葡萄糖转运子9和尿酸转运子1在软骨细胞中表达的体外试验

目的观察在软骨细胞中葡萄糖转运子(GLUT)9和尿酸转运子(URAT)1的表达,探讨软骨细胞中是否存在尿酸转运。方法选择2017年11月至2018年4月5例外伤性股骨颈骨折患者(排除痛风性等关节炎和病理性骨折)的软骨组织作为对象,用Western blot和免疫组化法测定软骨组织中GLUT9和URAT1蛋白表达水平,并以Ⅱ型胶原蛋白作为阳性对照。结果 Western blot结果表明,5例标本Ⅱ型胶原蛋白均为阳性,Ⅱ型胶原蛋白是软骨细胞的特征性蛋白,其染色阳性证实取材标本中包含软骨细胞。5例标本在59 kDa和70 kDa均有阳性条带,分别对应兔抗人GLUT9和兔抗人URAT1;免疫组化结果表明,软骨细胞样本中可见特征性的软骨窝结构;软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白抗体染色后细胞质均显现为褐色,URAT1和GLUT9两种抗体染色下,软骨细胞的细胞膜可见均一的褐色染色,细胞质内亦有褐色染色分布。结论 GLUT9和URAT1在软骨组织中呈高表达,可能存在尿酸转运过程,其是否参与痛风性关节炎的发生、发展,有待进一步研究。

胰岛素对肾近端小管上皮HK-2细胞人尿酸转运子基因表达的影响

用不同浓度的胰岛素培养人肾小管上皮细胞株48h后，采用实时定量PCR检测人尿酸盐转运子mRNA的相对表达量。随胰岛素浓度的增加，人尿酸盐转运子mRNA表达水平明显降低（5、25、125、500μIU／ml时的相对表达量分别为0．95、0．40、0．24、0．23）。提示离体培养条件下的肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达改变与胰岛素浓度的变化有关。

人尿酸盐转运子1第3内含子突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响

目的明确人尿酸盐转运子(h URAT)1第3内含子(h URAT1 IVS-3+11G>A)突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响。方法海南黎族高尿酸血症患者100例为观察组,同期行体检的海南黎族非高尿酸血症者100例为对照组。采用突变特异性扩增系统(ARMS)对比两组h URAT1 IVS-3+11G>A等位基因突变情况。结果观察组h URAT1基因IVS-3+11G>A多态性A等位基因频率显著高于对照组(P<0.05)。经单因素及Logistics回归分析显示:饮酒、体重超重及携带h URAT1 IVS-3+11G>A多态性A等位基因为影响海南黎族高尿酸血症发生的独立风险因素(P<0.05)。结论 h URAT基因突变可能影响了海南黎族人高尿酸血症的发生,这一结果为此类疾病的遗传学病因探索提供了参考。

尿酸盐转运体研究现状及其药物研发

尿酸盐是体内嘌呤代谢的终产物,其合成和排泄决定血尿酸水平。无论血尿酸水平过高或过低都将导致严重并发症。本文主要对尿酸转运体及降尿酸药物进行综述。

高尿酸血症患者URAT1基因rs524023位点多态性检测及临床意义

目的检测高尿酸血症(HUA)患者人尿酸盐转运子(URAT1)基因rs524023位点多态性并探讨其临床意义。方法将2019年3月至2021年4月在上海市宝山区罗店医院进行健康体检的200例体检者纳入研究,详细记录所有体检者的一般资料,采集其血液样本检测血生化指标和URAT1基因rs524023位点多态性。依据是否合并HUA分为合并HUA组47例和不合并HUA组153例,比较两组受检者的临床资料、URAT1基因rs524023位点等位基因和基因型频率分布,采用多因素Logistic回归分析URAT1基因rs524023位点多态性和HUA影响因素的交互作用。结果合并HUA组和未合并HUA组受检者在年龄、体质量指数(BMI)、血尿酸(SUA)、肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)和肾小球滤过率(eGFR)水平方面比较差异均有统计学意义(P<0.05);在URAT1基因rs524023位点上,合并HUA组和未合并HUA组受检者的等位基因C、T的频率分别为27.66%、72.34%vs 41.83%、58.17%,基因型CC、TC、TT的频率分别10.64%、51.06%、38.30%vs 28.10%、37.91%、33.99%,差异均有统计学意义(P<0.05);年龄、BMI、高血脂和慢性肾病是影响HUA发病的影响因素,URAT1基因rs524023位点多态性与BMI≥25 kg/m^(2),合并高血脂和慢性肾病等HUA发病影响因素在相乘模型中存在交互作用(OR'值分别为0.81、1.17、1.57、2.16,P'值分别为0.31、0.03、0.03、0.02),增加了HUA的发病风险。结论URAT1基因rs524023位点突变可能会增加HUA发生的概率,且与BMI、高血脂和慢性肾病之间存在交互作用。

