以尿酸转运蛋白1为靶点治疗高尿酸血症药物研究进展

随着人们生活质量的提高和饮食习惯的改变,高尿酸血症的发病率逐年增加,并且趋于年轻化,成为主要的代谢性疾病。目前临床上用于治疗高尿酸血症的药物种类有限,不良反应较多,难以达到当前高尿酸血症的治疗需求,亟待开发新型降尿酸药物满足临床迫切需要。近年来国内外展开了一系列新型降尿酸药物研发,其中包括化学药物和中药等。随着研究深入,以尿酸转运蛋白1(urate transporter 1,URAT1)为抑制靶点的新型降尿酸药物研发取得了一定成果并陆续应用于临床。本文就URAT1为抑制靶点的药物研究进展作一综述,以期为新型降尿酸药物的研究及临床运用提供参考。

尿酸盐转运蛋白1在高尿酸血症/痛风中的研究进展

尿酸盐转运蛋白介导的尿酸排泄障碍是高尿酸血症和痛风的主要病因。人体内主要有3种转运蛋白调节尿酸盐在内环境的平衡,包括两种重吸收转运蛋白——尿酸盐转运蛋白1(URAT1)和葡萄糖转运体9以及一种介导尿酸盐分泌的蛋白——ABC转运蛋白2。研究尿酸盐转运蛋白对揭示高尿酸血症/痛风的发病机制、疾病防治有重要意义。该文主要介绍负责尿酸盐重吸收的URAT1的结构、组织分布、生理功能、基因组学及与其他转运体的相互作用等方面的研究进展。

北京地区汉族人群溶质载体有机阴离子转运蛋白家族1B1与载脂蛋白E基因多态性分布及其意义

目的探讨北京地区汉族人群溶质载体有机阴离子转运蛋白家族1B1(SLCO1B1)与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性分布及其临床意义。方法连续入选2019年7月至2020年1月首都医科大学附属北京安贞医院住院和门诊患者以及健康检查志愿者8132例,采用聚合酶链反应荧光探针法检测SLCO1B1(rs2306283:388 A>G,rs4149056:521 T>C)及ApoE(rs429358:388 T>C,rs7412:526 C>T)多态性位点,分析基因多态性分布情况,分别比较不同性别和不同年龄分层人群SLCO1B1与ApoE基因多态性分布、基因型分布及多态性位点突变频率的差异。结果北京地区汉族人群中共检出SLCO1B1基因8种表型,*5/*5未检测到,*1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b、*1a/*5、*1a/*15、*1b/*15、*5/*15和*15/*15检出者分别为567例(6.97%)、2619例(32.21%)、3241例(39.85%)、3例(0.04%)、473例(5.82%)、1128例(13.87%)、2例(0.02%)和99例(1.22%)。根据服用他汀类药物后发生横纹肌溶解症或肌病的风险及服用药物的剂量分为正常代谢型、中间代谢型和弱代谢型,占比分别为79.03%(6427/8132)、19.72%(1604/8132)和1.24%(101/8132)。北京地区汉族人群中共检出ApoE基因6种不同表型,ε2/ε2、ε2/ε3、ε2/ε4、ε3/ε3、ε3/ε4和ε4/ε4检出者分别为45例(0.55%)、956例(11.76%)、107例(1.32%)、5616例(69.06%)、1331例(16.37%)、77例(0.95%)。根据不同基因型发生冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑梗死、阿尔茨海默病等的风险及服用他汀类药物的疗效将其分为三大类,ApoE保护类基因型、ApoE大众类基因型和ApoE风险类基因型,占比分别为12.31%(1001/8132)、70.38%(5723/8132)和17.31%(1408/8132)。同时具有ApoE保护类基因型和SLCO1B1正常代谢型患者796例(9.79%),同时具有ApoE风险类基因型和SLCO1B1弱代谢型患者23例(0.28%)。在男性和女性人群以及年龄≤60岁和>60岁人群中,SLCO1B1均以正常代谢型占比最高,ApoE均以大众类基因型占比最高,不同性别和不同年龄分层人群SLCO1B1和ApoE基因型分布情况差异均无统计学意义(均P>0.05)。SLCO1B1及ApoE基因的上述多态性位点突变频率观察值符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05),具有群体代表性。结论本研究具有群体代表性,北京地区汉族人群SLCO1B1和ApoE基因多态性与性别和年龄分层无关,根据基因型及时调整他汀类药物用药方案,有助于实现个体化用药和安全用药。

