积雪草苷通过激活PI3K/Akt信号通路缓解局灶性脑梗死大鼠脑组织损伤和诱导血管新生

目的:探究积雪草苷(Asiat)对局灶性脑梗死大鼠脑组织损伤和血管新生的作用和机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为健康对照(Ctrl)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)组、Asiat(10mg/kg)组、Asiat(20mg/kg)组和Asiat(50mg/kg)组。除Ctrl组外,其余组大鼠采用线栓法复制大鼠MCAO模型,Asiat(10、20、50mg/kg)组分别腹腔注射10、20和50mg/kg的Asiat。7d后处死大鼠,摘取脑组织并收集血液,用HE染色检测脑组织损伤,Tunnel染色检测细胞凋亡,ELISA检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)浓度,免疫印迹检测Ki67、Caspase-3、Bcl-2、Bax、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体2(VEGFR2)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、p-PI3K、Akt和p-Akt的表达。结果:与Ctrl组比较,MCAO组大鼠脑组织损伤加重;与MCAO组比较,Asiat(10、20、50mg/kg)组大鼠脑组织损伤有所减轻,并具有量效关系;MCAO组大鼠脑组织细胞凋亡率、Caspase-3和Bax表达水平与Ctrl组比较明显升高,Ki67和Bcl-2表达明显被抑制;Asiat(10、20、50mg/kg)组细胞凋亡率、Caspase-3和Bax表达水平与MCAO组比较明显降低,Ki67和Bcl-2表达水平明显升高;同时,与Ctrl组比较,MCAO组大鼠血清NO和MDA浓度明显升高,SOD浓度显著降低;与MCAO组比较,Asiat(10、20、50mg/kg)组大鼠血清NO和MDA浓度显著降低,SOD浓度显著升高;此外,Asiat(10、20、50mg/kg)还能促进MCAO模型大鼠VEGF和VEGFR2的表达,升高p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比值。结论:Asiat能减轻脑梗死大鼠脑损伤并促进血管新生,作用机制可能与诱导PI3K/Akt通路激活有关。

赤芍总苷对局灶性脑梗死大鼠脑组织Notch信号通路的影响

目的探索赤芍总苷对局灶性脑梗死大鼠脑组织Notch信号通路的影响。方法制备脑卒中大鼠并分为5组(模型组、赤芍总苷低剂量组、赤芍总苷中剂量组、赤芍总苷高剂量组和尼莫地平组),另设假手术组大鼠为对照组,每组20只。所有组别连续给药20d。检测各组大鼠的体质量、脑含水量及脑梗死大小以及脑组织的NICD、Hes1和Hes5的蛋白和Hes1和Hes5mRNA表达。结果各组大鼠给药前的体质量差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,与对照组相比,模型组体质量降低(P<0.05),NICD、Hes1和Hes5蛋白表达增高(P<0.05),Hes1和Hes5mRNA增高(P<0.05);与模型组相比,赤芍总苷各组及尼莫地平组体质量增高(P<0.05),NICD、Hes1和Hes5蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05),Hes1和Hes5mRNA均有不同程度降低(P<0.05),且呈剂量依赖性趋势。结论赤芍总苷可通过抑制脑组织Notch信号通路以治疗大鼠局灶性脑梗死。

局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量与神经细胞凋亡的实验研究

目的:研究大鼠局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量及神经细胞凋亡。方法:光化学法诱导大鼠局灶性脑梗死模型,应用激光多普勒微循环测量仪检测局灶性脑梗死后各时间点坏死区和半暗带皮层血流量;TdT-介导dUTP-生物缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞。结果:脑梗死后坏死区皮层血流量呈波浪样改变,3 h降至最低,为正常血流量的9.36%±1.72%,6h后回升,12 h达高峰,为正常31.18%±1.44%,24-48 h血流量再度下降,与3 h相比无显著差异(P>0.05)。半暗带皮层血流量6 h降至最低,为正常皮层血流量的30.88%±7.11%,9-48 h上升,至48 h血流恢复至正常91.90%±4.56%,与其它组差异显著(P<0.05)。TUNEL结果显示,局灶性脑梗死组6 h开始出现凋亡细胞,主要集中于半暗带区,呈半球状向四周放射样扩展,随梗死时间的延长凋亡细胞逐渐增多,梗死48 h后凋亡细胞达峰值。结论:局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量与神经细胞凋亡具有明显的关系,其血流量的恢复引起的再灌注损伤最终导致了迟发性神经细胞凋亡。

