多重免疫层析检测技术在食品安全快速检测中的研究进展

随着农业及食品行业突飞猛进地发展,随之产生的多种有毒有害物质共存于食品样品中的问题日趋严重,对人类健康及经济发展造成巨大威胁,开发同时检测多重危害物的高效快速检测平台对于保障食品安全具有重要的现实意义。基于抗原抗体特异性反应的多重免疫层析快速检测技术因具有成本低廉、便携快速等特点,且可进一步提高检测效率,同时能够提供更为丰富准确的样品信息,为食品中多种危害物的同时检测提供了技术保障。文章首先综述了不同标记材料在多重免疫层析检测技术中的应用,并就多重免疫层析检测技术于食品中有毒有害物质如真菌毒素、食源性致病菌、农兽药残留等的检测应用进行总结与分析,最后对其在食品安全快速分析检测中面临的挑战和发展前景做出讨论,以期为食品安全多重快速检测方法的建立提供参考。

呕吐毒素荧光免疫层析检测卡在谷物产品快速检测中的应用

对呕吐毒素荧光免疫层析检测卡在谷物产品快速检测中的应用进行了评价,确定呕吐毒素荧光免疫层析检测卡的检出限和定量限,同时对检测卡的重复性、准确度、特异性和大型仪器确证方法检测结果的一致性进行了试验。结果显示,检测卡检测面粉、玉米面、大米基质中呕吐毒素的检出限分别为18.89、 19.65、 21.39μg/kg,定量限分别为20.09、20.77、 24.12μg/kg;批内回收率为89.65%~105.94%,批内变异系数为1.07%~9.96%,批间回收率为90.67%~101.64%,批间变异系数为4.94%~9.45%,与玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B_(1)、赭曲霉毒素A、伏马毒素、 T-2毒素交叉反应率分别为0.26%、 0.15%、 0.05%、 0.01%、 0.09%;与免疫亲和层析净化高效液相色谱法(GB 5009.111-2016 《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》第二法)相比,两种方法检测结果相对误差≤16.28%。结果表明,呕吐毒素荧光免疫层析检测卡具有检测快速、灵敏度高、准确性高等特点,且操作简单、省时省力、经济便携,能满足市场快速检测的需求,为谷物产品的安全监测提供保障和便利,具有广阔的应用前景。

Fe_3O_4/葡聚糖/抗体磁性纳米生物探针的制备和层析检测

Dextran coated magnetic nanocomposites were prepared. A periodate oxidation method was used to further activate the magnetic dextran, forming magnetic polyaldehyde dextran, which could be conjugated to biomolecules, antibodes. The magnetic labeled nano scaled bioconjugates could be well blocked with BSA and exhibit high activity by ELISA and immunochromatographic strip assay.

基于免疫层析检测的河豚毒素快速样品前处理方法研究

为了建立适合河豚毒素免疫层析检测的前处理方法,采用超滤技术对前处理方法进行了优化,并对建立的磁性免疫层析试纸条进行了评价。研究结果显示,采用截留分子质量为10 ku的超滤处理,4000 r/min离心10 min的处理是最优的,可以降低溶液中的蛋白浓度,加标回收率在92.4%~126.0%之间,适合免疫层析检测。为河豚毒素的快速现场检测提供了前处理技术参考。

艾康恶性疟/间日疟免疫层析检测试剂盒效果评价

目的评价艾康恶性疟/间日疟(P．f/P．v)胶体金免疫层析检测试剂盒诊断疟疾效果。方法以镜检法为金标准,采用盲法实验室测试疟疾阳性和阴性血样。结果共测试331例血样,其中疟疾血样121例。对疟疾的灵敏性和特异性分别为92．56％和98．57％,与镜检符合率为96．38％；其中恶性疟的灵敏性和特异性分别为100．00％和98．57％,重复性为100．00％；对间日疟的灵敏性和特异性分别为86．96％和100．00％,恶性疟和间日疟之间无交叉反应。结论艾康P．f/P．v胶体金免疫层析检测试剂盒诊断疟疾具有快速、简便、准确、直观以及不需要特殊仪器优点,能同时诊断单纯恶性疟和单纯间日疟,但不能鉴别诊断混合感染。

