碱性成纤维细胞生长因子和硫糖铝联合局部应用对扩张皮肤组织结构的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和硫糖铝对扩张皮肤组织结构的影响。方法 白色小猪 9只 ,自身对照。在猪两侧侧胸埋置皮肤扩张器。持续恒压扩张同时实验 组注入 b FGF和硫糖铝 ,实验 组注入b FGF和生理盐水 ,实验 组注入硫糖铝 ,对照组注入生理盐水共 7天。各组完成扩张后第 3天及取出扩张器后 6周取材行组织学检查。结果 实验 组皮肤表皮层增厚更明显 ,颗粒和棘细胞层次更多 ,基底细胞数目增多 ,细胞核肥大 ,染色质变浓 ,排列密集 ,表皮钉突增多 ,呈粗长发育成巨大钉突 ;真皮层厚度变化较轻 ,胶原纤维束粗而密 ,平行于皮面排列 ,弹力纤维明显增加 ;成纤维细胞和毛细血管密度更高 (P<0 .0 5 )。对照组表皮层和真皮层有相应的变化均弱于实验 组 ,术后 3天、6周胶原纤维可见断裂。实验 、 组表皮层和真皮层组织改变与对照组差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。各组纤维包膜厚度近似。结论 在持续恒压扩张同时扩张囊周围注入外源性 b FGF和硫糖铝 ,能更有效地刺激皮肤生物性生长 ,促进扩张速率 。

低氧促进肌成纤维细胞表达和分泌结缔组织生长因子及纤维连接蛋白

目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用。方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2,体积分数),应用Westernblot方法检测低氧和正常氧(21%O2,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α(hypoxiainducedfactor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的。(2)用Westernblot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平。(3)用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FNmRNA表达的变化。(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloprotei-nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达。低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6h,12h和24h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12h最明显(P<0.05);低氧刺激24h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P<0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6h,12h和24h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24h最明显(P<0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6h为正常氧组的64%±13%。低氧刺激肌成纤维细胞3h,FN的mRNA水平开始上升,6h达到正常氧组的135%±13%(P<0.05),12h下降接近正常氧水平。结论:低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展。

肌成纤维细胞与血管重塑

Recent findings demonstrate that adventitial fibroblasts are endowed with several characteristics previously attributed to medial smooth muscle cells. Rapid activation of adventitial fibroblast, which proliferate, migrate, and undergo differentiation to myofibroblasts after balloon induced coronary injury. Myofibroblasts are involved in remodeling of adventitia and may contribute to the formation of the neointima. This review will illustrate the morphologic features, phenotypic modulation of myofibroblasts and its role in vascular remodeling, which raises the possibility of targeted therapies.

肌成纤维细胞与心肌梗死后心室重塑

肌成纤维细胞是一组平滑肌样成纤维细胞,在正常心脏仅存在于瓣膜组织中。急性心肌梗死后,来源于成纤维细胞的肌成纤维细胞被激活,是参与心肌梗死后创伤修复与胶原沉积的主要细胞,在心肌间质纤维化和心室重塑中处于中心地位。

肌成纤维细胞在大鼠心肌梗死后心室重塑中的动态变化及意义

随着人们生活方式的改变,冠状动脉粥样硬化性心脏病尤其是心肌梗死的发病率逐年上升.近年来,随着溶栓及介入技术的发展,急性心肌梗死患者的早期死亡率已明显下降,大量患者进入心肌梗死后的恢复期.

轻度哮喘患者BALF中活化肌成纤维细胞与气道重塑实验研究

【目的】探讨轻度支气管哮喘患者BALF中活化肌成纤维细胞与气道重塑关系。【方法】对10例支气管哮喘患者及8例正常志愿者行纤支镜支气管黏膜活检及肺泡灌洗,采用Giemsa染色对支气管肺泡灌洗液(bron-choalveolar lavage fuild,BALF)进行分类:中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞;培养BALF及活检组织的成纤维细胞,免疫组化方法检测成纤维细胞的特性(脯氨酰-4羟化酶染色,α-平滑肌肌动蛋白染色);采用Western blotting分析其表达胶原蛋白Ⅲ、纤维粘连蛋白的含量、[3H]-脯氨酸渗入评价脯氨酸的含量。【结果】30%的哮喘患者的BALF能分离和培养出成纤维细胞,而对照组中未发现成纤维细胞,发现成纤维细胞的哮喘患者的嗜酸性细胞的比例比对照组增加9.5倍,比未发现成纤维细胞的哮喘患者增加4.6倍;BALF和活检的成纤维细胞均被成纤维细胞标记脯氨酰-4羟化酶染色,而且BALF和活检的成纤维细胞均被肌成纤维细胞标记α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)染色,而且BALF成纤维细胞比活检成纤维细胞表达更多的α-SMA;BALF成纤维细胞较活检成纤维细胞分泌的胶原蛋白Ⅲ增加至2.87倍(P<0.01)、纤维连接蛋白分别增加至1.9倍(P<0.01)。脯氨酸渗入比较增加至4.24倍(P<0.05)。【结论】轻度哮喘患者的BALF中活化肌成纤维细胞参与多炎性反应,与气道重塑有密切的关系。