丁苯酞对局灶性脑梗死大鼠脑水肿及咬合蛋白表达的影响

目的探索丁苯酞对局灶性脑梗死大鼠脑水肿及咬合蛋白表达的影响。方法随机选取成年Sprague-Dawley雄性大鼠125只,分为对照组、模型组和丁苯酞组。丁苯酞组给予丁苯酞软胶囊灌胃。观察不同时间点大鼠脑水肿面积、脑组织形态学变化、脑组织含水量变化、梗死灶周围皮层咬合蛋白表达变化。结果与模型组相比,丁苯酞组脑水肿面积明显减少。脑组织含水量明显降低。咬合蛋白表达量明显增加。结论丁苯酞软胶囊可明显减少局灶性脑梗死大鼠脑水肿的形成,增加大脑皮层咬合蛋白的表达。

安定对大鼠局灶性脑梗死半影区神经细胞死亡的保护作用

目的 研究安定对光化学诱发脑梗死后细胞死亡的保护作用 .方法 使用光化学诱发的大鼠局灶性脑缺血模型 .采用原位末端标记技术 (TU NEL)检测凋亡细胞 .大鼠脑梗死术后存活 3,6 ,12 ,2 4 ,4 8和 72 h,分别观察梗死灶坏死中心面积和凋亡细胞数目 .术前 2 4 h开始腹腔注射安定 (10mg·kg- 1· 8h- 1 ) ,直到处死动物 .结果 TUNEL 阳性细胞位于坏死中心与正常皮层之间的半影区 .TUNEL 阳性细胞的均数随着梗死后时间的延长逐渐增多 ,2 4 h达到高峰 .在2 4 h时间点 ,安定治疗组梗死坏死中心的平均最大面积和TUNEL阳性细胞均数与对照组相比 ,明显减少 (P<0 .0 0 1) .结论 安定可明显减少成年大鼠局灶性脑梗死后的细胞坏死和凋亡 .

三七总皂苷对局灶性脑梗死大鼠海马CA1区NogoA/NgR_1/RhoA信号通路蛋白表达的影响

目的探讨三七总皂苷(total saponins of panax noto ginseseng,PNS)对局灶性脑梗死大鼠海马CA1区神经元保护及促进神经重塑的机制。方法将动物随机分为Y27632组、PNS加Y27632组、假手术组和手术组,对除了假手术组外的所有动物,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,造模成功且未分组的动物根据Longa评分和体重进行随机分组,分别为模型组、PNS组、尼莫地平组。观察造模7d后大鼠一般活动状态、体重指数和海马CA1区神经元形态学及Nogo-A、NgR1和RhoA蛋白表达变化。结果与假手术组比较,模型组Nogo-A、NgR1和RhoA蛋白表达增多(P<0.01);与模型组比较,PNS组大鼠Nogo-A、NgR1和RhoA蛋白表达均下降(P<0.05),PNS加Y27632组NgR1和RhoA蛋白表达降低(P<0.05),Y27632组RhoA蛋白表达下降(P<0.01)。结论 PNS具有与Y27632相似的作用,对脑梗死后Nogo-A/NgR1/Rho通路的上下游均有调节作用,可促进脑梗死损伤后海马神经功能重塑。

参芪通络方治疗大鼠局灶性脑梗死量效关系

目的研究“参芪通络方”3个不同剂量对大鼠局灶性脑梗死的影响。方法48只雄性SD大鼠采用光化学法制成大鼠局灶性脑缺血模型,采用STATA软件随机分为对照组、参芪通络方大、中、小3个剂量组各12只,分别于光照后3,24,48h、3,4d灌胃治疗,并观察各组大鼠的体重、神经功能评分。于第5天处死,用氯化三苯四唑(TTC)及苏木精-伊红(HE)染色观察梗死灶大小及病理改变。结果参芪通络方治疗组体重恢复较对照组快,大、中剂量组的梗死灶体积明显小于对照组(P<0.001),大剂量组的梗死灶体积小于小剂量组(P<0.05),参芪通络方治疗组大鼠神经元的缺血性损伤比对照组轻。结论中药“参芪通络方”对光化学诱导的局灶缺血性脑梗死有治疗作用,用药量与治疗作用呈正相关。

