层粘连蛋白α4链功能肽修饰脱钙骨基质支架诱导H型血管及骨生成促进骨缺损修复的实验研究

目的基于选择性细胞滞留(selective cell retention,SCR)技术中的细胞与细胞外基质黏附理论,拟设计一种简化多肽表面修饰脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),以期能同时促进骨再生与血管生成。方法选择层粘连蛋白(laminin,LN)α4链核心区域功能肽(LNα4)、环状RGD(cyclic RGDfK,cRGD)和带胶原结构域肽(collagen-binding domain,CBD),固相合成CBD-LNα4-cRGD多肽,表面修饰于DBM,构建DBM/CBD-LNα4-cRGD(以下简称DBM/LN)支架材料。观测DBM/LN形态特征、CBD-LNα4-cRGD表面修饰DBM的稳定性以及CBD-LNα4-cRGD表面修饰对小鼠血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)黏附、增殖以及管腔形成的影响,Western blot验证其影响EPCs血管生成的分子机制。然后,取24只10周龄雄性C57小鼠制备2 mm长股骨缺损模型,分别采用经SCR技术处理的DBM/LN(DBM/LN组,n=12)和DBM(DBM组,n=12)修复骨缺损。术后8周,行影像学检查、血管造影、组织学及免疫荧光染色[CD31、内皮黏蛋白(endomucin,Emcn)、Ki67]观察,评估DBM/LN促进血管生成和骨再生能力。结果材料相关检测显示,与DBM相比,DBM/LN表面更粗糙,但孔径差异无统计学意义(t=0.218,P=0.835);经SCR技术处理后,荧光强度提示DBM/LN支架稳定有效;与DBM相比,CBD-LNα4-cRGD表面修饰后,DBM/LN能黏附更多的EPCs(P<0.05),且增殖速度增加、管腔形成能力增强。Western blot检测示DBM/LN中EPCs表达VEGF、p-FAK和pERK1/2水平显著高于DBM(P<0.05)。动物实验观测显示,与DBM组相比,DBM/LN组骨缺损处血管生成和骨再生能力更强,血管体积和血管表面积差异均有统计学意义(P<0.05),CD31hi Emcnhi细胞数量显著增加(P<0.05)。结论DBM/LN支架材料能促进EPCs黏附、H型血管生成,实现小鼠骨缺损修复中血管生成和骨再生的有效耦联。

LAMA4在胎盘组织中的差异表达及其在滋养细胞中的功能

目的:探讨层粘连蛋白α4链(laminin alpha4,LAMA4)在胎盘组织中的差异表达及其对滋养细胞功能的影响,揭示其在子痫前期(preeclampsia,PE)发病机制中的作用。方法:收集22例PE和20例正常产妇的胎盘组织,应用免疫组化方法检测LAMA4蛋白在胎盘组织中的表达。采用RNA干扰技术,将滋养细胞分为正常培养对照组、缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)培养组及干扰培养组,采用细胞免疫荧光和Western blot法检测LAMA4蛋白在各组细胞中的表达。采用Transwell小室模型检测各培养组细胞的侵袭功能。结果:(1)子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。(2)H/R及干扰处理后滋养细胞中LAMA4蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。(3)下调LAMA4的蛋白表达后滋养细胞的侵袭率明显降低(P<0.05)。结论:LAMA4蛋白表达的下调可抑制滋养细胞的侵袭功能,可能参与子痫前期的发病。