肌成纤维细胞及其与组织损伤的关系

肌成纤维细胞是伤口肉芽组织中的主要细胞。其形态介于成纤维细胞与平滑肌细胞之间,它的收缩功能与伤口的愈合有关。但在一些正常组织与病理情况中也存在此细胞。本文简要介绍其形态与生理特性以及在组织损伤等方面的作用。

新生猪肌组织成纤维细胞的分离培养和鉴定

研究建立了猪肌组织成纤维细胞体外培养的模型,采用组织块培养方法获得了新生猪肌组织成纤维细胞并进行体外培养。观察细胞形态,通过绘制细胞的生长曲线来研究肌组织成纤维细胞的生长规律,利用RT-PCR和免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定,再用双荧光素酶检测系统来检测细胞的转染效率。通过形态学观察、RT-PCR和免疫细胞化学染色结果表明,已成功培养了猪肌组织成纤维细胞,纯度达90%以上。

人脐带结缔组织的肌成纤维细胞形态学免疫组化的研究

现将人脐带结缔组织的肌成纤维细胞研究的进展综述如下:

肌成纤维细胞自噬趋势对肾组织损伤的影响

自噬是一种程序化的细胞内降解过程,与维持细胞自身稳定及人类疾病发生、发展密切相关。随着在分子和基因水平上对自噬的深入认识,自噬在肾脏中的作用逐渐被人们所关注。肌成纤维细胞作为肾脏损伤过程中的重要合成细胞,关于其自噬能否对肾脏疾病产生影响尚未完全明确。

TSLP促进肌成纤维细胞向哮喘小鼠气道募集

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)与慢性哮喘小鼠气道组织中浸润的肌成纤维细胞的关系。方法:将12只BALB/c小鼠随机分为4组:生理盐水组、屋尘螨(House dust mite,HDM)组、anti-TSLP组、同型对照组。激光共聚焦检测气道组织中出现的肌成纤维细胞。ELISA法检测肺泡灌洗液中TSLP、TGF-β1、IL-25和IL-33的表达水平。结果:拮抗TSLP可显著抑制HDM持续暴露导致的气道结构改变,减少肌成纤维细胞向哮喘小鼠气道组织募集。Anti-TSLP组小鼠BALF中TSLP、TGF-β1和IL-33蛋白水平也较同型对照组明显降低(P值均<0.05)。结论:TSLP促进肌成纤维细胞向慢性哮喘小鼠气道募集是其参与气道重塑的主要机制之一。

肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成中的机制

目的 探讨肌成纤维细胞在病理性瘢痕形成机制中的作用。 方法 对 1998年～ 2 0 0 0年门诊或住院的 13例增生性瘢痕 ,14例瘢痕疙瘩及 7例成熟瘢痕患者的相应组织 ,应用光镜、电镜及免疫组织化学染色 ,进行观察、检测。 结果 增生性瘢痕的超微结构中均可见典型的肌成纤维细胞 ;免疫组织化学染色可见有不同程度表达的肌成纤维细胞。瘢痕疙瘩及成熟瘢痕的超微结构和免疫组织化学结果均未见肌成纤维细胞。 结论 肌成纤维细胞的生物学行为可能与增生性瘢痕的形成及瘢痕畸形有关 ,并可用于增生性瘢痕与瘢痕疙瘩的鉴别。

碱性成纤维细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞在失神经肌肉萎缩中的应用

背景:如何避免失神经性肌萎缩是提高外周神经损伤疗效的关键因素。目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞预防失神经支配肌肉萎缩的作用。方法:通过病毒转染的方法将碱性成纤维细胞生长因子基因转染入大鼠骨髓间充质干细胞,应用MTT法、免疫组化、苏木精-伊红染色光镜观察、RT-PCR、Western blotting及ELISA法检测碱性成纤维细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞的效果及产物的表达。取32只SD大鼠建立坐骨神经损伤模型,实验组肌肉多点注射碱性成纤维细胞生长因子基因转染的骨髓间充质干细胞,对照组注射细胞培养液,移植后2,4,6,8周腓肠肌取材,检测腓肠肌动作电位、残余湿质量、肌纤维横截面积等指标。结果与结论:(1)通过病毒转染的方法,成功将碱性成纤维细胞生长因子基因转染入骨髓间充质干细胞。(2)检测腓肠肌肌肉湿质量残存率、腓肠肌横截面积及肌细胞直径残存率、残存腓肠肌动作电位等指标,实验组均优于对照组(P<0.05)。(3)结果表明碱性成纤维细胞生长因子基因转染的骨髓间充质干细胞植入失神经肌肉中,可减缓肌肉萎缩速度。