血塞通注射液对局灶性脑梗死大鼠不同恢复时点大脑皮层Syp和PSD-95蛋白表达的影响

目的观察血塞通注射液(主要成分为三七总皂苷)在不同时间点对局灶性脑梗死大鼠皮层部位突触后致密物质(post sypaptic Density-95,PSD-95)及突触素(synaptophysin,Syp)蛋白表达的影响,探索三七总皂苷对脑缺血受损神经元重塑的作用机制。方法采用改良Longa方法制备局灶性脑梗死模型,将40只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组、三七总皂苷小剂量组、三七总皂苷大剂量组、尼莫地平组。各组动物分别于术后3d、7d、14d、28d麻醉断头取材,行免疫组织化学检测PSD-95及Syp蛋白的表达。结果模型组PSD-95蛋白表达在术后3d及7d明显降低,14d逐渐恢复正常,到28d时表达量较同时间点假手术组增高(P<0.01);Syp蛋白在术后模型组表达亦明显降低(P<0.01),术后14d及28d,三七总皂苷组的表达较模型组显著升高(P<0.01)。结论三七总皂苷可以促进局灶性脑梗死后PSD及Syp蛋白表达,从而促进神经重塑与修复。

还原型谷胱甘肽对大鼠局灶性脑梗死后丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶表达的影响

目的观察还原型谷胱甘肽对大鼠短暂性局灶性脑缺血时丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为假手术组、缺血模型组和还原型谷胱甘肽治疗组(1200 mg/kg),缺血2 h再灌注6 h后观测各组的神经行为变化,脑梗死体积,脑组织病理学变化,脑组织MDA含量和SOD、GSH-PX活性。结果还原型谷胱甘肽可以改善大鼠局灶性脑缺血引起的神经行为障碍,减少脑梗死体积(P<0.05);可以降低脑组织MDA含量,提高脑组织GSH-PX、SOD活力(P<0.05)。结论外源性谷胱甘肽可通过提高GSH-PX、SOD活力,降低MDA含量,增强机体清除自由基的能力,及减少大鼠脑组织氧自由基的堆积而发挥对脑缺血再灌注时的保护作用。

大鼠局灶性脑梗死后神经细胞凋亡与坏死的时空动态演变

目的:探讨大鼠局灶性脑梗死后神经细胞凋亡与坏死的时间、空间分布的动态演变及二者时空、时效关系的比较。方法:采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型,利用苏木精-伊红染色与TUNEL技术观察局灶性脑梗死3～48h,3～6d后神经细胞凋亡与坏死情况。结果:坏死细胞主要集中于梗死区,凋亡细胞分布于半暗带区,二者均呈半球状向四周放射性扩展;光照后3h梗死中心有大量坏死细胞出现,而凋亡细胞于梗死后6h才出现,随着梗死时间的延长,二者均有明显的增加,坏死细胞于梗死后24h达高峰,凋亡的神经细胞在3d达高峰。结论:局灶性脑梗死后坏死细胞主要位于梗死区,凋亡细胞主要分布于半暗带区,并均呈半球状向四周放射性扩展。细胞凋亡的出现较晚,可能使抗凋亡成为治疗脑梗死的一种有效的途径之一。

电针对局灶性脑梗死大鼠RhoA/ROCK表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑梗死后大脑皮质RhoA和ROCK(Rho-associated kinases)的表达以及电针刺激对其表达的影响。方法:将成年健康雄性SD大鼠40只,随机分为正常组,假手术组,模型组和电针组,每组十只。模型组和电针组利用改进后的Longa方法制作大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,电针组在大鼠麻醉苏醒后90min进行电针刺激,每天一次,连续针刺14天。每组分别在1d,3d,7d,14d四个时间点进行神经行为学评分。14天时运用免疫组织化学法观测缺血区大脑皮质中RhoA和ROCK的分布和表达,利用免疫印迹法检测缺血区侧大脑皮质RhoA和ROCK的蛋白表达。结果:模型组大鼠神经行为学评分明显高于正常组和假手术组(p<0.01),14天后电针组的神经行为学评分明显低于同时段模型组(p<0.05);免疫组化结果显示,电针组的RhoA和ROCK表达较模型组明显减少(p﹤0.05);Western blot检测结果显示,电针组RhoA蛋白和ROCK蛋白的表达量较模型组RhoA蛋白和ROCK蛋白明显减少(p<0.05)结论:大鼠局灶性脑梗死后脑损区皮质RhoA与ROCK表明显上调,给予电针干预后可降低其表达,这可能是电针促进MCAO大鼠脑损区轴突再生的机制之一。

兔局灶性脑梗死溶栓动物模型的建立

目的 建立脑梗死溶栓动物模型，并探讨溶栓药物对溶栓动物模型的影响及临床意义。方法 采用兔自体动脉血栓，在数字减影动脉造影术（DSA）下栓塞兔大脑中动脉，造成局灶性脑梗死。经氯化-2,3,5,-三苯基四氯唑染色，作光镜病理形态学观察。结果 给予尿激酶后在DSA血管造影下观察到血管再通，证实该梗死模型能较好地反映脑缺血的病理发展过程。结论 提示该梗死模型可作为溶栓动物模型。此模型的建立为临床筛选各种溶栓药物奠定了动物实验学基础。

