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题名关键基因的修饰对枯草芽孢杆菌尿苷合成的影响
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作者
杨绍梅
郭磊
班睿
谢希贤
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机构
天津大学化工学院
天津科技大学生物工程学院
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出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期56-67,共12页
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基金
国家“863计划”项目(2012AA02A701)~~
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文摘
【目的】探究磷酸核糖焦磷酸(PRPP)合成酶(prs)和氨甲酰磷酸合成酶(pyr AA/pyr AB)的点突变,以及异源5′-核苷酸酶(sdt1)的过表达,对枯草芽孢杆菌尿苷生物合成的影响。【方法】依据推断的变构位点,分别在prs基因和pyr AB基因编码序列中引入点突变;将点突变的prs基因在染色体xyl R位点整合表达,pyr AB基因则在染色体原位被修饰;sdt1基因在染色体sac B位点整合过表达。通过对重组菌摇瓶发酵液中尿苷、胞苷和尿嘧啶的分析,表征相关基因修饰对尿苷合成的影响。【结果】在PRPP合成酶中引入Asn120Ser、Leu135Ile和Glu52Gly或Val312Ala点突变,分别导致尿苷积累量提高67%和96%。进一步在氨甲酰磷酸合成酶中引入Ser948Phe、Thr977Ala和Lys993Ile点突变,导致尿苷积累量又增加了182%,达到6.97 g/L。在此基础上,过表达异源5′-核苷酸酶,导致尿苷产量增加17%,达到8.16 g/L。【结论】PRPP合成酶和氨甲酰磷酸合成酶的酶活或反馈抑制调节机制,是限制尿苷过量合成的重要因素。PRPP合成酶的Asn120Ser和Leu135Ile点突变,以及氨甲酰磷酸合成酶的Ser948Phe、Thr977Ala和Lys993Ile点突变,能够显著促进尿苷合成。PRPP合成酶附加的Glu52Gly或Val312Ala点突变,有利于尿苷合成。异源的嘧啶专一性5′-核苷酸酶的引入,也对尿苷的合成有明显的促进作用。
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关键词
PRPP合成酶
氨甲酰磷酸合成酶
5′-核苷酸酶
尿苷合成
枯草芽孢杆菌
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Keywords
PRPP synthetase
carbamyl phosphate synthetase
5′-nucleotidase
uridine biosynthesis
Bacillus subtilis
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分类号
Q936
[生物学—微生物学]
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题名三个牦牛品种(类群)尿苷一磷酸合成酶缺乏症的检测
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作者
于淼
金素钰
黄林
蒋忠荣
刘曦
郑玉才
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机构
西南民族大学生命科学与技术学院
四川省甘孜州畜牧科学研究所
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出处
《西南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2015年第4期403-406,共4页
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基金
国家公益性行业(农业)科研专项(编号:201203010)
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文摘
检测牦牛中是否存在尿苷一磷酸合成酶缺乏症(DUMPS).实验选取分布于四川省的昌台牦牛、九龙牦牛、麦洼牦牛三个品种(类群)共100头,从血液中提取基因组DNA,采用常规PCR-RFLP技术进行DUMPS的遗传缺陷检测.首先扩增牦牛尿苷一磷酸合成酶基因部分片段,再用限制性内切酶AvaⅠ酶切扩增产物,通过酶切条带数确定牦牛群体中是否存在DUMPS携带者.结果显示,所检测的100头牦牛PCR产物的酶切条带均为3条,为正常纯合子,未发现DUMPS携带者.
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关键词
牦牛
尿苷一磷酸合成酶缺乏症
PCR-RFLP
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Keywords
yak
deficiency of uridine monophosphate synthase
PCR-RFLP
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分类号
S823
[农业科学—畜牧学]
S852.23
[农业科学—基础兽医学]
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