小鼠局部淋巴结实验在红花注射液致敏性研究中的应用

目的建立小鼠局部淋巴结实验模型检测红花注射液的致敏性,探讨其用于评价中药注射剂致敏的可行性。方法BALB/c小鼠90只,随机分为9组,即3个阳性对照组(分别给予2,4,6-三硝基苯磺酸、链脲佐菌素、D-青霉胺),1个阴性对照组(给予磷酸盐缓冲液)和5个供试品组(分别给予5批红花注射液),每组10只,在小鼠左后肢足趾部注射相应试药1次,每只50μL,第7天处死动物,采用小鼠局部淋巴结实验方法(LLNA)测定腘窝淋巴结质量指数(WI)及细胞指数(CI),采用流式细胞术法测定淋巴细胞亚群,观察各供试品组与对照组的差别。采用豚鼠全身主动过敏实验(ASA)对5批供试品进行同步检测,并与小鼠局部淋巴结实验进行比较。结果小鼠局部淋巴结实验结果显示5批红花注射剂中,仅1批WI有增加的趋势,且T淋巴细胞比例升高,提示这批供试品可能引起淋巴结的增大和T淋巴细胞的增殖,具有一定的致敏潜在风险,而其他批次供试品指标的变化均差异无统计学意义;ASA结果显示5批红花注射剂均未见变态反应。两种方法的结果基本一致。结论在该实验条件下,初步判定小鼠局部淋巴结分析实验可以作为ASA的一种替代方法评价红花注射液致敏的潜能。

BrdU-ELISA局部淋巴结实验对DATF小鼠皮肤致敏性的评价

目的通过溴脱氧核苷尿嘧啶-酶联免疫吸附测定（BrdU—ELISA）局部淋巴结实验，评价3，4-双（4’-氨基呋咱基-3’）氧化呋咱（DATF）对小鼠皮肤的致敏性。方法选择SPF级BALB／C小鼠30只，随机分为5组，即高、中、低剂量DATF组、阳性对照组和溶剂对照组，每组6只。高、中、低剂量DATF组分别给予50％、25％、10％（0．50、0．25、0．10g／ml）的DATF溶液，阳性对照组给予1％2，4-二硝基氯苯（DNCB）溶液，溶剂对照组给予丙酮／橄榄油（4：1）。给药结束后，取耳后淋巴结并制备细胞悬液；采用ELISA法检测BrdU掺人测定细胞增殖水平，计算BrdU标记指数（LI）和刺激指数（SI）为1．6时的受试物浓度（ECL6）。结果各组小鼠耳廓厚度差异无统计学意义（P〉0．05），DATF无皮肤刺激性；与溶剂对照组比较，高剂量DATF组和阳性对照组小鼠淋巴结重量明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．05）；与溶剂对照组比较，其他各组BrdULI明显增大，差异均有统计学意义（P〈0．01）；低、中、高剂量DATF组SI分别为6．1、8．8、12．1，DATF的ECL6为2．2％，可确定DATF为极强致敏物质。结论根据经济合作与发展组织第442B项（OECDTG442B）实验指导原则判定，DATF对小鼠皮肤具有极强的致敏性。

小鼠局部淋巴结分析试验噻唑蓝比色法实验条件的研究

目的研究并初步制定小鼠局部淋巴结分析试验噻唑蓝比色法(LLNA-MTT法)评价化学品致敏性的判定标准。方法采用正交设计,对LLNA(MTT法)试验的3个关键因素各设3个水平进行试验,以确定最佳水平,并对小鼠淋巴结重量、淋巴细胞计数、吸光度值做相关性分析。结果采用正交试验结果的最佳水平进行试验,2,4-二硝基氯代苯(DNCB)与对照组比较,小鼠淋巴结重量,淋巴细胞计数及吸光度值均增加,且有统计学意义(P<0.01),刺激指数大于3,提示具有致敏性。结论初步制定了小鼠局部淋巴结分析试验评价皮肤变态反应的标准。

