尿石素A脂质体的制备:稳定性及体外消化研究

尿石素A具有许多优良的生理活性,但其极低的水溶性和生物利用率限制了尿石素A的应用。为克服上述限制,该文采用pH驱动法结合高压均质技术制备尿石素A脂质体(urolithin A liposomes,UA-LPs),并考察其结构特性、稳定性及体外消化特性。结果表明,大豆卵磷脂为20 mg/mL所制得的UA-LPs的平均粒径为(97.46±0.83)nm,多分散系数为(0.27±0.01),Zeta电位为(-40.3±1.06)mV,包埋率为(98.11±0.26)%,负载率为(2.39±0.01)%。UA-LPs在原子力显微镜下为分布均匀的球状结构。热稳定性实验表明,不同大豆卵磷脂浓度的UA-LPs的包埋率均随热处理时间的延长有所下降,20 mg/mL的大豆卵磷脂制备的UA-LPs具有最好的热稳定性,其在80℃处理180 min后仍可保留45%的尿石素A,且粒径、多分散系数变化趋势较小。pH稳定性表明UA-LPs在酸性条件下包埋率较低,随着pH的升高,粒径、多分散系数变化不显著(P>0.05),20 mg/mL的大豆卵磷脂制备的UA-LPs的Zeta电位绝对值上升5.5,稳定性升高。体外模拟消化实验表明,UA-LPs能有效提高尿石素A的转化率以及生物可接受度,其中20 mg/mL大豆卵磷脂制备的UA-LPs的体外转化率相比游离的尿石素A增加了3.26倍,生物可接受度提高2.07倍。因此,利用pH驱动法可以成功制备出UA-LPs,且高大豆卵磷脂浓度的UA-LPs物理稳定性更好,以上研究结果为扩展尿石素A在食品工业及生物医药领域的应用提供依据。

尿石素A介导p38/MAPK通路抑制破骨细胞活性

背景:过度活跃的破骨细胞可破坏骨稳态,并在骨质疏松、脆性骨折、骨关节炎等相关性骨骼疾病的病理机制中起重要作用。研究证实,鞣花酸和鞣花单宁有抑制破骨细胞分化的潜能,尿石素A作为其天然代谢产物,具有抗氧化、抗炎、抗增殖及抗癌作用,但其对破骨细胞分化的影响及其潜在的分子机制尚不清楚。目的:探讨尿石素A对核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞分化的影响及作用机制。方法:体外培养稳定生长的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7),使用细胞毒性MTS实验检测不同浓度尿石素A(0,0.1,0.5,1.5,2.5μmol/L)对RAW264.7细胞的毒性,筛选出安全作用浓度。再使用不同浓度的尿石素A干预核因子κB受体活化因子配体诱导的RAW264.7细胞体外分化过程,进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色和肌动蛋白环及细胞核染色,观察尿石素A对破骨细胞形成和功能的影响。最后通过Western Blot及RT-qPCR实验,观察尿石素A干预后丝裂原活化蛋白激酶信号通路中上下游基因和蛋白的表达情况。结果与结论:①尿石素A呈浓度依赖性地抑制体外破骨细胞分化及肌动蛋白环形成,2.5μmol/L的抑制作用最强;②尿石素A可抑制与破骨形成及骨吸收相关的Nfatc1、Ctsk、Mmp9、Atp6v0d2基因的表达及Nfatc1、Ctsk蛋白的合成;③尿石素A可通过抑制p38蛋白的磷酸化,抑制丝裂原活化蛋白激酶信号通路传导,从而抑制破骨细胞的活性。

尿石素A对高脂饮食老龄小鼠白色脂肪棕色化的影响

目的探讨尿石素A对高脂饮食老龄小鼠白色脂肪棕色化的影响。方法老龄小鼠18只随机分为对照组、高脂饮食组(HFD)和尿石素A干预组(UA),每组6只。UA组小鼠予尿石素A灌胃(吐温-80助溶),对照组和HFD组给予等剂量的吐温-80灌胃。实验结束后,记录各组小鼠的体质量和产热量,HE染色观察脂肪组织形态,qRT-PCR和Western blot检测棕色脂肪相关基因解偶联蛋白1(UCP1)、过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)与过氧化物酶体增殖体激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)的表达。结果与对照组相比,HFD组小鼠的体质量明显增加,日间产热量[(0.45±0.03)kcal/h vs.(0.62±0.05)kcal/h]和夜间产热量[(0.49±0.05)kcal/h vs.(0.73±0.06)kcal/h]均显著降低(P<0.05),脂肪细胞体积变大,UCP1、PPARγ与PGC-1α的转录表达降低(P<0.05)。而尿石素A干预降低高脂饮食小鼠的体质量,增加日间产热量[(0.57±0.03)kcal/h vs.(0.45±0.03)kcal/h]和夜间产热量[(0.69±0.07)kcal/h vs.(0.49±0.05)kcal/h],减小脂肪细胞体积,促进UCP1、PPARγ与PGC-1α的转录表达(P<0.05)。结论尿石素A促进高脂饮食小鼠白色脂肪棕色化。