有机阴离子转运蛋白1研究进展

有机阴离子转运蛋白1(hOAT1),主要表达于肾近曲小管上皮细胞基底膜。它可以介导有机阴离子进入其分布的细胞,进而参与肾脏对尿酸盐的分泌和重吸收过程。本文从hOAT1的分子生物学基础、主要功能、底物的特异性及其功能等进行综述。

人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证

目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性。方法采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论成功构建人源MDCKOATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。

人尿酸盐转运蛋白1及其影响因素研究进展

尿酸(uric acid,UA)是嘌呤降解的最终产物,90%以上的原发性高尿酸血症是因肾脏对尿酸盐的排泄减少所致。人尿酸经肾脏转运时需依赖肾小管上皮细胞上的转运蛋白,而人尿酸盐转运蛋白1(human uric acid transporter 1,hURAT1)在尿酸盐重吸收过程中发挥重要作用。随着研究的不断深入,研究热点逐渐从hURAT1的结构和功能转为对基因突变及药物对其影响等。该文对hURAT1及其影响因素进行综述。

有机阴离子转运蛋白在肾脏尿酸排泄中的作用研究进展

痛风及高尿酸血症是临床常见病、多发病,主要特征为血尿酸水平升高,其发生与尿酸生成增加和/或尿酸排泄不足有关。肾作为尿酸排泄的主要器官,负责机体2/3的尿酸排泄。目前研究认为,肾脏尿酸盐相关转运蛋白介导了尿酸的重吸收和再分泌,在维持人体血尿酸的稳态中发挥着重要作用,其表达异常和功能改变与高尿酸血症的发生和发展密切相关。尿酸转运相关蛋白的研究涉及尿酸盐阴离子转运蛋白1(URAT1)、葡萄糖转运蛋白9、ATP结合盒式蛋白(ABC)家族、钠依赖性磷酸盐转运蛋白1(NPT1)、NPT4和有机阴离子转运蛋白家族的转运蛋白(OAT)等。本文就目前发现的主要有机阴离子转运蛋白家族成员(OAT1、OAT2、OAT3、OAT4、OAT10和URAT1)在肾脏尿酸排泄中的作用进行综述。

有机阴离子转运蛋白1对大鼠滑膜细胞吸收甲氨蝶呤、增殖及迁移的影响

目的探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响。方法对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率。将FLS分为阴性对照组(NC组)、Overexpress组,并用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(20 ng/ml)刺激。另取正常大鼠FLS为对照组(Control),给予同浓度(100 ng/ml)MTX和OAT1特异性底物对氨基马尿酸(PAH),采用UPLC-MS/MS方法评估FLS对MTX及PAH吸收功能。给予MTX(100 ng/ml)后使用CCK-8、Transwell方法检测FLS增殖效应及迁移能力。结果与NC组相比,Overexpress组的OAT1及Slc22a6表达均上升;与NC组比较,OAT1过表达组FLS对MTX和PAH的吸收在15、30、45、60、120 min时均增加;与NC组比较,Overexpress组FLS的增殖效应在12 h时下降,并趋近于Control组水平;与NC组比较,12 h时OAT1过表达组的迁移能力下降,并趋近于Control组水平。结论OAT1表达的升高能增加炎性FLS对MTX的吸收,并可抑制其异常的增殖效应和迁移能力。

有机阴离子转运体1B1与载脂蛋白E基因多态性分布及对服用瑞舒伐他汀的风险评估

目的:分析有机阴离子转运体1B1(SLCO1B1)与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性分布及其对瑞舒伐他汀使用风险的评估价值。方法:选取2017年4月至2020年2月,我院心血管内科收治的高脂血症患者108例,均口服瑞舒伐他汀钙片10 mg/次,1次/d,睡前服用。采用纳米磁珠法提取全血基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)-焦磷酸测序法测定SLCO1B1与ApoE基因多态性,比较不同SL-CO1B1基因型、不同ApoE基因型患者服药前后TC、TG、HDL-C、LDL-C水平和不良反应发生率。结果:SLCO1B1(521T>C)基因型分布为TT 73.15%、TC 23.15%、CC 3.70%;ApoE基因型分布为ε3/ε364.81%、ε2/ε312.96%、ε3/ε417.59%、ε4/ε44.64%,未见ε2/ε2、ε2/ε4基因型;服药6周后,TC型、CC型TC、LDL-C水平低于TT型,TC型、CC型HDL-C高于TT型(P<0.05),三种基因型患者TG比较,差异无统计学意义(P>0.05);ApoE基因型中,ε3/ε3型服药后TC、LDL-C高于其他基因型(P<0.05),四种基因型TG、HDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05);TC型、CC型肌痛发生率高于TT型,ε2/ε3型头痛、恶心、腹痛、瘙痒发生率高于其他基因型(P<0.05)。结论:SLCO1B1、ApoE基因多态性分布与瑞舒伐他汀疗效和安全性有一定关联,检测SLCO1B1与ApoE基因型有助于进行疗效预测和风险评估,实现个体化给药。