亚低温和甘露醇对大鼠局灶性脑梗死体积影响的比较

目的 研究亚低温和甘露醇对大鼠局灶性脑梗死体积的影响。方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,缺血 2小时、再灌注 4小时后分别观察亚低温和甘露醇的治疗效果。结果 亚低温和甘露醇均使脑梗死体积明显减小 ,两组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

“楼梯测试”评价局灶性脑梗死大鼠前肢功能研究

目的:探索"楼梯测试"评价局灶性脑梗死大鼠前肢延伸和抓取能力的有效应性。方法:实验选择左利爪SD大鼠18只,随机分为正常组、假手术组和手术组,每组6只;正常组不作任何手术处理,假手术组仅作颈外动脉结扎,手术组用线栓法制成局灶性脑梗死大鼠模型;用树脂玻璃材料做成的可抽取楼梯测试盒比较3组大鼠前肢的延伸和抓取能力。结果:所有大鼠经过适当训练均能完成"楼梯测试"实验,3组在训练的第7天组间无统计学差异(P>0.05);正常组和假手术组在3个时间点的抓取能力均无统计学差异(P>0.05);手术组的术后第7天和第14天的抓取能力与术前第1天比较均有显著性差异(P<0.05),术后第7天和第14天抓取能力无统计学差异(P>0.05)。结论:"楼梯测试"能简单和有效的评估局灶性脑梗死大鼠前肢独立伸展技术能力,能客观定量地反映实验大鼠的前爪功能,是研究实验干预脑梗死大鼠前肢功能恢复的方法学手段之一。

黄芪多糖对大鼠局灶性脑梗死的影响

目的:研究黄芪多糖对大鼠局灶性脑梗死的影响及其作用机制。方法:60只大鼠随机分为6组:假手术组,模型组,黄芪多糖大、中、小剂量(2,1,0.5g·kg-1·d-1,ig)组和阳性对照步长脑心通组(1g·kg-1·d-1,ig),每组10只。治疗组于术后3h,1d,2d,3d和4d给药,bid。用光化学诱导方法造成大鼠局灶性脑梗死,观察造模后各组大鼠的一般情况,进行神经功能评定;以及造模后5d时各组大鼠的脑梗死体积及病理学变化,进行统计学分析。结果:神经功能评定各组大鼠间无统计学差异,脑缺血5d后,黄芪多糖大、中剂量组与步长脑心通组脑梗死体积明显小于模型对照组及黄芪多糖小剂量组,梗死灶缺血性损伤明显减轻;黄芪多糖作为单药成分在大剂量给药时疗效可与步长脑心通复方制剂疗效相当。结论:黄芪多糖对光化学诱导大鼠局灶性脑梗死具有治疗作用。

小鼠局灶性脑梗死后半暗带的动态变化及尼莫地平的干预作用

目的:观察小鼠梗死区体积及半暗带动态变化及尼莫同的干预作用。方法:18只雄性昆明种雄性鼠单纯随机分为7单纯缺血组(单缺组)、术后即刻给药组和长前给药组3组,每组6只。经右侧颈总动脉将尼龙单丝线栓至大脑中动脉造成永久性缺血模型。经尾静脉及腹腔注射尼莫同。MRI动态观察同一动物缺血后第1,3,5,7天梗死灶大小,直接观察半暗带情况。结果:单缺组术后第1天脑梗死累及皮质及基底核,第3天达高峰,出现中线结构移位。术前给药组术后各时间点梗死区仅累及额叶及颞叶底面的皮质,很少累及基底核。术后第3,5,7天脑梗死术前给药组犤(98.97±83.31),(106.19±47.00),(107.12±62.34)mm3犦和术后即刻给药组犤(119.66±68.65),(110.95±45.69),(110.23±43.29)mm3犦均低于单缺组犤(287.26±89.21),(269.45±62.11),(224.00±56.88)mm3犦。结论:小鼠大脑中动脉闭塞后,皮质为脑梗死中心区,基底核可能为半暗带,尼莫同可挽救半暗带,减少梗死体积。

