SD大鼠线栓法局灶性脑缺血/再灌注模型的改进

目的探索大鼠线栓法局灶性脑缺血/再灌注模型制备方法的改进。方法按照文献方法,用头端处理过的尼龙钓丝,从颈外动脉向颈内动脉插入,可逆性阻断大鼠一侧中动脉。结果在模型制作过程中,遇到的最大困难是栓线插线时的大出血,以及有时栓线无法正确插入颈内动脉。除了用血管夹夹闭颈总、颈内动脉外,直接在颈总、颈内动脉套上一根丝线牵拉,既有助于手术分离,又有助于控制出血;遇到栓线插入困难时,颈总、颈内动脉的复流可以有效地消除颈内动脉痉挛,成功率明显提高。结论采用预先在颈总、颈内动脉套线,可以方便有效地控制出血。插线困难时,颈总、颈内动脉的复流可以提高成功率。

红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生及Akt/GSK-3β/CRMP-2表达的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠轴突再生的影响及可能的机制。方法健康成年♂SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、红景天苷给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO),ZeaLonga标准评分法评价大鼠神经功能损伤,Western blot法检测大鼠缺血侧脑组织p-Akt(Ser473)、Akt、p-GSK-3β(Ser9)、GSK-3β、p-CRMP-2(Thr514)、CRMP-2蛋白的表达,免疫荧光染色法检测大鼠缺血侧脑组织NF200蛋白的表达。结果与MCAO组比较,红景天苷能明显改善大鼠的神经功能损伤,促进NF200、p-Akt、p-GSK-3β蛋白的表达,抑制p-CRMP-2蛋白表达。结论红景天苷能改善局灶性脑缺血/再灌注大鼠的神经功能缺损,此作用可能与促进Akt、GSK-3β的磷酸化,抑制CRMP-2的磷酸化,进而促进轴突再生有关。

醒脑开窍针刺法对不同时间局灶性脑缺血/再灌注损伤时活体脑片海马神经元[Ca^(2+)]_i的影响

目的:研究醒脑开窍针刺法对局灶性脑缺血/再灌注大鼠脑细胞内Ca2+的调节作用。方法:利用激光共聚焦扫描显微镜观察海马CA1区活体脑片中锥体细胞内Ca2+的分布及动态变化。结果:脑缺血1h时海马CA1区神经元的[Ca2+]i明显升高,再灌注后,神经元内[Ca2+]i随再灌注时间延长而进一步升高,到再灌注6h,达到最高峰,此后虽有下降,但仍高于缺血前水平,再灌注24h时又有第二次钙积聚高峰。针刺对脑缺血/再灌注大鼠各时程的[Ca2+]i均有降低作用,但对其下调程度,醒脑开窍针刺组明显优于传统针刺组。结论:醒脑开窍针刺法可迅速调节缺血/再灌注后海马CA1区神经元细胞内的Ca2+含量,抑制胞内钙超载,拮抗脑缺血/再灌注后继发神经元的损伤。

片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1和GluR2表达的影响

目的研究片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白表达的影响。方法健康成年♂SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型对照组、片仔癀给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO)。Zea-Longa标准评分法评价大鼠神经功能损伤;TTC染色法评价脑梗死体积变化;qPCR法和Western blot法分别检测大鼠缺血侧脑组织皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达。结果与MCAO组比较,片仔癀能明显改善大鼠的神经功能损伤,降低大鼠脑梗死体积,促进NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达。结论片仔癀可能通过抑制局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的下调而发挥脑保护作用。