小鹅瘟病毒胶体金层析检测卡的研究

参照李茂祥等人的方法提纯小鹅瘟病毒(Goose plague virus,GPV),免疫小鼠,按常规方法获得3株GPV单克隆抗体。用胶体金标记提纯的GPV单克隆抗体288并制备金标棉,马抗GPV多克隆抗体和羊抗鼠抗体喷涂NC膜,组装成胶体金检测卡。特异性试验结果表明,该检测卡只能检测出GPV,其他对照病毒检测结果均为阴性。将GPV做100倍稀释,仍可获得阳性结果。

抗H9N2 AIV HA单克隆抗体的制备及其在胶体金层析检测中的初步应用

用基因疫苗pcDNA-H9和纯化H9N2亚型AIV免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6),H9-02(3B1),H9-03(3H11),H9-04(1A4),H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01,H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。用制备的抗H9亚型AIV HA的单克隆抗体做成胶体金层析检测试纸条,可以检测到200个EID50的H9亚型AIV,为监测该亚型AIV试剂盒的进一步商品化奠定了基础。

玉米细菌性枯萎病菌纳米磁标记免疫层析检测试剂与试纸条

分别以粒径为50和100 nm的羧基化纳米磁珠,通过碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联法使磁珠与抗体偶联,制备出可特异性识别玉米细菌性枯萎病菌的两种纳米免疫磁珠试剂。基于双抗体夹心法,经实验条件优化,选用100 nm的羧基化纳米磁珠为磁标记探针,组装了玉米细菌性枯萎病菌磁标记免疫层析检测试纸条。该方法用于玉米种子中玉米细菌性枯萎病菌的检测,检出限为1.0×106CFU/m L,15 min内可通过肉眼判读结果,也可用超顺磁共振检测仪实现量化检测,具有简便、快速、现场化检测的优势。

铁纳米线/壳聚糖/抗体生物探针的制备和层析检测

以戊二醛为交联剂制备Fe纳米线/壳聚糖复合物,研究其对牛血清白蛋白的吸附性能:缓冲液pH为6.0时,达到最大平衡吸附量,为148.40mg/g;以Fe纳米线/壳聚糖交联吸附α-HCG抗体制备生物探针,组装层析试纸条,进行免疫层析实验,结果表明:其检测灵敏度为10IU/L,与市场上销售的胶体金早孕试纸条相比,可以将早孕检测时间提前2～3d。

导线线圈的射线层析检测

本文选用不同的方法对两个导线线圈进行了射线检测,主要采用透射式工业CT检测和康普顿背散射成像检测两种射线层析检测方法,有效检测了导线线圈内部的缺陷情况,并指出射线层析检测作为一项新技术和新手段,可充分应用在航天产品的无损检测中。

混凝土大坝声波层析检测系统

本文介绍了混凝土声波层析检测系统的工作原理及其功用,并通过声波层析检测系统(ST-2100)在丰满水电站大坝上的检测试验说明该系统优于日本OYO系统,同时还提出了改进ST-2100系统的意见。

禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。

乙肝两对半乳胶层析检测试剂板试用评价

目的 评价乙肝两对半乳胶层析检测试剂板。方法 采用酶联免疫吸附法和乳胶层析试剂板对定值血清和88份临床标本作平行检测,结果作对比分析。结果 乳胶测试板对乙肝两对丰的检测限分别达到HBsAg 1ng/ml,HBsAb 30mIu/ml,HBeAg 1NCU/ml,HBeAb 4NCU/ml,HBeAb 2NCU/ml,特异性采用夹心法的三项达到100％,其余两项为94.9％和93.9％,与酶联法相当。溶血对乳酸层检析测无影响。结论 乳胶层析检测试剂板操作简便、快速,结果可靠,适用于单个或急诊病人的快速检测。

N末端B型脑尿肽前体检测用免疫层析检测系统的构建及应用

N末端B型脑尿肽前体(NT-proBNP)是临床上用以判断心衰的良好心脏标志物,其高阴性预测值(100%)能很好的排除心力衰竭.磁性Fe_3O_4纳米粒子具有良好的生物相容性及超顺磁性,基于磁性Fe_3O_4纳米粒子构建的免疫层析系统,应可以满足定性检测需求,利用其磁性还有可能实现定量检测.因此,致力于制备免疫层析系统用的磁性Fe_3O_4纳米粒子,利用其表面含有的大量羧基为偶联位点,以碳二亚胺(EDC)作为连接子,将NT-proBNP抗体偶联于磁粒表面,可应用于血清样品中NT-proBNP的检测,其检测限可达100pg/mL.