特发性肾性低尿酸血症相关的急性肾衰竭一例报告及文献复习

特发性肾性低尿酸血症(idiopathic renal hypouricemia,i RHUC)又称家族性肾性低尿酸血症,是一种常染色体隐性遗传性疾病。该病是因编码肾小管尿酸转运子的基因(SLCC2A12或SLC2A9)出现失活突变,造成肾小管对尿酸的转运功能受损,尿酸重吸收和(或)排泄增多,从而导致低尿酸血症。i RHUC可导致运动诱发急性肾功能衰竭(急性肾衰)及泌尿系统结石等并发症,临床上较罕见,且部分临床医师对其认知不足,易导致误诊、漏诊。本文报道1例SLC22A12基因突变的i RHUC患者运动后诱发急性肾衰的病例,并结合相关文献报道进行复习。

蠲痹历节清方对高尿酸血症大鼠肾脏中部分尿酸转运蛋白的影响

目的:探讨肾脏尿酸盐转运子1(Urate Transporter 1,URAT1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ATP-binding Cassette Superfamily G Member 2,ABCG2)、葡萄糖转运蛋白9(Glucose Transporter 9,GLUT9)等尿酸转运蛋白在蠲痹历节清方降低血尿酸(Serum Uric Acid,SUA)中的机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、苯溴马隆组(5 mg/kg)及蠲痹历节清方低、中、高剂量组(11,22,44 g/kg)。除空白组外,其余各组均建立高尿酸血症模型;苯溴马隆组和蠲痹历节清方组分别予相应浓度混悬液进行灌胃干预。最后收集大鼠腹主动脉血和双肾组织,采用全自动生化仪检测各组大鼠腹主动脉中血尿酸含量,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠肾脏中URAT1、GLUT9、ABCG2 mRNA和蛋白的表达。结果:与空白组相比,模型组血尿酸水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);空白组与模型组血尿酸水平存在明显差异,提示造模成功。与空白组比较,模型组URAT1及GLUT9的mRNA和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2的mRNA和蛋白的表达则显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,蠲痹历节清方各剂量组和苯溴马隆组URAT1及GLUT9的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2的mRNA和蛋白的表达则显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与蠲痹历节清方高剂量组比较,中、低剂量组URAT1及GLUT9的mRNA和蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2的mRNA和蛋白的表达则明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:蠲痹历节清方可通过抑制肾脏中URAT1、GLUT9 mRNA及蛋白表达,促进ABCG2的mRNA和蛋白的表达,来调节尿酸的分泌,减少尿酸的重吸收,增加尿酸的排泄,进而降低血尿酸水平,且随着剂量的升高,其降尿酸的作用逐渐增强。

茶多酚对果糖诱导的高尿酸血症大鼠血尿酸水平的影响及机制

目的:观察茶多酚(green tea polyphenols,GTP)对果糖诱导的高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠血尿酸水平的影响,并从调节尿酸产生和排泄途径探讨其药理机制。方法:连续给予大鼠10 g/100 mL果糖溶液8周,其中5~8周分别连续灌胃别嘌呤醇(4 mg/(kg·d))或GTP(75、150、300 mg/(kg·d)),每天1次。磷钨酸法检测血尿酸水平,比色法和Western blot法分别检测肝脏黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活力及其表达水平,免疫组织化学染色法检测肾脏中尿酸盐转运子(urate transporter,UAT)、尿酸盐阴离子转运子(urate-anion transporter,URAT)1和葡萄糖转运子(glucose transporter,GLUT)9的表达水平。结果:150、300 mg/(kg·d)GTP显著降低了果糖诱导的HUA大鼠血尿酸水平(P<0.05,P<0.01)。同时,150、300 mg/(kg·d)GTP显著降低了HUA大鼠肝脏XOD活力和表达水平(P<0.05,P<0.01),显著增强了肾脏UAT表达水平和降低了肾脏URAT1和GLUT9的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:150、300 mg/(kg·d)GTP可有效降低果糖诱导的HUA大鼠血尿酸水平,其机制与减少尿酸产生和促进尿酸排泄密切相关。