尿石素A通过激活Nrf2/HO-1通路保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨尿石素A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及分子机制。方法连云港市第二人民医院全科医学科实验SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、低剂量(Low-dose)组、中剂量(Middle-dose)组和高剂量(High-dose)组,每组15只。除Sham组外,其余各组均构建脑缺血再灌注(I/R)大鼠模型并给予不同剂量的尿石素A干预,剂量依次为0、5、10以及20mg·kg^(-1)。再灌注24h后,评估脑梗死体积,脑组织含水量以及神经行为;苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化;ELISA法分别测定白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等炎症因子的表达水平;同时,检测脑组织中丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等活性;最后,Western blot法检测Nrf2和HO-1等相关蛋白的相对表达量。结果与Sham组相比,Model组的脑梗死体积,脑组织含水量以及神经功能学评分显著升高(^(均)P<0.05);苏木精-伊红染色显示,缺血侧脑组织病理损伤严重,神经细胞排列紊乱;各促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著升高(^(均)P<0.05);脑组织中MDA含量明显升高(P<0.01),而GSH、SOD、和GSH-PX含量明显降低(P<0.01);Western blot显示,Nrf2和HO-1蛋白的相对表达量显著降低(^(均)P<0.01)。与Model组相比,经不同剂量的尿石素A治疗后,脑损伤大鼠的脑梗死面积、脑组织含水量以及神经功能学评分显著降低(^(均)P<0.05);苏木精-伊红染色显示,缺血侧脑组织病理损伤情况得到明显改善;ELISA检测显示,IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子表达水平降低(^(均)P<0.05);同时,脑组织中MDA含量明显降低(P<0.05),而GSH、SOD、和GSH-PX含量明显升高(^(均)P<0.05)另外,Western blot显示,Nrf2和HO-1蛋白的相对表达量显著增加(^(均)P<0.05)。结论尿石素A通过抗氧化作用对大鼠脑缺血模型再灌注损伤具有一定的保护作用,其或许与Nrf2/HO-1信号通路有关。

肾阳虚证与尿石形成相关性及温肾化石汤调节

目的研究肾阳虚证与含钙尿石形成相关性。方法 60例含钙尿石症肾阳虚型30例,其它证型30例,测定尿pH值、24 h尿量、尿石形成促进物与抑制物含量,肾阳虚证组服中药温肾化石汤,其它证型组服用相应辨证方药。结果肾阳虚组尿pH值、24 h尿量、尿石形成促进物———尿钙、磷、草酸含量高于其它证型组,尿石形成抑制物———尿镁、柠檬酸、甘胺聚糖含量低于其它证型组,差异显著。肾阳虚证组服中药温肾化石汤后,可提高含钙尿石形成抑制物水平,降低含钙尿石形成促进物含量。结论肾阳虚是含钙尿石形成与复发的中医病因病机。

尿石素在精神疾病中的神经调节作用及应用前景

精神疾病是一类病因未明、多因素引起的思维、情感、行为以及社交功能的异常状态。随着精神疾病的发病率不断上升,有效的治疗药物却进展缓慢,因此,新药物的开发和应用成为当今研究的热点话题。近年来,尿石素作为一种天然活性物质成分引起了研究人员的广泛关注,它可以通过血脑屏障发挥抗炎、抗氧化应激、抗凋亡等神经保护作用,被认为是调节神经系统的活性小分子,具有潜在的临床应用前景。目前尿石素应用于精神疾病的研究尚未见相关报道。本文对近年来国内外关于尿石素在精神疾病中可能存在的神经调节机制和治疗潜力进行综述,旨在为精神疾病的研究提供新的方向,并为尿石素在精神疾病治疗药物开发和临床转化的科学应用提供新思路。

尿石素A抗癌作用及其机制研究进展

尿石素A是天然药物鞣花鞣质在体内经肠道菌群多级代谢后产生的物质,研究表明其具有很好的抗肿瘤活性,因此,针对国内外关于尿石素A对膀胱癌、肝癌、乳腺癌、白血病、前列腺癌、结直肠癌等多种癌症的抗癌活性研究进行综述,可为尿石素A作为潜在抗癌药的临床研究提供参考。

