尿酸钠结晶影响肾小管上皮细胞的紧密连接

背景:目前研究来看,尿酸性结石与紧密连接蛋白及肾间质纤维化的关系仍未明确。目的:观察尿酸钠结晶对肾小管上皮细胞紧密连接的影响。方法:配制单钠尿酸钠晶体。将正常大鼠肾小管上皮细胞随机分为对照组和尿酸钠结晶组,分别用无血清培养基和尿酸钠结晶进行培养。免疫荧光和RT-PCR方法检测24,48,72h紧密连接蛋白的表达。结果与结论:与对照组比较,尿酸钠结晶于不同时相刺激NRK-52E细胞后,紧密连接蛋白和mRNA表达下降(P<0.05),72h时下降显著(P<0.01),蛋白表达出现重新分布现象。说明尿酸钠结晶可破坏肾小管上皮细胞紧密连接蛋白的结构、功能及导致分布异常。

尿酸钠结晶促进肾小管上皮细胞Snail表达的信号通路

目的:探讨Notch信号通路在尿酸钠结晶(MSU)促进大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Snail表达中的作用。方法:用500mg/LMSU刺激NRK-52E细胞24、48、72h;另外用Notch信号通路抑制剂(γ分泌酶抑制剂,DAPT)和MSU共同刺激NRK-52E细胞24、48、72h。采用Real-time PCR检测Snail的mRNA表达量,采用Real-time PCR、Western印迹检测Jagged1、Notch1的mRNA及蛋白的表达量。结果:MSU刺激NRK-52E细胞后Snail、Jagged1和Notch1的表达量较之正常组细胞明显上调;而经DAPT阻断Notch信号通路后,MSU诱导Snail、Jagged1、Notch1上调的趋势被明显逆转。结论:尿酸钠结晶可以诱导NRK-52E的Snail表达增高,Notch信号通路在这一过程中起重要的调控作用。

尿酸钠结晶对痛风性关节炎相关细胞活性和趋化中性粒细胞功能的影响

目的探讨尿酸钠(monosodium urate,MSU)结晶体外刺激对多形核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)、单核细胞细胞株THP-1、成纤维滑膜细胞(fibroblast-likes synoviocytes,FLSs)的活性及三种细胞趋化PMNs功能的影响。方法体外培养人PMNs、THP-1、FLSs,每种细胞各分为对照组和MSU组,并设无细胞的对照组和MSU组,对照组均为不含MSU结晶的培养液,MSU组为含终浓度为500 mg/L的MSU结晶培养液,所有细胞组于培养0、12、24、48 h后MTS法检测细胞的增殖,所有组别采用Transwell法观察培养24 h后对PMNs的趋化作用。结果培养12、24、48 h后,PMNs、THP-1的MSU组和对照组活性均随着时间的延长而增加,各时间点MSU组细胞活性均较对照组明显增高,比较差异具有统计学意义(P<0.01)。FLSs的MSU组在12、48 h细胞活性较对照组有明显降低(P<0.05),24 h时降低无明显差异(P>0.05)。培养24 h后,与对照组比较,PMNs和THP-1的MSU组对PMNs的趋化作用明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),FLSs的MSU组对PMNs的趋化作用明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MSU结晶在一定时间内,能明显促进PMNs、THP-1细胞活性增加,而对FLSs的活性则有抑制作用。MSU结晶刺激后PMNs、THP-1对PMNs的趋化下降,而FLSs对PMNs的趋化增加。