BrdU掺入法评估化学物皮肤致敏性的实验研究

目的探讨BrdU掺入法在检测和评价化学物对小鼠皮肤接触致敏性的应用。方法选择24只雌性BALB/C小鼠随机分为6组,受试物为2,4-二硝基氯苯(DNCB)和三氯乙烯(TCE),对照组受试物为AOO溶剂。将受试物连续3d涂抹于小鼠双耳背,第4天腹腔注射BrdU标记液,第5天摘取小鼠耳部淋巴结,称重,然后制备淋巴细胞悬液,用ELISA检测技术测定BrdU掺入淋巴细胞的水平,将实验组的小鼠耳部淋巴结重量和BrdU标记指数分别与对照组进行方差分析比较。结果溶剂对照组的小鼠淋巴结重量为(0.0060±0.0015)g,0.10、0.25、0.50、1.00%浓度的DNCB实验组的淋巴结重量为(0.0120±0.0014)、(0.0137±0.0006)、(0.0156±0.0017)、(0.0241±0.0035)g,20%TCE实验组的小鼠淋巴结重量为(0.0155±0.0017)g;溶剂对照组的BrdU标记指数为0.157±0.023;各浓度的DNCB实验组的BrdU标记指数分别为0.349±0.009、0.412±0.013、0.445±0.009、0.536±0.026;20%TCE实验组的BrdU标记指数为0.433±0.025。DNCB各浓度组、TCE组的淋巴结重量和BrdU标记指数与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论BrdU掺入法作为一种改良的局部淋巴结实验方法,它具有评估化学物皮肤接触致敏性的能力。

小鼠局部淋巴结分析试验替代豚鼠皮肤变态反应试验

目的研究小鼠局部淋巴结分析实验(LLNA,MTT法)是否可以作为豚鼠皮肤变态反应试验(BT)的一种替代方法。方法用小鼠局部淋巴结分析实验和豚鼠局部封闭涂皮试验对10种受试物进行同步试验,对2种试验的结果进行一致性分析。结果 LLNA(MTT法)和BT这2种试验方法对凡士林、DNCB和5种化妆品的试验结果是一致的;有1种化妆品BT结果为阳性,而LLNA(MTT法)结果为可疑阳性;有2种化妆品BT结果为阴性,而LLNA结果为阳性。统计结果显示:两方法判定受试物皮肤变态反应的结果,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在该试验条件下,初步判定小鼠局部淋巴结分析试验可以作为豚鼠皮肤变态反应试验的一种替代方法。

应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性研究

目的研究应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性。方法将受试物2,4-二硝基氯苯(DNCB)、三氯乙烯(TCE)、三氯乙酸、抗菌冻胶对小鼠双耳背皮肤进行涂抹,25μl/耳,连续染毒3 d,第4天每只小鼠腹腔注射BrdU标记液(0.3ml/只)。第5天取小鼠耳部淋巴结称重,然后制成单细胞悬液,应用BrdU-ELISA法检测淋巴细胞增殖。同时应用豚鼠局部封闭涂皮法检测受试物的致敏性。结果DNCB、TCE各浓度组与AOO溶剂对照组BrdU标记值比较,差异均存在统计学意义(P<0.01),DNCB各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较,差异均存在统计学意义(P<0.01),而TCE各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。抗菌凝胶组与三氯乙酸分别与空白对照组比较,其中抗菌凝胶组、1%、5%三氯乙酸BrdU标记值差异均无统计学意义,10%三氯乙酸差异则存在统计学意义(P<0.05)。结论BrdU-ELISA法具有检测化学物皮肤致敏性的能力,但其灵敏性比标准LLNA和传统豚鼠局部封闭涂皮法差,需要进一步优化实验方法。

化妆品致敏性的LLNA:BrdU-ELISA和h-CLAT检测法

目的比较小鼠局部淋巴结试验(local lymph node assay:BrdU-ELISA,LLNA:BrdU-ELISA)和人细胞系活化实验(human cell line activation test,h-CLAT)检测化妆品皮肤致敏性的能力。方法购买市售7种防晒类和祛斑类化妆品,分别按照OECD442(B):LLNA:BrdU-ELISA和OECD442(E):h-CLAT标准方法对样品进行致敏性检测。结果 7种受试物中,LLNA:BrdU-ELISA方法判定4种为致敏阳性物,h-CLAT方法判定6种为致敏阳性物。结论在化妆品致敏性检测中,可以使用h-CLAT方法作为初筛手段,替代部分动物实验。