尿石素A对转化生长因子-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞纤维化的影响

为探究尿石素A(urolithin A,UA)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化的干预效果和潜在作用机制,本研究建立转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的HK-2纤维化模型,考察对照组、TGF-β1模型组(4 ng/mL处理48 h)、UA低浓度组(5μg/mL UA+4 ng/mLTGF-β1)、UA高浓度组(10μg/mL UA+4 ng/mLTGF-β1)对HK-2细胞的影响。试验结果表明:UA干预能改善TGF-β1引起的HK-2形态变化并显著降低细胞纺锤体指数(P<0.01);降低纤维化标物Col I、Col III、Vimentin、Snail和Slug和炎症标志物IL-1β、IL-6、MCP-1、NLRP3的表达(P<0.01);下调MAPK和TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的相对表达(P<0.01)。上述研究表明UA能减轻TGF-β1诱导的HK-2细胞纤维化,其作用的机制可能是通过下调MAPK和TGF-β1/Smads信号通路来实现的。本研究能为开发天然活性成分UA用于延缓肾纤维化提供新方法。

尿石素A抑制BMMs向破骨细胞分化

目的探究尿石素A对小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化的影响。方法提取小鼠骨髓腔BMMs,通过CCK-8法检测尿石素A对BMMs的增殖毒性,使用核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导BMMs向破骨细胞分化并与浓度梯度尿石素A共培养,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测破骨细胞数量和面积大小,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测破骨分化相关基因水平表达,2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果CCK-8法检测结果显示,尿石素A在16μmol/L范围内对BMMs无明显毒性;TRAP染色结果表明,尿石素A显著抑制了BMMs向破骨细胞分化,成熟破骨细胞数目和面积减少(P<0.01);RT-qPCR检测结果显示,尿石素A明显抑制了破骨分化相关基因(C-FOS、CTSK、MMP9、ACP5)的相对表达水平(P<0.01);DCFH-DA检测结果显示,尿石素A明显降低了RANKL诱导的高ROS水平。结论尿石素A能抑制RANKL诱导的BMMs向破骨细胞分化,并降低分化过程中的ROS,有望作为骨质疏松治疗的潜在药物。

尿石素A治疗骨性关节炎的作用机制研究进展

在全球人口老龄化以及肥胖加剧的现状下,骨关节炎(OA)的患病率居高不下。这不仅会造成巨大的社会经济负担,也会在很大程度上降低老年人日常生活幸福指数以及增加老年残疾率。虽然疾病的诊疗正在不断的优化,但目前还没有药物能同时改变OA症状和疾病的进展,药物治疗多是仅限于疼痛管理。经研究证实,尿石素A(UroA)具有多方面的作用,例如抗炎、抗衰老、改善线粒体健康、减少软骨变性、有益的改善肌肉健康等,这与OA的发生发展因素相互匹配。

尿石素A通过TLR4/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎的保护作用及机制

目的探讨尿石素A(UroA)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺损伤的保护作用及机制。方法36只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、SAP组及UroA组,每组12只。采用逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液的方法构建SAP大鼠模型。UroA组于SAP造模后灌胃UroA溶液(10 mg/kg),每6 h灌胃给药1次,共4次。建模24 h后,统计各组大鼠腹水量,检测血清脂肪酶(LPS)水平,酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,HE染色观察胰腺组织病理损伤情况;实时荧光定量PCR分析胰腺组织IL-6、TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、MyD88、核转录因子(NF)-κB mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法检测胰腺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与Sham组相比,SAP组大鼠血清LPS、IL-6、TNF-α水平升高,腹水量及胰腺病理学评分增加(P<0.05),胰腺IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA水平升高(P<0.05),TLR4、MyD88、NF-κB p65的蛋白水平升高(P<0.05);与SAP组比较,UroA组大鼠胰腺病理损伤改善,血清LPS、IL-6、TNF-α水平降低,TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及mRNA水平降低(P<0.05)。结论UroA应用可改善SAP大鼠胰腺病理损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活化,从而抑制炎症反应有关。

肾阳虚证与含钙尿石形成抑、促进物质相关性临床研究

目的:观察肾阳虚证与含钙尿石形成抑、促进物质相关性。方法:60例含钙尿石症患者,中医辨证分型肾阳虚型30例,其它证型30例,测定新鲜晨尿PH值、24小时总尿量、尿石形成促进物与抑制物含量。结果:肾阳虚组尿PH值、24小时总尿量明显高于其它证型组,差异有显著性;尿石形成促进物-尿钙、磷、草酸含量,肾阳虚组明显高于其它证型组,差异显著或极为显著;尿石形成抑制物-尿镁、柠檬酸、甘胺聚糖含量,肾阳虚组明显低于其它证型组,差异显著或极为显著。结论:肾阳虚是尿石形成与复发的中医病因病机。