巨噬细胞诱导极化对痛风炎症反应的影响

目的:了解体外诱导极化的M1和M2型巨噬细胞对尿酸钠结晶(MSU)诱导的急性痛风模型炎症反应的影响。方法:选用雄性BALB/c小鼠作为实验对象,随机分为空白对照组、模型组、模型M1型巨噬细胞组和模型M2型巨噬细胞组。小鼠皮下气囊注射MSU结晶诱导小鼠急性痛风模型。体外将巨噬细胞诱导极化为M1和M2型巨噬细胞,并分别注射于小鼠痛风模型皮下气囊。于炎症诱导后4 h、12 h和24 h检测不同组别皮下气囊浸润的炎性细胞数量变化,并应用ELISA法测定囊内灌洗液中IL-1β、TGF-β的水平。结果:1在4 h、12 h和24 h时间点模型组、模型M1型巨噬细胞组和模型M2型巨噬细胞组皮下气囊炎性细胞均高于空白对照组(P<0.01)。在4 h时间点,模型组及模型M1型巨噬细胞组和模型M2型巨噬细胞组间皮下气囊炎性细胞数量无差异(P>0.05);而在12 h和24 h,模型M1型巨噬细胞组皮下气囊炎性细胞高于模型组,而模型M2型巨噬细胞组皮下气囊炎性细胞低于模型组(P<0.05)。2在3个时间点,模型组、模型M1型巨噬细胞组及模型M2型巨噬细胞组IL-1β均高于空白对照组(P<0.01);在3个时间点比较,IL-1β水平在模型组低于模型M1型巨噬细胞组(P<0.01),而高于模型M2型巨噬细胞组(P<0.01)。TGF-β水平在模型组高于模型M1型巨噬细胞组(P<0.01),而低于模型M2型巨噬细胞组(P<0.01)。结论:巨噬细胞的极化在痛风炎症反应不同阶段起到不同的作用。

脂多糖协同MSU诱导THP1分泌IL-1β和IL-18

通过合成尿酸钠结晶(monosodium urate crystals,MSU)分析其对人外周血单核细胞系THP1的促炎作用,分别以0、1.0、10.0和100.0μmol/L的MSU刺激THP1细胞4 h,检测不同浓度的MSU对炎症体组分Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶(caspase-1)及促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)表达的影响.为研究toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)的配体脂多糖的作用,用1.0 ng/m L的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预刺激THP1细胞3 h,再加100.0μmol/m L的MSU刺激细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应及酶联免疫吸附试验,检测LPS对MSU诱导的促炎因子IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白水平.研究发现,在THP1细胞中,100.0μmol/L的MSU即可显著激活炎症体的mRNA,但其对促炎因子IL-1β及IL-18的mRNA表达的诱导作用却不明显,加入1.0 ng/m L LPS预刺激3 h后,MSU诱导的THP1细胞IL-1β和IL-18的表达量显著增加.证明脂多糖对MSU诱导THP1细胞产生IL-1β和IL-18有协同作用.

痹宁汤治疗急性痛风性关节炎的临床研究

目的:研究痹宁汤治疗原发性痛风性关节炎的临床疗效。方法:将40例痛风患者随机分为试验组和对照组各20例,试验组予痹宁汤治疗,对照组予秋水仙碱治疗,连续治疗10天后观察比较两组治疗前后甘油三酯、血尿酸、白细胞、关节肿胀程度等指标。结果:试验组疗效优于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者的血尿酸、甘油三酯、白细胞计数均明显下降,试验组治疗后血尿酸、甘油三酯水平均明显低于对照组(P<0.05);治疗后两组患者的关节功能均改善,试验组改善情况优于对照组。差异有统计学意义(P<0.05)。结论:痹宁汤治疗原发性痛风性关节炎有较好临床疗效,能降低血尿酸,改善关节功能。

660例关节腔积液有形成分分析

目的:探讨关节腔积液有形成分分析在骨关节病中的诊断价值。方法:收集我院2017—2018年送检的660例关节腔积液,用普通光学显微镜及偏光显微镜观察关节腔积液有形成分。结果:痛风患者尿酸钠结晶或尿酸钠吞噬细胞阳性率为73.56%(192/261)。660例关节腔积液中,赖特细胞检出率为4.85%(32/660);脂肪滴检出率为2.73%(18/660);焦磷酸钙结晶和噬菌细胞检出率均为1.21%(8/660);狼疮细胞和橙色血质结晶检出率均为0.45%(3/660)。结论:关节腔积液有形成分分析在骨关节疾病的诊断和鉴别诊断中能提供重要线索和有力证据,帮助临床医生合理用药,使广大关节骨病患者早治疗早康复。

综合护理清碧散外治急性期痛风性关节炎

[目的]观察综合护理清碧散外治急性期痛风性关节炎疗效。[方法]对40例外用清痹散急性期痛风性关节炎患者实施休息与饮食、心里与锻炼、并发症护理及健康教育。[结果]有效的减轻了关节疼痛,提高临床疗效。[结论]综合护理清碧散外治急性期痛风性关节炎可减轻患者的疼痛,增强治疗疾病的信心,提高生活质量,缩短住院时间。

