家蚕尿苷磷酸化酶1的克隆与表达分析

【目的】通过对家蚕尿苷磷酸化酶1基因(BmUPase1)的克隆、原核表达、生物信息学分析及各组织和各时期的表达变化的研究,为揭示其在家蚕Bombyx mori中发挥的作用奠定基础。【方法】以家蚕整蚕的cDNA为模板克隆获得BmUPase1基因的编码框序列。利用生物信息学软件分析序列特性。对该基因编码的蛋白质进行原核表达,为后续制备抗体提供条件。通过qPCR对BmUPase1在家蚕各组织中和各时期的表达量进行分析。【结果】BmUPase1基因的完整ORF框序列全长1188 bp,编码395个氨基酸,分子式为C1945H3074N5380591S21,分子量大小为44.12 ku,具有尿苷磷酸化酶(UPase)超家族的保守结构域PNP_UDP_1。进化分析可知:家蚕与斜纹夜蛾Spodoptera litura、棉铃虫Helicoverpa armigera、小菜蛾Plutella xylostella、夏威夷红蛱蝶Vanessa tameamea等亲缘关系最近。qPCR结果显示BmUPase1基因在家蚕各个组织中都有表达,说明BmUPase1对于家蚕的生长发育具有重要的作用。时期表达谱结果显示,BmUPase1在家蚕化蛹、蛹期和蛾期的表达量升高,推测其与家蚕化蛹及化蛾有关。pET28a-BmUPase1重组载体在大肠杆菌BL21中成功表达,与预测大小一致。【结论】本研究首次克隆了BmUPase1基因,其在家蚕的各个组织和各个时期都有表达,可能对家蚕的生长发育具有重要的作用。对其表达模式进行分析,为进一步研究蛋白质的功能奠定基础。