超分辨率成像研究尿石素不同亚型对线粒体形态亚群差异分布的影响

目的使用结构光照明显微镜(SIM)揭示3种尿石素亚型对细胞线粒体毒性的差异。方法通过SIM对尿石素孵育后的细胞线粒体超分辨成像,使用图像处理软件Image J进行数据分析。结果SIM在药物浓度10.0μmol/L时即可检测到3种药物亚型的细胞毒性。CCK-8(cell counting kit-8)与SIM在药物浓度40.0μmol/L时均检测到尿石素C的毒性最强。结论尿石素A、B、C 3种亚型中UC的毒性最强。使用超分辨成像技术显微镜在亚细胞水平进行毒性检测,可准确评估和量化低浓度的药物的毒性,促进药物分析和新药研发。

上尿路结石术后化瘀尿石汤联合围术期干预的效果

目的探讨上尿路结石术后患者应用化瘀尿石汤联合围术期干预的临床效果。方法选取2020年8月—2021年8月谷城县人民医院收治的98例上尿路结石患者,用随机数字表法归为对照组(49例)、研究组(49例)。对照组给予经皮肾镜碎石术(PCNL)联合围术期护理干预,观察组在其基础上联合化瘀尿石汤,2组均治疗6周并随访8周。比较2组治疗后并发症、肾绞痛、结石排净情况及治疗前后肾功能。结果治疗后观察组结石排净率高于对照组,肾绞痛发生率低于对照组;与治疗前相比,治疗后2组24 h尿枸橼酸、血清SOD水平均升高,观察组比对照组高;血清β_(2)-MG、NAG、THP、ITIH3水平均降低,观察组比对照组低(P<0.05)。结论化瘀尿石汤联合围术期干预可有效降低上尿路结石术后患者肾绞痛发生率,提升净石率,同时可改善机体肾功能。

尿石通消糖浆标准提高

目的提高尿石通消糖浆的质量标准。方法对制剂中的石韦药材进行薄层色谱定性鉴别;同时增加黄芩苷含量的高效液相色谱法测定。结果在石韦的薄层色谱鉴别中,斑点清晰且阴性对照无干扰。黄芩苷在3.892~194.6μg/mL范围线性关系良好(r2=0.9995),加样平均回收率为93.6%,RSD为0.63%(n=6)。结论新建立的质量控制方法专属性强、重复性好,可提高尿石通消糖浆的质量控制标准。

抗衰老药物尿石素A合成工艺优化研究

尿石素A具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗癌等作用。目前报道的合成方法存在一定的不足,因此开发高效、简便的合成方法仍有待进一步研究。在综合考察原料成本、反应产率等因素的基础上,选取合适的合成路线,并对关键步骤(环化反应)进行优化。当2-溴-5-羟基苯甲酸和间苯二酚的物质的量比为6∶1,NaOH溶液的质量分数为5%,CuSO4溶液的质量分数为15%时,环化反应有效进行,以86%的产率获得目标产物尿石素A。

尿石通颗粒剂治疗尿石症的临床和实验研究

尿石通治疗尿路结石 12 0例 ,另设对照组 (利石素组 ) 40例 ,结果结石通治疗组痊愈 115例 ,有效 5例 ,对照组痊愈 2 9例 ,有效 10例 ,无效 2例 ,两组疗效相比差异极为显著 (P <0 .0 1)。尿石通具有显著的排石、溶石效果 ,对乙二醇所致的大鼠草酸钙尿石模型具有显著的保护性防治作用 ,并能降低血肌酐、尿素氮水平 ,改善尿石所致的肾功能损害 。

体外冲击波碎石合尿石2号治疗尿石症208例

尿石症是泌尿系统的一种常见病、多发病,对其治疗不外手术和药物保守治疗.上世纪80年代体外冲击波碎石(ESWL)的问世,以其对患者机体损伤较小,费用低廉,效果确凿而为广大患者所接受,在尿石症非开放性手术治疗方面展开了新的一页.我科应用ESWL合尿石2号中西医结合治疗尿路结石效果显著,现总结如下:

尿石基质中的葡萄糖氨基聚糖

Boyce 等在1956年报告含钙尿石基质中的萄萄糖氨基聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)以来,GAGs 在尿石形成中所起作用已引起人们的关注。很多作者分析了尿石的基质成分,Hata等在1972年报告用二次电泳分析 GAGs,为快速微量分析尿石基质中 GAGs 提供了有效手段。

尿石抑制因子作用机理的体外实验研究

采用体外籽晶——亚稳过饱和溶液晶体生长抑制实验法证实:柠檬酸、焦磷酸对一水草酸钙晶体生长有强烈的抑制作用。对其作用机理作了初步探讨。由于镁竞争性结合柠檬酸,降低了柠檬酸增加草酸钙溶解度的作用。因此,在防治尿结石时,不宜同时使用柠檬酸钾和镁剂。