尿素酶预处理-气相色谱-质谱法在甲基丙二酸尿症诊断中的应用

目的探讨尿素酶预处理-气相色谱-质谱法（UP-GC-MS）在甲基丙二酸尿症（MMA）诊断、治疗中的价值。方法留取8例MMA患儿和15例同年龄健康儿童晨尿2mL,尿液标本经尿素酶去尿素、加内标正十七酸、除蛋白、真空干燥处理,残余物用双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺/三甲基氯硅烷（BSTFA/TMCS）衍生后进样,分析仪器为Finnigan GC-MS联用仪,每次取样0.5-1.0μL,扫描模式为全扫描加选择离子扫描模式,分流比10∶1,起始温度60℃,然后以17℃/min的速度升温至320℃。质谱电离方式为电子解离模式,扫描范围为m/z50-m/z650。应用SPSS12.0软件进行t检验。结果患儿尿液中可检测到明显的甲基丙二酸、甲基枸橼酸等MMA患儿尿液标志物信号。在总离子流图上,其绝对保留时间（相对保留时间）分别是6.78min（0.396min）和11.53min（0.24min）。在质谱图上,甲基丙二酸的特征离子（三甲基硅烷化后质荷比,TMSm/z）分别为73、147、247。8例MMA患儿尿液甲基丙二酸水平为1.72-18.2nmol/mgCr;健康对照组15例儿童为0.001-0.202nmol/mgCr。经过lg（x＋5）对数转换后（其中x为原始数据）,病例组尿液甲基丙二酸水平为（0.703±0.005）,健康对照组为（0.973±0.184）,二组比较差异具有统计学意义（t=4.10P〈0.01）。结论建立UP-GC-MS分析尿液代谢成分超越了有机酸萃取法的一些局限,是MMA确诊的重要方法。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法在多种羧化酶缺陷病诊断治疗中的应用

目的 多种羧化酶缺陷病临床表现特异性不强 ,然而却是一种可用生物素治疗的遗传性代谢病。该文旨在探讨尿素酶预处理气相色谱 质谱法分析尿液成分在多种羧化酶缺陷病诊断和治疗中的应用价值。方法 尿素酶预处理气相色谱 质谱法分析 3例多种羧化酶缺陷病患儿生物素治疗前后的尿液成分 ,并整理分析其临床表现、诊治经过及预后等。结果 3例患儿临床表现特异性不强 ,但其尿液中均含有大量的 3 羟基异戊酸、3 甲基巴豆酰甘氨酸、3 羟基丙酸和甲基枸橼酸 ,其中 2例乳酸含量也高于正常对照。依据以上结果诊断多种羧化酶缺陷病 ,以生物素治疗后临床表现明显改善 ,尿液复查上述异常产物恢复到正常水平。结论 尿素酶预处理气相色谱 质谱法分析尿液成分是多种羧化酶确诊的重要方法 ,对于判断生物素疗效 ,调整用药剂量也有一定参考价值。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法选择性筛查遗传代谢病高危患儿327例初步研究

目的 通过对遗传代谢病高危患儿尿液成分进行生化分析 ,筛查遗传代谢病 ,为临床诊断和治疗提供实验依据。方法 收集遗传代谢病高危患儿尿液标本 ,经去尿素、加内标、除蛋白、真空干燥、三甲基硅烷基衍生等处理后 ,应用气相色谱 -质谱联用仪分析尿液中有机酸、氨基酸、糖类、多醇、嘌呤、嘧啶等成分。这一流程在国际上被称为尿素酶预处理 气相色谱 质谱法。结果 对来自中国大陆 6省、区和直辖市的 3 2 7例遗传代谢病高危患儿的尿液标本进行检测 ,共筛查出遗传代谢病 16种 2 7例 ,阳性率为 8.2 6% ,其中高苯丙氨酸血症、甘油尿症和Leigh综合征各 3例 ,丙酸血症、甲基丙二酸尿症、vonGierke病、果糖 1,6 二磷酸酶缺陷病、果糖尿症各 2例 ,多种羧化酶缺陷病、戊二酸血症Ⅰ型、枫糖尿病、高甘氨酸血症、3 氨基异丁酸尿症、半乳糖血症、瓜氨酸血症Ⅱ型及Fanconi综合征各 1例。经临床干预虽然仍有部分患儿预后不良 ,但多种羧化酶缺陷病、甲基丙二酸尿症、半乳糖血症等患儿获得较好的治疗效果。其余患儿的病情有待追踪观察。结论 应用尿素酶预处理 气相色谱 质谱法分析尿液成分 ,是筛查某些遗传代谢病的有效方法 ,检测结果可为患儿的诊断和治疗提供有效指导。