NLRP3炎症小体抑制剂N14对小鼠痛风性关节炎的治疗作用

探讨Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体抑制剂N14对尿酸钠(mono sodium urate,MSU)晶体诱导的痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)小鼠的治疗作用。首先采用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)法检测N14对小鼠单核巨噬细胞J774A.1活力的影响;利用免疫印迹法(Western blot)检测N14对细胞上清中成熟的白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、胱天蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)活化物caspase-1 p20及细胞裂解液中NLRP3、pro-caspase-1和pro-IL-1β表达的影响。通过MSU诱导的小鼠痛风性关节炎模型,检测痛风性关节炎小鼠的红、肿、热、痛反应;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,H&E)染色进行小鼠足部病理学检测;应用免疫印迹法检测小鼠足部组织中NLRP3、pro-caspase-1和pro-IL-1β的表达;并考察N14对小鼠血浆中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)等含量的影响。本文中所有动物实验均获得青岛海洋生物医药研究院科学伦理委员会批准(批准号:E-MBWNL-2024-20)。实验结果显示,J774A.1细胞与高浓度的N14(100μmol·L-1)共孵育后未见明显细胞毒性,且有效阻止MSU诱导的NLRP3炎症小体的激活。在小鼠痛风性关节炎模型中,N14显著改善痛风性关节炎引起的红、肿、热、痛,下调小鼠足部组织中NLRP3炎症小体相关蛋白水平,同时对小鼠血浆中各项生化指标无显著影响,具有良好的耐受性。综上,N14通过抑制NLRP3炎症小体通路有效缓解小鼠痛风性关节炎,对相关疾病的预防和治疗都具有重要意义。

基于NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路探讨独活醇提物对MSU诱导的痛风性关节炎的治疗作用

目的通过体内和体外实验探讨独活醇提物(DH50)对尿酸钠(MSU)晶体诱导的痛风性关节炎的治疗作用及作用机制。方法体内实验:将50只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、地塞米松组(DXMS,0.07 mg·kg^(-1))、DH50低剂量组(DH50-D,9 mg·kg^(-1))、高剂量组(DH50-G,18 mg·kg^(-1))5组(n=10)。连续灌胃给药7 d,正常组和模型组给予等体积纯水,第5天向大鼠右侧踝关节注射MSU建立痛风性关节炎模型。测量造模后4、8、24、48 h的大鼠足跖容积并对关节炎症评分,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠滑膜组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素^(-1)β(IL^(-1)β)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶^(-1)(Caspase^(-1))、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL^(-1)β、环氧化酶-2(COX-2)的蛋白表达情况。体外实验:使用MSU(75 mg·L^(-1))刺激RAW264.7细胞建立细胞炎症模型,同时设置正常组、模型组、地塞米松组(DXMS,100μmol·L^(-1))、DH50低质量浓度组(DH50-D,25 mg·L^(-1))、DH50中质量浓度组(DH50-Z,50 mg·L^(-1))、DH50高质量浓度组(DH50-G,100 mg·L^(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞活力,ELISA检测细胞培养上清中TNF-α含量,Western blot检测细胞中NLRP3、活化的(cleaved)Caspase^(-1)、IL^(-1)β、TNF-α、COX-2的蛋白表达情况。结果体内实验:与正常组比较,模型组大鼠足跖肿胀程度加深、关节炎症评分显著升高(P<0.01),滑膜组织炎性浸润严重,组织匀浆中炎症因子含量显著升高(P<0.01),NLRP3、Caspase^(-1)、ASC、IL^(-1)β、COX-2蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,DH50低、高剂量组大鼠足跖肿胀程度减轻、关节炎症指数降低,炎性浸润减轻,组织匀浆中炎症因子含量显著降低(P<0.01),相关蛋白表达均有不同程度的下调(P<0.05,P<0.01)。体外实验:与正常组比较,模型组细胞上清液中TNF-α含量显著升高(P<0.01),细胞中NLRP3、cleaved Caspase^(-1)、IL^(-1)β、TNF-α、COX-2蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,DH50低、中、高剂量组细胞上清液中TNF-α含量均显著降低(P<0.01)且呈剂量依赖性,细胞中相关蛋白表达有不同程度下调(P<0.05,P<0.01)。结论DH50在体内和体外均有较好的改善痛风性关节炎的作用,主要通过抑制NLRP3炎症小体的激活从而抑制炎症因子的生成来实现。