胆绿素还原酶A rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1 rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症易感性相关性研究

目的:分析胆绿素还原酶A(BLVRA)rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1(SLCO1B1)rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症(HB)易感性的相关性。方法:选取不明原因HB新生儿90例为HB组,另选取同期健康新生儿90例为对照组。比较两组临床资料以及BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布和等位基因频率。比较不同BLVRA rs699512、BLVRA rs699512基因型患儿血清胆红素水平。分析BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因多态性与HB易感性的关系。结果:HB组患儿总胆红素和结合胆红素水平明显高于对照组(均P<0.05)。两组BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布比较差异有统计学意义(均P<0.05)。HB组患儿BLVRA rs699512位点GG基因型分布高于对照组,AA基因型分布低于对照组,G等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。HB组患儿SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型分布高于对照组,GG基因型分布低于对照组,A等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。BLVRA rs699512中GG基因型总胆红素和结合胆红素水平高于AA基因型(均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015中AA基因型总胆红素和结合胆红素水平均高于GG基因型(均P<0.05)。BLVRA rs699512位点GG基因型与HB发生呈正相关,AA基因型与HB发生呈负相关(r=0.671、-0.608,均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型与HB发生呈正相关,GG基因型与HB发生呈负相关(r=0.695、-0.633,均P<0.05)。结论:不明原因HB新生儿BLVRA rs699512位点GG基因型与SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型会增加易感性,临床可建立早期防治体系以改善患儿预后。

云南地区结核病患者人尿酸盐转运蛋白1基因单核苷酸多态性与吡嗪酰胺导致高尿酸血症的相关性研究

目的:研究云南地区结核病患者人尿酸盐转运蛋白1(human urate transporter 1,hURAT-1)基因单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)与吡嗪酰胺导致高尿酸血症的易感性。方法:选取医院2019年1月—2021年3月住院治疗服用吡嗪酰胺导致高尿酸血症的结核患者294例作为病例组,另选取服用吡嗪酰胺未导致高尿酸血症结核患者220例作为对照组;采用MassArray基因分型技术检测的hURAT1基因SNP位点的分型情况,分析hURAT1的SNP与吡嗪酰胺导致高尿酸血症的相关性。结果:hURAT1基因中rs11231825各基因型(TT、CT、CC)位点的频率分布,在2组间差异具有统计学意义(P<0.01);病例组rs11231825位点突变型等位点基因中C位点的频率明显低于对照组(P<0.01);2组rs2022048位点中各基因型及等位点基因中的频率分布基本接近(P>0.05)。结论:结核病患者hURAT1基因rs11231825与吡嗪酰胺导致高尿酸血症的发生风险可能相关,突变型等位点基因中C位点可能是吡嗪酰胺导致高尿酸血症的保护性等位点基因。

泄化浊瘀方总皂苷对痛风及高尿酸血症HK-2细胞有机阴离子转运蛋白基因表达的影响

泄化浊瘀方临床主要用于痛风及高尿酸血症（痰瘀痹阻证）的治疗，临床疗效确切。前期实验及临床研究表明，其具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，抑制尿酸生成，

尿酸盐转运蛋白在原发性痛风及高尿酸血症中的研究进展

原发性痛风及高尿酸血症是临床常见病、多发病,主要病因是尿酸盐转运蛋白异常致尿酸排泄减少。近年来,尿酸转运蛋白成为进行抗高尿酸血症和痛风药物的研究和开发新靶点,是目前防治痛风的新思路和新方法。简要概述尿酸盐转运蛋白在原发性痛风及高尿酸血症中的研究现状,以供原发性痛风及高尿酸血症的进一步临床诊治研究及特异性靶点药物研发参考。

人肾尿酸转运蛋白1基因克隆、抗体制备及其在肾小管上皮细胞中的定位

目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位。方法用RT PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体pGEX5X1。诱导表达并纯化GST融合蛋白,利用改良的蛋白免疫法制备多克隆抗体;Westernblot及免疫组化方法观察人肾组织的hUART1基因产物的表达。将hURAT1pEGFP重组质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜动态观察hU RAT1pEGFP在肾小管上皮细胞LLC PK1细胞膜的定位及表达。结果成功获得高效特异的hURAT1抗体,利用该抗体证实hU RAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,Westernblot证实hURAT1蛋白在肾组织中表达。激光共聚焦显微镜动态观察显示hURAT1pEGFP定位于LLC PK1细胞膜。结论制备的hURAT1抗体及其全长基因可用于hURAT1基因的生理功能及病理研究,hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘。