尿素酶预处理-气相色谱-质谱法诊断琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱 质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋白、真空干燥处理 ,残余物进行三甲基硅烷化衍生后进样行GC MS法分析。尿液中可检测到明显的 4 羟基丁酸、2 ,4 二羟基丁酸、3,4 二羟基丁酸和 4 ,5 二羟基己酸信号。在TIC图上 ,其绝对保留时间 (相对保留时间 )分别是 6 32min(0 4 34) ,7 80min(0 5 36 ) ,7 94min(0 5 4 6 ) ,8 80min ,8 90min(0 6 0 5 ,0 6 12 )。在质谱图上 ,其特征离子 (m z,TMS)分别是M 15 (2 33,2 ) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (349,3)。GC MS法分离鉴定尿液代谢成分 ,可作为诊断该病的一种可靠手段。

气相色谱-串联质谱法测定牛肉中4种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂的残留量

提出了气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)测定牛肉中4种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂(吡噻菌胺、氟唑菌苯胺、氟唑菌酰羟胺和苯并烯氟菌唑)残留量的方法。取5 g绞碎的牛肉样品,以10 mL体积比1∶1的环己烷-乙酸乙酯混合溶液提取两次,2.0 mL乙腈净化。分取1.0 mL乙腈层,于40℃水浴氮吹至近干,用1.0 mL正己烷溶解残渣,过0.22μm有机滤膜,滤液按照仪器工作条件进行测定。4种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂在柱升温程序下分离,在多反应监测模式下检测,基质匹配法绘制工作曲线,外标法定量。结果显示:4种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂工作曲线的线性范围均为0.2~20.0μg·L^(-1),检出限(3S/N)均为0.08μg·kg^(-1);对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为89.8%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.74%~4.5%;方法用于12份实际样品分析,均未检出目标物。

奶酪中氨基甲酸乙酯含量GC-MS/MS检测预处理条件优化

该研究建立气相色谱-三重四级杆串联质谱(GC-MS/MS)法测定奶酪中氨基甲酸乙酯含量的外标定量检测方法,对样品预处理条件进行优化,并对该检测方法进行方法学考察。结果表明,最佳前处理条件为在样品中加2 mL去离子水混匀,加入1 mL乙腈提取,于0℃、转速6000 r/min条件下离心8 min,上清液采用碱性硅藻土固相萃取柱(2 g/10 mL)净化,正己烷淋洗,20 mL二氯甲烷洗脱,对洗脱液氮吹至约0.5 mL,甲醇定容后GC-MS/MS检测,外标法定量。该检测方法在5~200 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数R2>0.99。定量限为0.01 mg/kg,检出限为0.005 mg/kg,在高中低三个添加水平的加标回收率试验中,回收率为69.1%~90.7%,精密度试验结果的相对标准偏差(RSDs)为4.2%~11.1%。该方法便于操作,检测结果准确,适用于奶酪中氨基甲酸乙酯含量的测定。

非衍生化-气相色谱-串联质谱法测定植物油中5种植物甾醇

目的 基于脂肪酶对脂肪的酶解作用,构建了一种室温皂化的前处理方式,将植物油中结合态的甾醇酯高效游离出来,利用气相色谱-串联质谱法(gas chromatography-tandem mass spectrometry,GC-MS/MS)建立植物油中的菜籽甾醇、β-谷甾醇、芸薹甾醇、豆甾醇、环阿屯醇5种甾醇的检测方法。方法 植物油经脂肪酶酶解、碳酸钾-乙醇溶液皂化后将甾醇游离出来,利用正己烷萃取,采用HP-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm)分离,GC-MS/MS多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式进行检测外标法定量。结果 在弱极性色谱柱HP-5MS上5种甾醇色谱行为良好;缓冲溶液pH为9.0、脂肪酶用量为0.05 g、酶解20 min时酶解效果最好,室温条件进行皂化,正己烷作为萃取溶剂,β-谷甾醇及其他4种甾醇的线性范围分别为0.05~50.00 mg/L和0.05~20.00 mg/L,相关系数均大于0.999,方法的加标回收率在84.7%~101.6%之间,相对标准偏差为1.4%~4.1%,5种甾醇的检出限为3.0 mg/kg,定量限为10.0 mg/kg。结论 本研究开发的方法简便快速,便于植物油中甾醇的快速测定。