碱性成纤维细胞生长因子基因对心肌梗死后冠状血管新生及血管结构的影响

为探讨心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子基因对心肌梗死后冠状血管新生和血管结构的影响。以碱裂解法大量制备质粒 ;采用开胸结扎兔冠状动脉左前室间支法 ,建立兔急性前壁心肌梗死模型。模型制备成功后将动物分为治疗组 (n =1 9)和对照组 (n =1 8) ,并于心肌内分别注射pcDNA3 碱性成纤维细胞生长因子 1 0 0 μg和pcDNA31 0 0 μg,饲养至第 2、6和 1 2周末处死 ;免疫组织化学法观察蛋白表达 ;病理切片观察梗死心肌组织学变化、缺血心肌内血管新生和血管管壁及管腔变化情况。结果发现 :(1 )实验中描记的心电图证实兔急性心肌梗死模型制作成功。 (2 )免疫组织化学观察注射pcDNA3 碱性成纤维细胞生长因子处心肌组织在 6周内有碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达。 (3)病理切片行图象分析计算血管密度发现 :治疗组毛细血管密度和小动脉密度显著高于对照组。 (4 )实验第 6周治疗组与对照组动脉平均管壁厚度分别为 1 9.8± 9.9μm比 1 8.9± 9.6 μm (P >0 .0 5 ) ;1 2周分别为 2 8.3± 1 1 .5 μm比 2 4 .1± 1 1 .3μm (P <0 .0 1 ) ;6周比值分别为 0 .31± 0 .1 6比 0 .2 4± 0 .1 2 (P <0 .0 1 ) ;1 2周分别为 0 .34± 0 .1 5比 0 .2 5± 0 .0 9(P <0 .0 1 )。实验结果提示 ,心肌内注射碱性成纤维细胞生长?

冰蜜生肌膏对兔成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的：观察冰蜜生肌膏促进体外培养兔成纤维细胞增殖的影响.方法：采用消化分离法进行兔成纤维细胞的原代培养,通过形态学和免疫组织化学的方法鉴定成纤维细胞.第3代纯化的成纤维细胞分为5组,空白对照组每孔加入等量的PBS,实验组每孔分别加入125、62.5、31.25、15.625 mg/ml的冰蜜生肌膏提取液进行培养,培养24、48、72 h后分别行MTT法检测每孔的光吸收值（OD值）.结果：冰蜜生肌膏提取液加入到成纤维细胞中培养24、48、72 h后,经MTT法检测,不同浓度（浓度分别为125、62.5、31.25、15.625 mg/ml）冰蜜生肌膏与对照组OD值比较差异有显著性统计学意义（P＜0.05）.结论：15.625 mg/ml浓度冰蜜生肌膏对成纤维细胞的生长有明显促进作用（P＜0.05）,药物浓度在15.625～62.5 mg/ml时其作用随药物浓度升高而增加,并在浓度为62.5 mg/ml时达到最大效应值（P＜0.01）,当药物浓度大于62.5 mg/ml时则作用趋向于饱和,提示一定浓度范围内的冰蜜生肌膏药液能明显增加成纤维细胞数量,且促进作用和浓度呈显著依赖性.

同源性磷酸酶-张力蛋白经PI3K/AKT通路调控关节纤维化肌成纤维细胞增殖

背景:研究显示大鼠关节纤维化中相关调控肌成纤维细胞表达的基因目前报导较少,对抑癌基因同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)在关节纤维化组织的表达目前尚未见报道。目的:探讨关节纤维化大鼠关节囊组织中PTEN基因的表达变化及下游PI3K/AKT信号通路在大鼠关节纤维化中的作用。方法:膝关节固定法建立大鼠膝关节纤维化模型,取膝关节后关节囊,组织块培养法分离培养肌成纤维细胞。采用定量实时PCR检测PTEN mRNA的表达,采用蛋白质印迹Western Blot方法检测肌成纤维细胞中胶原蛋白1-A1、PTEN蛋白的表达情况及下游PI3K,AKT通路的信号分子改变情况。再使用PI3K/AKT通路阻滞剂LY294002对肌成纤维细胞进行处理,观察肌成纤维细胞的增殖改变情况。结果与结论:关节纤维化中PTEN mRNA及蛋白表达水平较对照侧下调(P <0.05)。PTEN表达下调后,下游PI3K/AKT通路的信号分子PI3K,p-AKT的表达水平出现上调(P <0.05),肌成纤维细胞的细胞增殖活跃,使用PI3K/AKT通路阻滞剂LY294002后细胞增殖受到抑制。提示纤维化关节中PTEN表达发生下调,并经由PI3K/AKT通路调控关节纤维化的发展。