红景天苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨红景天苷(salidroside,Sal)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用及其机制。方法健康成年♂SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(sham)、模型对照组(MCAO组)、红景天苷给药组(MCAO+Sal组)。通过线栓法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,Longa评分法对大鼠神经功能损伤评分,焦油紫染色法对神经细胞内尼氏(Nissl)小体染色,RT-q PCR技术检测大鼠缺血侧脑组织Neun、Nogo-A与Ng R m RNA的表达,Western blot法检测大鼠缺血侧脑组织Bcl-2、Neun、BDNF、NGF、Nogo-A与Ng R蛋白的表达。结果与MCAO组比较,红景天苷能明显降低神经功能损伤,增加Nissl阳性细胞的数量,促进Bcl-2、Neun、NGF、BDNF的蛋白表达,降低Nogo-A及其受体Ng R的m RNA及蛋白表达。结论红景天苷能够降低MCAO模型大鼠神经功能损伤,增加Nissl阳性细胞数目,提高Neun的表达,具有神经保护作用,此作用是通过促进抗凋亡因子Bcl-2及神经营养因子NGF、BDNF的蛋白表达,下调轴突生长抑制因子Nogo-A及其受体Ng R的蛋白表达所实现。

花椒毒酚抑制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后中性粒细胞浸润和脑水肿

目的研究花椒毒酚对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后中性粒细胞浸润、细胞粘附分子表达及脑水肿的影响。方法线栓法短暂阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血(2 h)再/灌注(24 h)损伤模型,缺血后1 h和12 h两次腹腔注射花椒毒酚2.5、5和10 mg.kg-1,再灌注24 h,检测大鼠神经功能行为缺陷评分、脑水肿和脑梗死范围,分光光度法测定缺血区脑组织中Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase和髓过氧化物酶(MPO)的活性,免疫组织化学染色测定大脑皮层细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和E选-择素(E-selectin)的表达。结果花椒毒酚能改善大鼠脑缺血/再灌注后神经功能行为缺陷评分,减轻脑水肿和降低脑梗死范围,增强Na+,K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性,降低脑组织中MPO的活性,抑制ICAM-1和E-selectin表达。结论花椒毒酚对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其机制可能与其抑制炎症反应和减轻脑水肿有关。

红景天苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经生长相关蛋白的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注损伤(I/R)后神经生长蛋白(GAP-43)表达的影响。并探讨其可能的机制。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R模型组和红景天苷组,采用线栓法制造大鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)模型,MCAO2h后恢复再灌注。用免疫组化方法检测再灌注后1d、3d、7d、14d、21d的与个时间点GAP-43的表达。结果红景天苷明显减小梗死灶范围,梗死灶周围皮质神经元损伤明显减轻。假手术组中枢神经系统GAP-43表达较少,I/R组GAP-43阳性表达,在术后1d开始增高,3d表达最强,高水平维持到7d,14d明显降低,但未降至正常水平。红景天苷组各个时间点GAP-43阳性表达强度均显著高于I/R对照组(P<0.05)。结论红景天苷能提高脑缺血/再灌注后GAP-43的表达,促进轴突生长,易化脑缺血再灌注损伤后神经可塑性。

利莫那班对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的探讨大麻素1(CB1)受体拮抗剂利莫那班对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型。36只雄性大鼠随机分为假手术组、手术组、尼莫地平对照组、利莫那班低剂量组、中剂量组和高剂量组。再灌注24 h后进行神经功能评分(NFS),TTC染色测定梗死面积,HE染色检测脑组织病理变化,免疫组化染色观察P-erk1/2和caspase-3免疫阳性表达,并检测大鼠脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)变化。结果利莫那班能明显改善大鼠的神经行为,缩小梗死面积,并使脑组织病理改变减轻,SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,下调caspase-3的表达,上调P-erk1/2的表达。结论利莫那班对局灶性脑缺血/再灌注大鼠有明显的保护作用,其机制可能与拮抗大麻素受体、抑制细胞凋亡有关。

rhAng-1对局灶性脑缺血/再灌注大鼠血脑屏障血管内皮细胞间连接的影响

目的:研究重组人血管生成素1(rhAng-1)对局灶性脑缺血/再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响及脑微血管内皮细胞间连接蛋白表达的变化。方法:大鼠随机分8组(n=10):①手术组;②缺血组;③～⑤生理盐水+缺血/再灌注12 h,48 h,7 d组;⑥～⑧rhAng-1+缺血/再灌注12 h,48 h,7 d组。用伊文思兰渗透性实验检测血脑屏障通透性;TTC法检测脑梗死面积;按Zea Longer评分标准对大鼠神经功能损伤进行评分;用免疫组化、RT-PCR和West-ern blot法检测occludin、ZO-1和VE-cadherin的表达。结果:rhAng-1可明显降低局灶性脑缺血/再灌注大鼠血脑屏障通透性,降低脑梗死面积;rhAng-1可使细胞间连接蛋白occludin、ZO-1和VE-cadherin的表达增加。结论:rhAng-1通过上调脑微血管内皮细胞间连接蛋白occludin、ZO-1和VE-cadherin的表达降低局灶性脑缺血/再灌注大鼠血脑屏障通透性。