经静脉移植骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑梗死Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(MSCs)治疗大鼠局灶性脑梗死时bcl- 2蛋白的表达。方法 体外培养及扩增骨髓基质细胞后,将实验大鼠2 4只分为3组:第1组(n=8)单纯大脑中动脉闭塞(MCAO)组;第2组(n=8) ,MCAO后4 8h经尾静脉注射生理盐水1ml;第3组(n=8) ,MCAO后4 8h经尾静脉注射1×10 7个MSCs。神经功能严重程度评分日一次进行。所有动物均在MCAO后第8天处死。用免疫细胞化学方法体外鉴定骨髓基质细胞;免疫组织化学染色显示鼠脑内bcl- 2蛋白表达情况。结果 原代培养2 0 d后可分离得到骨髓基质细胞,在5代以前生长形态相对稳定。与对照组相比,实验组大鼠的神经功能严重程度评分有明显改善(P<0 .0 0 1) ,且脑内bcl-2表达增加(P<0 .0 0 1)。结论 经静脉移植骨髓基质细胞可明显改善大鼠局灶性脑梗死后神经功能恢复,并可上调脑内bcl- 2蛋白表达水平。

一种基于血管内皮细胞损伤的大鼠局灶性脑梗死模型

目的:建立一种因血管内皮细胞损伤而诱导的大鼠局灶性脑梗死模型。方法:取S-D大鼠11只,分离左侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉。结扎左颈外动脉远心端,夹闭左翼腭动脉和颈总动脉,经颈外动脉逆行插管并缓慢注入月桂酸钠至颈内动脉系统,造成大脑中动脉血管内皮细胞受损。结果:从模型动物的行为表现、梗死灶形态学和病理学进行考察,10只大鼠均产生一定程度的脑梗死表现,造模成功率为90.9％。结论:该模型的稳定性和重复性较好,能在大脑中动脉的供血区产生恒定的梗死灶,适合进行脑缺血损伤的有关实验研究。

大鼠脑电近似熵在局灶性脑梗死时的变化

目的观察大鼠发生局灶性脑梗死时脑电(EEG)参数近似熵(ApEn)的变化,探讨ApEn是否对脑梗死的发生具有监测作用。方法选择SD大鼠24只,随机分为两组:脑梗死组(n=12),线栓法阻塞右侧大脑中动脉;对照组(n=12),行颈内动脉分离、结扎,不阻塞大脑中动脉。记录梗死组在梗死前(T0)、梗死即刻(T1)、梗死后5、15、30、60min(T2～5)时大鼠脑部缺血区域(C4)和正常区域(C3)的ApEn。按相同时间点记录对照组的ApEn。结果对照组各时间点C3、C4间及假手术后与基础值相比较均无统计学差异(P>0.05)。梗死组梗死前大鼠脑部C3、C4的EEG参数ApEn基本相同。梗死后,脑部C3、C4的ApEn较梗死前均升高,C4低于C3(P<0.05);ApEn随时间进行性下降;梗死后30min时,C4的ApEn已低于梗死前的值(P<0.05)。对照组C3、C4区域各个时间点的ApEn均无明显差异。两组在梗死前和假手术时的ApEn比较无明显差异。结论ApEn可对大鼠脑部出现的单侧局灶性梗死进行监测,可能对梗死后的脑缺血程度有一定的判定作用。

绞股蓝总苷对局灶性脑梗死大鼠脑梗死面积、神经功能及ROCK-1和ROCK-2表达的影响

目的:探讨分析绞股蓝总苷对局灶性脑梗死大鼠脑梗死面积、神经功能及ROCK-1和ROCK-2表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为模型组、假手术组和绞股蓝总苷组,每组40只,在复制模型术后的第2 h,3 d,7 d对其神经功能进行评价,在首次给药后2 h和7 d,从每组随机选取5只大鼠进行TTC染色,计算其梗死面积,另取5只对其大脑的干湿重比进行计算。在术后第4,5 w末通过Westernbolt对大鼠的ROCK-1和ROCK-2蛋白的表达进行观测。结果:模型大鼠在脑缺血后出现神经功能的障碍、大面积的脑梗死以及组织水肿,在7 d治疗之后,绞股蓝总苷组大鼠的神经功能得到改善,脑梗死面积减少,脑组织的水肿减轻,相比于模型组,差异显著(P<0.05)。模型组大鼠的ROCK-1和ROCK-2蛋白表达在术后第4 w末显著低于假手术组大鼠(P<0.05),而在第5 w末,二者间差异已无统计学意义。绞股蓝总苷组大鼠的ROCK-1和ROCK-2蛋白表达于第4、5w末均显著低于模型组和假手术组(P<0.01)。结论:绞股蓝总苷可以使局灶性脑梗死大鼠的神经功能得到改善,梗死面积和脑组织水肿得以减少,ROCK-1和ROCK-2的表达得到抑制。