基于Me-MLiverpool重组蛋白的新孢子虫胶体金免疫层析检测方法的建立

根据GenBank公布的Nc-livepoor的基因序列,分析Nc-livepoor免疫蛋白的优势线性抗原表位,依据分析结果选取Nc-Liverpool的优势抗原表位集中片段进行串联,构建合成Me-Nc-MLiverpool基因。将该基因克隆至pET-30a(+)质粒中构建重组蛋白质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool原核表达载体,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化及SDS-PAGE和Western blot验证。以0.75 mg/mL的SPA做金标抗原,用纯化后浓度为1 mg/mL的重组蛋白和牛IgG分别做检测线和质控线,建立了检测新孢子虫抗体的胶体金免疫层析检测方法(CGIA)。重组质粒pET-30a-Me-Nc-MLiverpool双酶切验证结果显示,在636 bp的位置有条带,说明重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白大小为39.32 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可与新孢子虫阳性血清特异性识别,表明重组蛋白有较强的反应原性;特异性试验结果显示,新孢子虫CGIA与弓形虫、肝片吸虫、包虫阳性血清不发生交叉反应;敏感性分析显示,GICA可检测出的Nc阳性血清最大稀释倍数为1∶512;对92份牛血清样品进行检测,与商品化的新孢子虫ELISA检测试剂盒检测结果一致,表明建立的GICA准确性较高。综上所述,研究建立的基于新孢子虫Nc-livepoor基因胶体金免疫层析检测试纸条具有较高的灵敏性和特异性,可为新孢子虫病的诊断提供技术支撑。

磁力层析检测技术在燃气管道上的应用实践

磁力层析检测技术是最新的埋地钢制管道检测技术,它通过对铁磁性材料的磁记忆特征的记录,来实现在非开挖的情况下对管道管体的检测。应用该检测技术在城市燃气管道上实施检测,通过本次检测管道管理方掌握了管道的管体腐蚀状况,并且通过对管道进行开挖,验证了该检测技术的可行性、准确性和可靠性。该技术的实践应用不但提高了检测人员对检测技术的理解,实现新技术与管道检测业务的有机结合,同时也为管道安全运行提供有利技术保障。

餐具中残留十二烷基苯磺酸免疫层析检测卡研究

建立筛查苯磺酸表面活性剂的荧光免疫检测卡;以对磺基苯甲酸合成免疫抗原,免疫家兔获得针对苯磺酸基团的多克隆抗体,纯化后标记量子点荧光微球;以对氨基苯磺酸合成检测抗原,构建荧光免疫层析卡(FIAC)。在酶免疫分析中对十二烷基苯磺酸钠的IC_(50)值为55.2 ng/mL,优化的FIAC对十二烷基苯磺酸钠的检测限为100 ng/mL。本方法灵敏、特异、简便,是筛查餐具中残留烷基苯磺酸表面活性剂的有效工具。

免疫层析检测试纸条法在现场初筛乙肝表面抗体中的应用

1目的乙型肝炎是病毒性肝炎中传播最广、对人类健康危害极大的传染病,特别是对学龄前儿童的身体健康造成了极大的威胁。为了解中卫市镇罗镇学龄前儿童乙肝疫苗接种免疫学效果,为采取措施提供有力依据,我院于2010年5月份开始对全镇的学龄前儿童做乙肝表面抗原和乙肝表面抗体普查。目的在于对乙肝表面抗原、

猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光层析抗体检测方法的建立

为了给临床诊断提供准确便捷的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测方法,本试验以镧系快速高敏荧光定量检测系统为基础,通过研制PRRSV(美洲型)抗体荧光微球检测卡,建立具备简便、快速、定量等优势的荧光层析抗体检测方法。试验结果:特异性试验中5份特异性质控血清的检测结果均为阴性;敏感性试验中同一批次试纸的阳性检出率均为100%(20/20),阴性检出率均为100%(20/20);临床试验中共检测482份血清,与市售试剂盒的阴性符合率为84.7%,阳性符合率为91.3%,符合率为91.07%。结论:本试验建立的荧光层析抗体检测方法在PRRSV(美洲型)的检测中表现出较好的特异性和敏感性,对PRRSV(美洲型)的快速诊断和检测具有重要临床意义。