红景天苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠突触超微结构的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注损伤后突触结构和数密度的变化。方法采用线栓法制造大鼠大脑局灶缺血(2h)/再灌注模型(I/R模型),于灌注后1d、3d、7d、14d时间点断头取脑,电镜观察突触结构和数密度的变化。结果I/R模型组数目减少,7d降至最低,14d突触数目回升;突触结构随再灌注时间延长损伤加重,14d有所恢复;红景天组突触损害程度减轻,突触数目增加(P<0.05),突触数密度恢复的时间提早至7d。结论红景天苷可以减轻脑缺血再灌注后突触的损伤,易化突触可塑性。

组织自发荧光在大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤中的应用

目的基于特定的荧光检测技术,探讨组织自发荧光在大鼠局灶性脑缺血及再灌注损伤中的应用。方法本研究通过caliper精诺真IVIS活体成像技术检测大鼠脑组织的自发荧光。通过荧光检测,比较正常大鼠和局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织对应部位自发荧光强弱的变化,并进行定量分析。结果实验结果表明,局灶性脑缺血/再灌注损伤脑组织的自发荧光发生了明显变化,损伤部位的自发荧光信号明显增强,将荧光信号通过活体成像系统进行定量,与正常脑组织比较差异有统计学意义,P<0.01。结论大鼠脑组织在局灶性脑缺血/再灌注损伤后,脑组织的自发荧光明显增强,为大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型的研究及其评价提供新的方法。

缝隙连接阻断剂-辛醇对实验性局灶性脑缺血/再灌注半暗带的影响

目的研究Wistar大鼠局灶性脑缺血/再灌注后72 h内不同时间点半暗带面积的变化及缝隙连接(GJ)阻断剂辛醇(Octanol)对半暗带面积的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、辛醇干预组、DMSO溶剂对照组。大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血/再灌注模型,Zea Longa评分观察行为学变化,免疫组化测定缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达,甲苯胺蓝染色、焦油紫染色并利用图像分析仪测量半暗带面积。结果各组动物神经功能缺损评分无显著差异;缺血/再灌注后Cx43表达无明显变化;缺血/再灌注30 min开始半暗带面积逐渐扩大,于再灌注6 h达最大,以后逐渐缩小;辛醇干预组半暗带面积较对照组相比明显缩小,坏死神经元数目明显减少。结论脑缺血/再灌注对Cx43的表达无明显影响;缝隙连接阻断剂辛醇可明显缩小局灶性脑缺血/再灌注半暗带面积。

线栓法制备SD大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的改良研究

目的本研究的目的旨在对传统线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型方法进行改良以提高实验成功率。方法选择SD大鼠50只,对传统制备方法进行改良。改良方法包括:1)激光多普勒流量仪监测脑血流;2)将脑血流严格降低到正常15%以下;3)对侧颈总动脉夹闭;4)选择头端5 mm包被硅橡胶直径0.35 mm的尼龙线作为栓线。结果脑血流监测可准确判断插线是否成功,当栓线插到合适位置时,脑血流迅速下降至30%以下,但很少降到15%以下;对侧颈总动脉夹闭,一般可将脑血流降至正常15%以下。造模成功率88%。结论改良后方法优于传统方法,制备模型过程中,严密监测脑血流、夹闭左颈总动脉以严格控制脑血流量至正常15%以下,是提高造模成功率的关键。应用头端包被硅橡胶的丝线对血管损伤小。