尿素络合法分离-气相色谱/同位素质谱法分析土壤和植物中低含量(ppm级)正构烷烃的碳同位素

尿素络合法和5？分子筛法是常用的分离富集环境样品中正构烷烃的方法，但由于复杂的处理流程对于低含量正构烷烃的回收率普遍较低。本文通过优化尿素络合法分离富集正构烷烃的实验条件，建立了尿素络合法分离-气相色谱/同位素质谱分析土壤和植物中低含量正构烷烃单体碳同位素的方法。即采用正己烷-丙酮溶解样品，在4℃冰箱中与2 mL尿素-甲醇饱和溶液反应48 h；用去离子水溶解尿素络合物，加入正己烷后分离出有机相和水相，分别用正己烷、丙酮-正己烷萃取有机相和水相中的正构烷烃。中长链正构烷烃的回收率达79%~104%，高于5？分子筛法和已有尿素络合法的富集效果；单体碳同位素的分析精度为0.09‰~0.63‰（1σ）。利用改进的方法分析实际样品，大幅降低了未分峰和共流出物的干扰，提高了实际样品中ppm级中长链正构烷烃的回收率。

气相色谱-质谱法测定尿素产品中的煤气化有机物

采用气相色谱-质谱法测定分析尿素产品变色的原因。样品采用三氯甲烷萃取,通过RTX-5MS色谱柱分离,并用GC-MS联用技术对萃取物进行分析,从中分离鉴定了11个成分。结果表明:尿素萃取液中含有甲苯(6.64%),邻硝基苯胺(1.68%),直链烃类(87.23%),邻硝基苯导致尿素变色,并为下一步检测二氧化碳提供依据。

气相色谱-质谱法检测遗传代谢性疾病高危患儿

目的了解北京地区遗传性代谢性疾病(IMD)的发病情况。方法利用气相色谱-质谱法(GC-MS)对IMD高危儿进行尿液化学分析。结果 411例IMD高危儿中检测出代谢异常269例(65.5%),其中确诊IMD 19例(4.6%),包括甲基丙二酸血症15例,丙酸血症、高苯丙氨酸血症、尿素循环异常和焦谷氨酸尿症各1例;疑似IMD 22例(5.4%),包括乳酸血症13例,原发性甘油尿症5例,脂肪酸代谢异常4例,Citrin缺陷症、酪氨酸血症、半乳糖血症、3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症、枫糖尿症各1例;其他代谢异常228例(55.5%),表现为尿乳酸、蔗糖、乳糖、半乳糖、N-乙酰酪氨酸、琥珀酸、双羧酸水平增高以及丝氨酸/苏氨酸比例异常等。结论甲基丙二酸血症为北京地区最常见的IMD,对不能明确病因的患儿应尽早行GC-MS检测,必要时联合应用串联质谱检测和基因分析诊断。

不同方法提取姜油及其化学成分的气相色谱-质谱法比较分析

目的研究不同方法提取姜油成分的不同。方法以生姜粉为原料,分别采用超声复合酶法和超声法从生姜中提取得到姜油,运用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析鉴定研究不同方法下姜油化学成分及相对含量。结果两种方法提取姜油的得率分别为(6.72±0.02)%和(6.60±0.04)%;超声复合酶法提取得到的姜油中共鉴定出53种成分,超声法提取得到的姜油中共鉴定出44种成分,两种方法提取的姜油在主要成分上差别不大,前期和中期主要为萜类及其氧化物,后期主要是姜油树脂成分,但超声复合酶法提取所得姜油成分含量最高的为姜酚25.36%,其次是姜烯18.12%,超声法提取所得姜油成分含量最高的为姜烯24.41%,其次是姜酚20.14%。结论不同方法提取的姜油在挥发性成分和非挥发性成分含量上存在差异,这为姜油在实际生产中的应用提供参考。

