LAMC3在肺腺癌中的表达及对细胞生物学行为的影响

目的:探讨层粘连蛋白亚基γ3(laminin subunit gamma 3,LAMC3)在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)中的表达及对细胞生物学行为的影响。方法:通过在线生物信息学数据库GEPIA查询LAMC3在LUAD组织中的表达情况;收集2018年1月至2020年12月本院收治的行LUAD手术的48例LUAD患者的LUAD组织及癌旁组织,使用RT-qPCR检测了组织中LAMC3的mRNA表达水平,并分析LAMC3表达水平与LUAD患者临床病理特征的相关性。体外培养人LUAD细胞株(A549、H1299、PC-9)和人正常肺细胞株MRC-5,使用RT-qPCR和Western blot检测了细胞中LAMC3的mRNA和蛋白表达水平。将PC-9细胞分为5组:对照组(control组)、si-NC组、LAMC3沉默组、pcDNA3.1-NC组、LAMC3过表达组,采用小分子RNA干扰技术(siRNA)和pcDNA3.1质粒转染构建LAMC3沉默/过表达细胞,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中LAMC3的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell小室实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力;Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin,VIM)、基质金属蛋白9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)]的表达。结果:LAMC3在LUAD组织和细胞中低表达,且LAMC3低表达与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05)。沉默LAMC3后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及N-cadherin、VIM、MMP-9的表达升高,细胞凋亡率和E-cadherin的表达降低(P<0.05);过表达LAMC3后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),且LAMC3过表达后细胞中E-cadherin的表达升高,N-cadherin、VIM、MMP-9的表达降低(P<0.05)。结论:LAMC3在LUAD的发生发展中发挥着重要作用,过表达LAMC3可抑制LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制EMT有关。

LAMC3低表达对卵巢癌细胞紫杉醇耐药的影响

目的探讨层粘连蛋白γ3亚基(LAMC3)低表达对卵巢癌细胞紫杉醇耐药的影响。方法采用Western blot检测卵巢癌紫杉醇耐药细胞HeyA8-R(H-R)及其亲本细胞HeyA8(H)中LAMC3的表达水平。通过慢病毒转染H-R细胞构建LAMC3低表达的稳定细胞株H-R-C3 shRNA3及其对照细胞株H-R-C3 Scramble。通过CCK-8法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC_(50)),通过平板克隆形成实验验证细胞克隆形成能力。通过Western blot实验检测多药耐药、铁死亡、细胞周期、凋亡等关键通路蛋白的表达情况。结果与卵巢癌亲本细胞H和对照细胞H-R-C3 Scramble相比,LAMC3在卵巢癌紫杉醇耐药细胞H-R和H-R-C3 shRNA3中的表达显著降低。敲减LAMC3表达可降低卵巢癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的耐药性及其平板克隆形成能力。Western blot实验结果显示,在梯度浓度紫杉醇药物处理下,与H-R-C3 Scramble细胞相比,H-R-C3 shRNA3细胞的多耐药蛋白多重耐药1/ATP结合盒亚族B1(MDR1/ABCB1)表达水平降低,铁死亡蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)表达水平升高,周期蛋白p21 Waf1/Cip1、细胞周期蛋白E2(CCNE2)表达水平升高,周期素依赖性激酶2(CDK2)、周期素依赖性激酶4(CDK4)表达水平降低,凋亡过程中剪切产生的亚基蛋白cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、cleaved聚ADP-核糖聚合酶(PARP)表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LAMC3低表达可能通过影响多药耐药、细胞周期、细胞凋亡等方式来降低卵巢癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的耐药性,提示LAMC3有望成为一个应用于卵巢癌耐药治疗的潜在新靶点。