线栓法大脑中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注鼠模型的脑水肿和脑梗死比的变化

目的:探讨短暂性右侧大脑中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注模型的脑梗死比和脑水肿的变化。方法:线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注不同时间点模型,行TTC染色测量脑梗死比及干湿称重法测量脑含水量。结果:脑缺血再灌注6h时大鼠脑组织即有含水量的增加,并随着时间的推移呈上升趋势,且未损伤侧中段脑组织含水量升高最为显著。TTC染色在缺血再灌注6h即可见白色梗死灶,梗死比在再灌注72h内逐渐增加。结论:局灶性脑缺血再灌注72h内脑梗死比和脑水肿均呈进行性加重。

延龄草甾体皂苷类成分对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨延龄草中4个甾体皂苷类单体对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法将96只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(I/R组),尼莫地平片组(Contrast 1组),银杏叶片组(Contrast 2组),偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y2T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(简称Y3T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y4T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元(YP组)中、高剂量组。采用改良Zea Longa线栓法构建局灶性脑I/R损伤动物模型,Sham组不插入线栓,其余操作同I/R组,各给药组在造模手术前连续给药8 d,造模后各组进行神经功能缺陷评分,然后麻醉处死,取材检测。干湿称重法检测大鼠脑指数,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死体积,试剂盒法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷氨酸的活性和一氧化氮(NO)、Ca^2+的含量,酶联免疫吸附试验检测大鼠脑组织中炎症介质肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察海马CAI区和皮质层区病理学改变。结果与I/R组比较,给药各组能明显降低脑I/R大鼠翻正反射恢复时间、减轻I/R部位的病理损伤,降低脑组织含水量、减少脑梗死体积,提高SOD活性,降低MDA、谷氨酸、NO和Ca^2+含量,抑制激活小胶质细胞释放TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子,病理形态学有明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。结论延龄草中4个甾体皂苷类单体对局灶性脑I/R损伤具有明显保护作用,其机制可能与抗炎及抗氧化应激有关。

MC-002对大鼠局灶性脑缺血/再灌注治疗时间窗的研究

目的:研究受试药3-甲氧基-4-O-(2'-亚甲基-3'5'6'-三甲基吡嗪基)肉桂酸(MC-002)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(CIRI)的治疗时间窗。方法:线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)2 h/再灌注22 h,并于复灌后0、0.5、1、2、4 h时治疗给药。观察MC-002对CIRI大鼠脑功能、脑梗死体积、脑含水量、组织形态学的影响以及MC-002各剂量组对大鼠脑组织内生化指标的影响。结果:MC-002在复灌后0、0.5、1、2 h给药能够显著性改善MCAO后大鼠的脑神经功能(P<0.05,P<0.01),降低大鼠的脑梗死率和含水量(P<0.05、P<0.01);增加CIRI大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活力(P<0.01),降低丙二醛(MDA)及乳酸(LD)含量(P<0.05,P<0.01)。脑组织病理切片结果显示,和模型组比较,治疗组神经细胞形态和数目均得到显著改善。结论:MC-002 2 h内治疗给药对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤有很好的保护作用。

电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质胶质瘢痕形成的影响

目的 观察电针对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)大鼠大脑皮质胶质瘢痕形成的影响。方法 采用线栓法构建局灶性脑缺血/再灌注模型,选取“百会”穴(GV 20)及左侧“四关”穴(合谷LI 4/太冲LR 3)为电针穴位。78只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、局灶性脑缺血/再灌注(I/R)组、局灶性脑缺血/再灌注+电针(I/R+EA)组。再灌注后7 d,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估神经功能缺损情况,HE染色观察缺血侧大脑皮质损伤情况,免疫荧光标记缺血侧大脑皮质胶质纤维酸性蛋白(GFAP)^(+)/神经蛋白聚糖(neurocan)^(+)、GFAP^(+)/磷酸肌酸蛋白聚糖(phosphacan)^(+)细胞,分析各组GFAP、neurocan及phosphacan平均免疫荧光强度。采用Real-time PCR分析各组缺血侧大脑皮质GFAP、neurocan及phosphacan mRNA含量。结果 与I/R组相比,I/R+EA组大鼠mNSS评分明显降低(P<0.01),脑组织损伤程度明显减轻。Sham组GFAP^(+)/neurocan^(+)、GFAP^(+)/phosphacan^(+)细胞非常少。I/R组星形胶质细胞胞体肥大,细胞突起增多、增粗,GFAP^(+)/neurocan^(+)和GFAP^(+)/phosphacan^(+)细胞明显多,而I/R+EA组GFAP^(+)/neurocan^(+)和GFAP^(+)/phosphacan^(+)细胞明显较I/R组减少。此外,I/R+EA组GFAP、neurocan及phosphacan平均免疫荧光强度,以及上述各指标的mRNA含量均明显低于I/R组(P<0.05)。结论 电针可促进局灶性脑I/R大鼠神经功能恢复,减轻脑组织损伤,这可能与电针抑制大脑皮质胶质瘢痕形成有关。