酸性成纤维细胞因子基因体外转染肌卫星细胞

背景:研究报道外源性酸性成纤维细胞生长因子既可调节肌卫星细胞增殖和分化,又具有预防运动终板退变及肌萎缩的作用。目的:通过酸性成纤维细胞因子基因转染大鼠骨骼肌卫星细胞,检测目的基因转染肌卫星细胞效果及基因表达情况,探讨建立有效预防运动终板退变及肌萎缩种子细胞可行性。方法:取Wistar成年大鼠后肢肌肉,差速贴壁培养法分离纯化肌卫星细胞,观察细胞生长特性并做免疫组织化学鉴定;取第2代细胞,LipofectamineTM2000Reagent转染试剂介导,将重组真核表达质粒pEGFP-N1-aFGF转染肌卫星细胞为实验组;阴性对照组转染空载质粒pEGFP-N1;空白对照组仅加入转染试剂。转染后24-72h和传代后分别用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白表达情况,计算转染效率。转染细胞行WesternBlot检测酸性成纤维细胞因子表达。提取转染后72h细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测酸性成纤维细胞因子基因mRNA表达。结果与结论:分离纯化细胞经免疫组织化学鉴定为肌卫星细胞。荧光显微镜观察到细胞转染6h后即有绿色荧光发出,荧光强度和表达细胞总数在72h达到高峰,传代后仍可观察到绿色荧光蛋白表达。实时荧光定量PCR证实目的基因mRNA表达水平远远高于对照组,WesternBlot检测实验组有大量酸性成纤维细胞因子产生。提示酸性成纤维细胞基因转染肌卫星细胞可表达基因产物,有望作为基因工程种子细胞预防失神经支配后运动终板退变及肌萎缩。

肠上皮下肌成纤维细胞与肠型胃癌相关性的回顾性分析

目的检测肠上皮下肌成纤维细胞(ISEMF)在肠型胃癌中的表达及分布,初步探讨其与肠型胃癌之间的关系。方法应用免疫组织化学方法,采用α-肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体检测ISEMF在30例正常对照组胃黏膜及45例肠型胃癌中的分布与表达。结果肠上皮下肌成纤维细胞在正常胃黏膜中表达阳性率低且均为弱阳性,散在分布于腺体中间;在肠型胃癌中肠上皮下肌成纤维细胞表达阳性率高,在肿瘤组织间呈无规律的小片状分布。慢性胃炎对照组每高倍视野α-SMA阳性ISEMF为43.4±6.5,在早期肠型胃癌组每高倍视野α-SMA阳性ISEMF为72.3±8.2,两组间具有统计学差异(P<0.05)。结论α-SMA阳性ISEMF在早期肠型胃癌与正常胃黏膜间质中分布及表达均存在明显差异,在肠型胃癌黏膜间质中有增多的趋势,提示ISEMF参与了肠型胃癌的发生、发展过程。

基于硬度调控的肺成纤维细胞表型转化探讨金水缓纤组分方Ⅱ干预肺纤维化机制

目的特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)严重危害健康,在肺泡上皮反复损伤后,成纤维细胞表型转化,从而形成硬度较高的纤维化瘢痕组织。岐黄工程首席科学家李建生教授基于多年临床研究拟定了疗效显著的金水缓纤方(Jinshui Huanxian Formula,JHF),但由于其成分复杂,故优化了其组分和配比,形成了金水缓纤组分方Ⅱ(ECC-JHFⅡ),然其具体作用机制尚不清楚,因此,本研究将基于基质硬度,探讨ECC-JHFⅡ干预肺纤维化的作用机制。方法以人胚肺细胞MRC-5为研究对象,借助PEG水凝胶构建不同硬度的基底,观察不同时间点肌成纤维细胞表型转化标志物的表达;制备肺纤维化小鼠模型,表征其肺功能及肺组织硬度等相关指标,研究不同程度肺纤维化组织硬度的变化规律以及ECC-JHFⅡ干预肺纤维化的机制。结果ECC-JHFⅡ能显著降低硬基质上培养的MRC-5活化相关基因及蛋白表达;肺纤维化小鼠肺组织α-SMA、COLⅠ以及力敏感蛋白Integrinβ1表达显著升高,ECC-JHFⅡ能够显著改善肺纤维化小鼠的肺功能及纤维化活化相关蛋白的表达。结论ECC-JHFⅡ能够促进肌成纤维细胞向成纤维细胞的表型逆转,降低肺组织硬度,显著抑制细胞内α-SMA、COLⅠ及FN的表达,其作用机制可能是通过降低力敏感蛋白Integrinβ1的表达,干预肺纤维化进程。