高尿酸血症的中药治疗机制研究进展

高尿酸血症在临床发病率逐年走高,相关中药治疗的研究成为热点。根据尿酸在体内的代谢途径,将中药或方剂治疗高尿酸血症的作用机制途径分为抑制尿酸生成药物和促进尿酸排泄药物或是两者兼有。抑制尿酸生成主要是于从不同途径对黄嘌呤氧化酶(XOD)的活性产生抑制作用;促进尿酸排泄主要利用下调负责尿酸重吸收的尿酸转运子URAT1、GLU-9的表达或者上调促尿酸排泄的转运子如OAT1、OAT3、ABCG2的表达。本文通过阐述中药单体或方剂降低尿酸的作用及机制的研究进展,分析并拓展临床中药治疗高尿酸血症的思路。

男性高尿酸血症与URAT1基因多态性的关系

目的研究采用非标记探针技术分析中国上海地区汉族人尿酸盐转运子1(URAT1)基因rs893006多态性,以及各基因型与高尿酸患者病理指标的关系。方法选取180例原发性痛风患者和260名健康志愿者,记录体重指数、血压,并分别检测血尿酸、血糖、血脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)]、肌酐,提取外周血白细胞的DNA,采用非标记探针技术检测rs893006基因型测序证实。结果通过非标记探针能准确区分GG、GT和TT基因型,其结果与测序法一致。GG、GT和TT基因型在痛风和正常人群分布频率分别为53.9%、39.4%、6.7%和55.8%、32.6%、11.6%。痛风组rs893006基因型频率及等位基因频率分布与健康对照组比较差异无统计学意义。各基因型个体的体重指数、血压、肌酐、TC和TG中分布差异无统计学意义,但TT基因型患者的血尿酸水平[(274.00±26.00)μmol/L]明显低于GT型[(346.00±32.00)μmol/L]和GT型[(438.00±37.00)μmol/L]。结论非标记探针技术检测可简便、快速和精确地检测URAT1基因型分析方法。研究证实SLC22A12基因中rs893006基因多态性评估汉族男性人群高尿酸血症危险性的一个遗传学标志。

URAT1基因多态性与哈萨克族人群高尿酸血症发病影响因素的交互作用

目的探讨人尿酸盐转运子(URAT1)基因rs524023位点基因多态性与哈萨克族高尿酸血症(HUA)发病影响因素间的交互作用。方法选取符合纳入标准的哈萨克族194例HUA患者和841例不合并HUA者作为研究对象,收集一般资料及血液标本后,检测一般生化指标及URAT1基因rs524023位点多态性。运用遗传模型(加性模型、显性模型和隐性模型)分析URAT1基因多态性与哈萨克族HUA的关联;采用多因素Logistic回归分析URAT1基因多态性与HUA影响因素间的交互作用。结果年龄(OR=1.02,95%CI=1.01~1.04)、慢性肾脏病(OR=5.99,95%CI=3.01~11.26)和高甘油三酯血症(OR=3.61,95%CI=2.49~5.24)为哈萨克族HUA的危险因素,而女性(OR=0.44,95%CI=0.31~0.62)为哈萨克族HUA的保护因素。遗传模型分析发现,TC、TT和TT+TC基因型相对于CC基因型表现为哈萨克族HUA的危险因素(OR>1,95%CI不跨1)。交互作用结果显示,女性携带rs524023位点突变表现为哈萨克族HUA的保护因素(P<0.05,OR'=0.16);慢性肾脏病患者携带rs524023位点突变可增加哈萨克族HUA的患病风险(P<0.05,OR'=2.12)。结论 URAT1基因rs524023位点突变可能增加哈萨克族HUA的易感性,且与性别、慢性肾脏病间存在交互作用。

高尿酸血症和痛风易感基因单核苷酸多态性研究新进展及应用

尿酸盐转运子基因是近年全基因组扫描锁定的高尿酸血症和痛风易感基因,如SLC22A12、SLC2A9、ABCG2基因等,其编码肾尿酸盐转运系统相关蛋白质,参与肾脏对尿酸的重吸收和分泌.目前锁定的尿酸盐转运子基因可解释约7%的血尿酸水平变异,有影响力的位点期待被发现.已有研究将这些易感基因应用到药物基因组学及孟德尔随机化研究领域,是未来新的发展方向.