异氟醚对局灶性脑缺血/再灌注大鼠血管生成及Smad信号通路的影响

目的探讨异氟醚对脑缺血/再灌注大鼠血管生成的影响及其可能机制。方法健康成年♂SD大鼠40只,随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、异氟醚后处理组(ISO组)和异氟醚后处理+Smad3特异性抑制剂SIS3 HCl组(ISO+SIS3组)。线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),24 h后Zea-Longa法评估大鼠神经功能损伤,HE染色评估脑组织病理学损伤情况,尼氏染色评估缺血脑组织中健存神经元情况,TUNEL法评估脑组织凋亡情况,免疫荧光检测脑组织中VEGF蛋白和CD34蛋白的表达水平,Western blot对脑组织中p-Smad3、Smad3、VEGF和CD34进行定量分析。结果异氟醚能明显降低大鼠的神经行为学评分,减轻脑组织病理学损伤,增加缺血脑组织中健存神经元数量,减少损伤脑组织中的凋亡细胞,增强p-Smad3、VEGF和CD34蛋白的表达;Smad3抑制剂逆转了异氟醚的脑保护作用,加重了脑缺血/再灌注损伤,抑制p-Smad3、VEGF和CD34的蛋白表达。结论异氟醚能改善大鼠脑缺血/再灌注损伤,其保护机制与激活Smad信号通路,促进VEGF和CD34蛋白表达,进而促进血管生成有关。

缺血后处理抑制TLR2信号通路对大鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用

目的研究缺血后处理对局灶性缺血和再灌注所造成脑损伤和神经炎症的影响。方法将成年雄性Wistar大鼠随进分为假手术组、局灶性缺血组、缺血后处理组。通过大脑中动脉闭塞术制备局灶性缺血,缺血后处理即在缺血后2 h进行3次30 s/30 s的再灌注/再阻塞。对脑梗死体积、神经系统功能、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的转录水平、TNF-α、IL-1β和TLR2的表达水平进行检查。结果缺血后处理组的脑梗死体积显著小于局灶性缺血组,神经系统功能也得到显著改善。此外,缺血后处理组抑制了TNF-α和IL-1β的转录,及TNF-α、IL-1β和TLR2的表达。结论缺血后处理组可以保护由局灶性缺血/再灌注造成的脑损伤并改善其神经系统功能,这与TNF-α和IL-1β转录的弱化,及TNF-α、IL-1β、TLR2表达的抑制有关。

蛇床子素对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制

目的研究蛇床子素对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制。方法采用短暂阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血(2h)再灌注(24h)损伤模型,缺血后1h分别舌下静脉注射蛇床子素5和10mg·kg-1,再灌注24h,按Longa法对大鼠神经功能行为缺陷进行评分后,用干湿重法测定大鼠脑水肿;测定缺血区脑组织中IL-1β、IL-8、NO的含量和髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果蛇床子素能改善大鼠脑缺血/再灌注后神经功能行为缺陷评分,减轻脑水肿,降低大鼠脑组织中IL-1β、IL-8和NO含量,抑制脑组织中MPO和iNOS的活性。结论蛇床子素对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,作用机制可能与其抑制炎症反应有关。