呈阴性,尿液脱落细胞端粒酶活性在膀胱癌术后患者中的敏感性和特异性分别为80.0%和87.5%。结论尿液脱落细胞端粒酶活性测定是膀胱癌术后复发检查中的有效手段,可指导有针对性的膀胱镜检查。

尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性检测的临床意义

为探讨尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性检测对膀胱癌诊断和术后随访的意义 ,以TRAP 银染法检测膀胱癌组织和自然排尿中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性 ,以巴氏染色法对脱落细胞进行细胞学检查。 45例膀胱癌患者中 ,44例肿瘤组织表达端粒酶活性 (97 8% ) ;2 9例尿脱落细胞表达端粒酶活性 (6 4 4% ) ,14例尿脱落细胞中发现癌细胞 (31 1% ) ,脱落细胞的端粒酶活性检测明显优于细胞学检查 (P <0 0 0 5 ) ,且随着肿瘤分化程度和临床病理分期的增加 ,阳性率明显升高 (P<0 0 5 )。而 10例非膀胱癌患者的这三项检测 ,无 1例阳性。结果显示 :自然排尿端粒酶活性的检测 ,操作简便 ,敏感 ,特异 ,可望成为诊断和随访膀胱肿瘤的首选方法。

PCR-ELISA检测尿液中膀胱癌脱落细胞端粒酶活性及临床意义

端粒酶是近年来发现的与肿瘤发生关系密切相关的一种逆转录酶,目前国内外对实体瘤的端粒酶活性进行了广泛的研究,但对体液脱落细胞中端粒酶活性的研究较少。我们应用PCR-ELISA方法检测尿液中脱落细胞的端粒酶活性,旨在探讨该方法在膀胱癌早期诊断和随访中的应用价值。

荧光原位杂交检测尿路上皮癌分子细胞遗传学变异的临床应用研究

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)在检测尿路上皮癌患者尿液中脱落细胞核染色体畸变的临床应用价值。方法:采用3号、7号及17号染色体着丝粒特异性探针及p16位点特异性DNA探针对20例正常人尿液进行FISH检测,建立阈值。对115例疑似尿路上皮肿瘤血尿患者的尿液进行FISH检测,以至少两种探针检测结果超过阈值或一种探针检测结果存在至少两种异常为诊断阳性。同时采用常规HE染色法进行尿脱落细胞形态学分析。结果:荧光原位杂交(FISH)技术和尿脱落细胞学诊断尿路上皮癌的灵敏度分别为86.7%(78/90)和10.0%(9/90)(P<0.001);特异度分别为96.0%(24/25)和100%(25/25)(P>0.05);阳性预测值分别为98.7%(78/79)和100%(9/9)(P>0.05);阴性预测值分别为66.7%(24/36)和23.6%(25/106)(P<0.05)。FISH技术诊断尿路上皮癌的灵敏度与尿路上皮癌的病理分级及分期无关,低级别和高级别尿路上皮癌FISH技术诊断的阳性率分别为85.7%和87.5%(P>0.05);非肌层浸润性和肌层浸润性尿路上皮癌的阳性率分别为84.2%和88.4%(P>0.05)。结论:尿脱落细胞荧光原位杂交技术诊断尿路上皮癌灵敏度高,特异度强,无创伤性,可作为尿路上皮癌早期诊断的一项重要方法,并可在预测肿瘤生物学行为及预后关系上具有重要的临床意义。

肾盂癌行输尿管软镜检查的临床意义

肾盂癌是发生于肾盂、肾盏的恶性肿瘤,在肾脏肿瘤中仅次于肾癌。血尿是肾盂癌首发和最重要的症状,表现为频繁发做的全程无痛性肉眼血尿,伴有条状血块[1]。肾盂癌发病隐匿,影像学上不易与血块、某些炎性病变、正常肾组织结构等鉴别,诊断有一定难度,目前主要依赖于尿液脱落细胞学、FISH。

荧光原位杂交技术在肾移植术后尿路上皮肿瘤患者诊断中的研究

由于长期服用免疫抑制剂，肾移植术后患者并发肾癌的比例是正常人群的10倍，且肿瘤的发生率随移植肾存活的时间延长而增长[1]。现今肿瘤的确诊的“金标准”还是病理活检技术，但针对肾移植术后患者而言，活检的风险也相应增加。需要i种无创且准确地检查技术，本科采用荧光原位杂交技术（FISH）对尿液脱落细胞进行检测。