6种水果中键合态香气成分的气相色谱-质谱法鉴定与比较

以菠萝、草莓、苹果、梨、香橙和红提6种水果为研究对象,通过Amberlite XAD-2树脂吸附、乙醇洗脱的方法,分离得到其对应的键合态香气成分,酶解后所释放的香气成分经气相色谱-质谱检测分析,得到各水果中键合态香气成分的种类和含量。结果表明,各种水果所鉴定出的键合态香气物质种类分别为:苹果18种、梨33种、草莓32种、香橙13种、菠萝15种、红提16种。其中,醇、酚类物质含量总体相对较高,草莓中键合态香气物质的总含量最为丰富,达34.29 mg/L。苯甲醇、苯乙醇、丁香酚等香气成分在至少3种水果中被检出。各种水果中含量较高的键合态香气种类有所不同。部分水果中的键合态香气物质在文献中鲜见报道。

半乳糖血症患儿尿液气相色谱-质谱结果分析

目的应用气相色谱-质谱(GC-MS)技术检测10例半乳糖血症患儿治疗前后尿液,以建立半乳糖血症的化学诊断方法。方法留取10例半乳糖血症患儿治疗前后尿液和60例同年龄段正常儿童尿液,尿液经尿素酶处理后用GC-MS检测尿代谢产物。结果半乳糖血症患儿尿中检测出至少34种代谢物,其中半乳糖、半乳糖醇、半乳糖酸、酪氨酸、4-羟基苯乙酸、4-羟基苯乳酸水平均较正常对照组明显升高(P均<0.05),二氢尿嘧啶水平较正常对照组显著降低(P<0.05),治疗后除4-羟基苯乳酸外,其他均恢复至正常范围。结论GC-MS检测尿中半乳糖、半乳糖醇、半乳糖酸水平可诊断半乳糖血症。

遗传性代谢病高危婴幼儿4710例尿素酶预处理-气相色谱-质谱技术筛查分析

目的：通过尿素酶预处理-气相色谱-质谱法（UP-GC-MS）检测4710例高危婴幼儿遗传性代谢病（IMD）及代谢紊乱的发病率，为临床诊断和治疗提供依据。方法对高危婴幼儿尿液样本经过去尿素、加内标、除蛋白、真空干燥、三甲基硅烷基衍生等处理后，应用尿素酶预处理-气相色谱-质谱联用仪分析尿液中有机酸、氨基酸、糖类、多醇、嘌呤和嘧啶等成分，以健康儿童色谱质谱检测值作为参考值，分析质谱检测结果，并进行代谢分析，最后结合临床高危表现和一般生化检测及其他特殊检查等临床资料进行代谢诊断。结果4710例高危儿中，确诊 IMD 98例（2.1％）、疑诊 IMD 患儿326例（6.9％）、代谢异常患儿2610例（55.4％），其余1676例未见异常。其中确诊 IMD 包括甲基丙二酸尿症57例，丙酸血症12例，戊二酸血症7例，高苯丙氨酸血症、枫糖尿症和多种羧化酶缺陷症各5例，异戊酸血症4例，4羟基丁酸尿症3例。结论 UP-GC-MS 是诊断高危婴幼儿 IMD 和代谢紊乱的有效方法，广东地区常见的 IMD 为甲基丙二酸尿症、丙酸血症、戊二酸血症、高苯丙氨酸血症、枫糖尿症和多种羧化酶缺陷症，检测结果可为患儿的诊断和治疗提供有效指导。

HS-SPME-GC-MS分析毛虾酶解液挥发性成分

为得到风味良好的毛虾酶解液,将毛虾经木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶单酶水解,采用顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对毛虾提取液及不同酶解液的挥发性成分进行鉴定和分析,探讨酶解对毛虾风味的影响。结果表明,4个样品分别检出48、65、67、70种成分,主要有醇类、醛类、酮类和吡嗪类等,它们的协同作用构成了毛虾及其酶解液的特征气味。酶解后酮类、吡嗪类和含氮、含氧、含硫化合物的增加,刺激性气味的醛类物质含量的减少是酶解液风味优于提取液的主要原因。挥发性成分种类和含量的不同是不同酶解液风味差异的原因,木瓜蛋白酶酶解液的风味最佳。酶解液能够保持并改善毛虾风味,所制备的酶解液具有较好的应用前景。