烟草慢阴离子通道蛋白基因NtSLAH1的克隆及表达分析

为了揭示烟草慢阴离子通道蛋白(Slowly activating Anion Channel,SLAC)家族成员在氯离子转运过程中的作用,通过同源克隆的方法从栽培烟草K326中克隆到1个SLAC同源基因(SLAC Homologue),命名为NtSLAH1,其开放阅读框长度为1107 bp,编码368个氨基酸,表达蛋白定位在细胞质膜上。与已报道的其他植物SLAH相比,NtSLAH1与拟南芥SLAH1和SLAH4序列相似性更高、进化距离更近。实时定量荧光PCR(qRT-PCR)结果显示,NtSLAH1在根中的表达量最高,高浓度NaCl处理下其表达量下降,表明NtSLAH1可能在烟草盐胁迫响应及氯离子吸收过程中发挥重要作用。

人尿酸盐转运子1第3内含子突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响

目的明确人尿酸盐转运子(h URAT)1第3内含子(h URAT1 IVS-3+11G>A)突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响。方法海南黎族高尿酸血症患者100例为观察组,同期行体检的海南黎族非高尿酸血症者100例为对照组。采用突变特异性扩增系统(ARMS)对比两组h URAT1 IVS-3+11G>A等位基因突变情况。结果观察组h URAT1基因IVS-3+11G>A多态性A等位基因频率显著高于对照组(P<0.05)。经单因素及Logistics回归分析显示:饮酒、体重超重及携带h URAT1 IVS-3+11G>A多态性A等位基因为影响海南黎族高尿酸血症发生的独立风险因素(P<0.05)。结论 h URAT基因突变可能影响了海南黎族人高尿酸血症的发生,这一结果为此类疾病的遗传学病因探索提供了参考。

氯沙坦钾下调尿酸性肾纤维化大鼠肾小管上皮细胞尿酸转运蛋白-1的表达

目的研究氯沙坦钾对高尿酸血症致尿酸性肾纤维化大鼠肾小管上皮细胞尿酸转运蛋白-1(URAT1)表达的影响。方法将大鼠随机分为正常组、模型组(以腺嘌呤100 mg/kg+乙胺丁醇250 mg/kg的混悬液灌胃造模)、氯沙坦钾低、中和高剂量灌胃治疗组[分别为25、50和75 mg/(kg·d)]。各组于造模后第1、2、3和4周检测大鼠血尿酸、血肌酐、尿素氮、尿酸、尿肌酐和尿酸排泄分数,用HE和Masson染色法观察尿酸性肾纤维化大鼠病理变化,Western blot检测肾小管上皮细胞URAT-1蛋白的表达。结果随着时间的延长,模型组大鼠血尿酸水平显著高于正常组(P<0.01),尿尿酸水平低于正常组(P<0.01);各治疗组血尿酸水平下降,尿尿酸水平升高,以高剂量组为著(P<0.05);模型组肾小管间质损伤指数明显高于同期正常组(P<0.05),氯沙坦钾干预后肾小管间质损伤指数明显降低(P<0.05); URAT1蛋白表达在模型组各时间段升高(P<0.05),且随着病理损害的进展呈现上升趋势,经氯沙坦钾干预后表达明显下降(P<0.05)。结论氯沙坦钾可下调URAT1高表达,降低高尿酸血症大鼠的血尿酸水平。

牛阴离子交换蛋白1和生电碳酸氢钠协同转运蛋白亲水结构域的克隆·表达和纯化

[目的]表达和纯化牛阴离子交换蛋白1(AE1)和生电碳酸氢钠协同转运蛋白(NBCe1)的亲水结构域。[方法]根据AE1和NBCe1的亲水结构域设计引物,通过PCR扩增牛AE1和NBCe1的亲水结构域,通过原核表达系统,以E.coliBL21(DE3)为表达宿主,经IPTG诱导,表达重组的牛AE1和NBCe1的亲水结构域融合蛋白,并采用金属螯合层析法对目的蛋白进行纯化。15%SDS-PAGE分析目的蛋白的表达、分布和纯度。[结果]PCR扩增了牛AE1和NBCe1的亲水结构域;IPTG诱导后,成功的表达了目的蛋白;目的蛋白主要存在大肠杆菌的胞浆中,可以被较好的纯化。[结论]牛AE1和NBCe1的亲水结构域蛋白的表达为制备抗体和研究膜载体蛋白的调节机理提供了条件。