URAT1基因多态性与维吾尔族高尿酸血症的交互作用研究

目的探索人尿酸盐转运子基因(URAT1)rs3825018、rs505802和rs524023位点基因多态性与维吾尔族高尿酸血症(HUA)的交互作用。方法选取2014年11月～2016年12月在新疆乌鲁木齐市某附属医院健康管理中心参加健康体检的维吾尔族2340例作为研究对象,并根据尿酸水平分为HUA组(n=986)与对照组(n=1354)。测量研究对象的身高、体重、腰臀围、血压等一般指标,并收集其禁食12 h后的静脉血液标本,检测血尿酸、肌酐、葡萄糖、总胆固醇和三酰甘油等生化指标及URAT1基因rs3825018、rs505802和rs524023位点基因多态性。结果 HUA组与对照组的URAT1基因rs3825018、rs505802和rs524023位点等位基因及基因型频率分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。遗传模型分析发现,无论是否调整年龄和性别,rs3825018、rs505802和rs524023三个多态性位点在三个遗传模型中均与维吾尔族HUA无显著相关(95%CI跨越1)。交互作用结果显示,维吾尔族女性携带rs505802位点突变在相加模型中存在负交互作用(S=-0.146,P<0.05)。结论URAT1基因rs3825018、rs505802和rs524023位点突变可能不会影响维吾尔族HUA的易感性,维吾尔族女性携带rs505802位点突变可能会在一定程度上降低发生HUA的风险。

茶多酚对高尿酸血症小鼠尿酸产生与排泄的影响及机制研究

目的观察茶多酚(green tea polyphenols,GTP)对氧嗪酸钾(PO)诱导的高尿酸血症(HUA)小鼠血尿酸水平的影响,并从调节尿酸产生和排泄途径探讨其药理机制。方法每天分别灌胃给予PO(250 mg·kg^(-1))和GTP(150、300、600mg·kg^(-1)),连续7 d。磷钨酸法检测小鼠血尿酸水平,比色法和Western blot法分别检测肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)活性与表达,免疫组织化学染色法检测肾脏中尿酸盐转运子1(URAT1)、有机阴离子转运子(OAT)1和3的表达。结果GTP明显降低了氧嗪酸钾诱导的HUA小鼠血尿酸水平(P<0.05或P<0.01);同时,GTP明显降低了HUA小鼠肝脏XOD的活性和表达(P<0.05或P<0.01);此外,GTP还明显降低了HUA小鼠肾脏URAT1的表达,增强了OAT1和OAT3的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 GTP对PO诱导的HUA小鼠血尿酸水平有明显降低作用,其机制与减少尿酸产生和增加尿酸排泄密切相关。

各种脂质对肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达的影响

目的观察不同浓度脂蛋白和游离脂肪酸对肾小管上皮细胞（HK-2细胞）人尿酸盐转运子（hUAT）mRNA表达的影响。方法0、50、100、200、400μg/ml低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）、高密度脂蛋白（HDL）和0、100、200、400μmol／L软脂酸、油酸孵育HK-2细胞48h，采用实时PCR检测hUAT mRNA的相对表达量。结果干预48h后，随LDL、VLDL、HDL浓度的增加，hUAT mRNA表达水平均显著下降（LDL：1．00，0．44，0．26，0．20，0．10；VLDL：1．00，0．64，0．48，0．30，0．24；HDL：1．00，0．44，0．34，0．15，0．13；均P〈0．01）。不同浓度软脂酸、油酸对hUAT的表达均无显著影响（均P〉0．05）。结论脂蛋白中的甘油三酯和胆同醇叮降低。肾小管上皮细胞的hUAT mRNA表达，叮能是脂代谢紊乱引起高尿酸血症的重要机制。

人尿酸盐转运子1基因多态性与中国汉族人群高尿酸血症相关性研究

目的 研究人尿酸盐转运子1（hURAT1）基因多态性与原发性高尿酸血症的相关性.方法 选择原发性高尿酸血症患者（病例组）215例,正常对照组323例.采用PCR方法分别扩增hURAT1基因第2、3、4外显子及外显子内含子交界处,分析该区域内多态性位点与原发性高尿酸血症的相关性.结果 在中国汉族人群hURAT1基因中,共发现5个多态性位点.其中,在第3内含子区发现1个新的多态性位点11 G＞A.病例组AA＋AG基因型频率明显高于对照组（11.6%比3.7%,P=3.81×10-4）;突变型等位基因（A等位基因）频率明显高于对照组（6.0%比1.9%,P=2.66×10-5）.A等位基因构成的基因型AA＋AG基因型使高尿酸血症发病风险增加了3.41倍（OR=3.41,95% CI=1.67～6.95）.单倍型分析显示,包含第3内含子11 G＞A突变型A等位基因的单倍型在病例组中的频率显著高于对照组,与原发性高尿酸血症发病危险性密切相关（69.44%比30.56%,P＜0.001）.结论 hURAT1基因第3内含子11 G＞A多态性与中国汉族人群原发性高尿酸血症密切相关.