SPME-GC-MS分析近江牡蛎酶解液挥发性风味成分

为得到风味良好的牡蛎酶解液,将新鲜的近江牡蛎肉经木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解,采用固相微萃取-气相色谱-质谱(SPME-GC-MS)联用法分析、鉴定牡蛎肉原料和酶解液的挥发性风味成分,探讨酶解对牡蛎风味的影响。经NIST98质谱数据库检索和文献对照,3个样品分别检出57、60、62种成分,主要有烃类、醇类、醛类、酮类和含硫化合物等,它们的协同作用构成了牡蛎及其酶解液的特征气味;其中牡蛎肉含有较多的酮类化合物,而酶解后则含有较多的醛类和脂类化合物,3个样品中均检出了较多的醇类化合物,归一化含量分别高达40.24%、41.20%和43.28%,中性蛋白酶制备的酶解液比木瓜蛋白酶制备的酶解液风味更加柔和。结果表明:酶解反应能够保持并改善牡蛎的风味,所制备的酶解液具有较好的应用前景。

酶处理对暑季安溪铁观音香气品质的影响

为改善暑季安溪铁观音的品质,对暑茶在加工过程中进行了添加漆酶、α-半乳糖苷酶和复合酶的处理。对加工得到的茶样进行感官审评比较并采用气相色谱-质谱法(GC-MS)检测茶叶的挥发性组分。结果表明,经过酶处理的茶样的香精油总量均大于对照样。α-半乳糖苷酶能显著增加醛类和醇类含量,漆酶能显著增加酯类含量,两种酶都能显著增加烯烃类含量。橙花叔醇、法呢烯和吲哚是铁观音中最重要的赋香成分,这3种组分在酶处理样中的含量均有所增加。感官审评结果表明,经复合酶处理后,暑茶青气消失,花香显现。感官审评和GC-MS检测均表明酶处理可以明显改善暑茶的香气品质。

同时适用ELISA和GC-MS快速测定猪肉中盐酸克伦特罗的前处理方法研究

建立同时适用于ELISA和GC-MS方法快速测定猪肉中盐酸克伦特罗残留量的前处理方法。猪肉样品在碱化的条件下用乙酸乙酯提取,再用稀盐酸萃取去除脂肪,调pH值后再经乙酸乙酯反萃取,乙酸乙酯反萃取液均分成两份用氮气吹干,一份加水用于ELISA检测,另一份经双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,采用选择离子模式(m/z86、212、262、277)进行测定,外标法定量,GC-MS检出限为0.30μg/kg。在加标浓度为1.0、2.0、5.0μg/kg时,加标回收率为72.1%～105.6%(ELISA)和79.1%～95.7%(GC-MS),批间相对标准偏差(RSD)为12.5%～16.8%(ELISA)和4.6%～6.9%(GC-MS)。衍生物的峰面积与样品浓度在0.005～1.000mg/L范围内呈良好的线性关系,线性回归系数大于0.999。

猕猴桃根石油醚提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性及GC-MS成分分析

采用酶活性测定法及气相色谱-质谱法对猕猴桃根石油醚提取物的α-葡萄糖苷酶抑制作用及组成成分进行研究。酶活性结果表明,提取物对α-葡萄糖苷酶在最大考察浓度的抑制率可达(89.38±1.27)%,优于同浓度下的阿卡波糖。气相色谱-质谱法分析结果表明,从提取物的甲酯化和非甲酯化样品中共检测鉴定出49种成分,甲酯化样品中检测鉴定了20种,非甲酯化样品中检测鉴定了29种,其中亚油酸乙酯、油酸乙酯、棕榈酸乙酯的相对含量总和占流出峰总面积的61.484%。猕猴桃根石油醚提取物含有的亚油酸、亚油酸甲酯、亚油酸乙酯可能是猕猴桃根石油醚提取物抑制α-葡萄糖苷酶的主要物质。

外源酶对陈年武夷岩茶香气品质的改善作用

为研究外源酶对陈年武夷岩茶挥发性成分的影响,运用气相色谱-质谱联用技术(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)、感官评价和香气活性值(odor activity value,OAV)方法对酶处理后的武夷岩茶进行分析。GCMS分析结果表明,纤维素酶、果胶酶、漆酶和β-葡萄糖苷酶质量比为2∶1∶2∶3时有利于香气物质的释放,尤其对醇类、酯类及酮类香气物质释放贡献较大。感官评价和OAV值的结果表明,酶的添加能明显提高武夷岩茶的花香、甜香和木香,复合酶的处理效果最佳,其次是β-葡萄糖苷酶。经复合酶处理后己醛、2-己烯醛和(E,E)-2,4-己二烯醛等物质含量降低,OAV减小。上述研究表明,纤维素酶、果胶酶、漆酶、β-葡萄糖苷酶及其复合酶的添加均可明显改善陈年武夷岩茶香气品质。