两种尿蝶呤谱检测方法的比较及在高苯丙氨酸血症中的应用

目的对碘(I_(2))氧化法和二氧化锰(MnO_(2))氧化法两种前处理方法在尿蝶呤谱检测进行方法学评价,提高尿蝶呤谱在高苯丙氨酸血症(HPA)诊断及分型准确率。方法分别用I_(2)氧化法和MnO_(2)氧化法处理65例尿液样本,通过定量分析尿液中新蝶呤(N)和生物蝶呤(B)含量、比较两种方法的最低检测限、精密度和回收率,以及分析两种方法在HPA的诊断符合率。结果I_(2)氧化法和MnO_(2)氧化法处理苯丙酮尿症(PKU)、四氢生物蝶呤缺乏症(BH4D)和正常儿童尿液样本,诊断符合率均达100%。I_(2)氧化法检测的N和B浓度均高于MnO_(2)氧化法,差异有统计学意义(P<0.05)。两种方法N的检测限[I_(2)氧化法:(0.00063±0.00027)μg/L;MnO_(2)氧化法:(0.00076±0.00032)μg/L];B的检测限[I_(2)氧化法:(0.00084±0.00035)μg/L;MnO_(2)氧化法:(0.00081±0.00033)μg/L],I_(2)氧化法优于MnO_(2)氧化法。两种方法的批内精密度(CV)均较好(I_(2)氧化法和MnO_(2)氧化法N:2.54%、3.51%,B:2.43%、3.26%);批间CV I_(2)氧化法优于MnO_(2)氧化法(I_(2)氧化法和MnO_(2)氧化法N:2.26%、6.25%,B:2.75%、7.32%)。低浓度标准品回收试验,I_(2)氧化法的N回收率较差(I_(2)氧化法和MnO_(2)氧化法N:128.19%、85.7%;B:93.49%、87.55%);中、高浓度标准品回收试验N和B的回收率均良好(中、高浓度回收率分别是I_(2)氧化法N:109.90%、99.59%,B:97.57%、103.29%;MnO_(2)氧化法N:94.71%、98.41%,B:95.43%、100.5%)。两种方法在0.01~2.00μg/L范围内均有良好线性。结论I_(2)氧化法和MnO_(2)氧化法能有效鉴别PKU和BH4D,两者能满足临床检测需求;I_(2)氧化法优于MnO_(2)氧化法。

高苯丙氨酸血症患儿尿蝶呤谱分析及正常人群尿蝶呤谱参考区间的建立

目的探讨尿蝶呤谱分析、口服四氢生物蝶呤(tetrahydrobiopterin,BH_4)药物负荷试验及酸学分析在高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaninemia,HPA)诊断与分型中的意义,同时建立本地区正常人群尿蝶呤谱参考区间,为我国正常人群尿蝶呤谱参考区间的制订提供可靠数据。方法 2014年1月至2017年6月本中心正常健康人群及无先天性遗传代谢缺陷的人群859例为正常对照组,确诊的137例高苯丙氨酸血症患者为研究组,运用串联质谱(LC-MS/MS)测定血苯丙氨酸(Phe)、高效液相色谱(HPLC)对尿液蝶呤谱分析,同时根据BH_4药物负荷试验,红细胞二氢生物蝶啶还原酶(DHPR)进行分组研究,运用统计学进行差异性分析及正常人群各年龄段参考区间建立。结果 137例HPA中,BH_4反应型HPA22例,占16.05%(22/137),无反应型HPA79例,占57.66%(79/137),BH_4缺乏症36例,占26.27%(36/137),其中6-丙酮酰四氢蝶呤合成酶(6-pyruvoyl tetrahydropterin synthase deficiency,PTPS)34例,占BH_4缺乏症94.44%(34/36)例,二氢生物蝶啶还原酶(dilydropterindine reductase deficiency,DHPR)2例,占5.56%(2/36)。尿蝶呤谱PTPS缺乏组年龄差异无统计学意义(P>0.05),新蝶呤(neopterin,N)高于正常对照组和无反应型HPA组,生物蝶呤(biopterin,B)及生物蝶呤百分比(B/N+B,B%)明显低于各组,差异有统计学意义(P<0.05);BH_4反应型HPA和无反应型HPA组N、B均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而B%差异无统计学意义(P>0.05);BH_4反应型HPA与无反应型HPA两组差异无统计学意义(P>0.05)。口服BH_4药物负荷试验PTPS组血Phe浓度下降最快并在4h内降至正常,无反应型HPA组24h变化不明显,BH_4反应型HPA和DHPR缺乏组下降速度和幅度相似,但DHPR缺乏组酶活性低于正常。结论尿蝶呤谱分析对BH_4缺乏症分型及鉴别BH_4反应型HPA、无反应型HPA有辅助作用。口服BH_4药物负荷试验能快速判断血Phe对BH_4反应程度、血Phe的变化趋势,为可为HPA患者药物治疗提供依据,同时结合本地区正常人群尿蝶呤谱参考区间,为提高BH_4缺乏症诊断率及制定我国尿蝶呤谱参考值提供可参考依据。