性激素对HK-2细胞人尿酸盐转运子基因表达的影响

用不同浓度的雌二醇或睾酮培养人肾小管上皮细胞株（HK-2）48h后，采用实时PCR检测人尿酸盐转运子mRNA的相对表达量。随雌二醇浓度的增加，人尿酸盐转运子mRNA表达水平明显增高（10^-12、10^-10、10^-8、10^-6mol／L时的相对表达量分别为1．03、1．05、1．67、1．87）；随睾酮浓度的增加，人尿酸盐转运子mRNA表达水平明显降低（10^-7、10^-6、10^-5、10^-4mol／L时的相对表达量分别为0．56、0．34、0．25、0．19）；培养条件下肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达改变与性激素浓度的变化有关。

人尿酸盐转运子1基因第3内含子＋11G＞A单核苷酸多态性功能研究

目的 研究人尿酸盐转运子1（hURAT1）基因的第3内含子＋11G＞A的单核苷酸多态性（SNP）对该基因功能的影响.方法 以hURAT1的野生型和突变型重组质粒转染真核细胞后,比较mRNA表达情况;以hURAT1的cDNA为模板分别构建野生型、突变型和第5外显子缺失型质粒并合成mRNA,显微注射入斑马鱼胚胎卵黄中,观察不同hURAT1蛋白的亚细胞定位.结果 与野生型相比,hURAT1基因第3内含子＋11G＞A突变型重组质粒在细胞内同时表达两种hURAT1的mRNA转录剪接体.一种为野生型,另一种为第5外显子完全缺失型.亚细胞定位研究表明,hURAT1野生型蛋白在细胞膜上有明显的富集,细胞质中呈点状分布;hURAT1突变型和第5外显子缺失型蛋白均弥散地存在于细胞质中,细胞膜上无表达.结论 hURAT1基因第3内含子＋11G＞ASNP导致该基因mRNA转录出现可变剪接,产生第5外显子完全缺失的hURAT1剪接异构体,影响蛋白的亚细胞定位.

雌二醇对肾小管上皮细胞hUAT基因及蛋白表达的影响

目的观察不同浓度雌二醇对肾小管上皮细胞(HK-2细胞)人尿酸盐转运子(hUAT)基因表达的影响。方法取18瓶HK-2细胞,随机分为对照组、E1、E2组,每组6瓶。对照组培养液为DMEM+0.5%乙醇,E1组为DMEM+10-8mol/L雌二醇+0.5%乙醇,E2组为DMEM+10-6mol/L雌二醇+0.5%乙醇。均培养48 h。采用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测三组细胞中hUAT mRNA及蛋白的相对表达量。结果所有标本均能检测到hUAT mRNA和蛋白的表达。E1组hUAT mRNA表达水平为对照组的167%,E2组hUAT mRNA表达水平为对照组的187%。蛋白表达与mRNA表达结果一致。结论雌二醇可上调hUAT mRNA及蛋白的表达。

hURAT1基因真核表达重组体的构建及意义

目的构建pcDNA3.1(-)/hURAT1真核表达重组体。方法提取人全血基因组DNA,进行PCR扩增,将纯化的扩增产物与表达载体pcDNA3.1(-)连接后转化DH5α感受态细胞。重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后,应用核苷酸序列测定方法进行鉴定。结果PCR扩增得到hURAT1第2外显子至第5内含子长1 958 bp的基因片段。该片段与表达载体pcDNA3.1(-)连接后转化DH5α感受态细胞。重组质粒经酶切和核苷酸序列测定方法鉴定,证实hURAT 1片段插入序列和方向正确。结论hURAT 1基因组DNA片段插入真核表达载体pcDNA3.1(-)的序列和方向正确,可用于后续基因功能研究,尤其是编码序列和内含子序列变异的功能研究。