转录因子GATA结合蛋白2在奶牛瘤胃上皮细胞中对尿素转运因子-B基因启动子的作用研究

本研究旨在探明转录因子GATA结合蛋白2(GATA2)在奶牛瘤胃上皮细胞中对尿素转运因子-B(UT-B)基因启动子的作用。首先构建UT-B基因的启动子载体与GATA2真核表达载体,二者共转染奶牛瘤胃上皮细胞,通过荧光素酶报告基因研究GATA2过表达对UT-B基因启动子转录活性的调控作用。不同浓度(0.5、1.0和1.5 mmol/L)尿素作用下,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测氮转运相关基因UT-B、GATA2、水通道蛋白3(AQP3)的基因表达量,Western blot检测其蛋白表达量。结果表明:1)1.0 mmol/L尿素可显著提高体外培养条件下奶牛瘤胃上皮细胞UT-B、GATA2及AQP3基因和蛋白表达量(P<0.05)。2)奶牛瘤胃上皮细胞中,GATA2显著上调UT-B-1、UT-B-2基因启动子活性(P<0.05)。由此可见,GATA2影响氮转运相关基因(AQP3、UT-B)转录变化且对UT-B基因启动子具有调控作用,这对探明奶牛瘤胃氮再循环的机制,丰富奶牛氮素营养理论具有重要意义。