层粘连蛋白-5γ2在宫颈腺癌中的表达及与盆腔淋巴结转移的关系

目的:探讨层粘连蛋白-5γ2(LN-5γ2)在宫颈腺癌中的表达及其与盆腔淋巴结转移的关系。方法:采用免疫组织化学二步法检测16例正常宫颈组织、14例原位腺癌(AIS)组织、72例宫颈腺癌组织中LN-5γ2的表达水平,并分析其与宫颈腺癌盆腔淋巴结转移的关系。结果:LN-5γ2的表达在正常宫颈和AIS组织中定位于细胞浆,在宫颈腺癌组织中定位于肿瘤细胞胞浆和肿瘤间质。LN-5γ2在宫颈腺癌、AIS组织的阳性表达率分别为81.9%和57.1%,均显著高于正常宫颈组织(6.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。将宫颈腺癌盆腔淋巴结转移组与无转移组进行单因素分析,临床分期、组织分化程度、脉管浸润、肌层浸润深度、间质LN-5γ2表达差异有统计学意义(P<0.05),进一步Logistic回归分析示,脉管浸润、肌层浸润深度、间质LN-5γ2表达是影响宫颈腺癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素。结论:LN-5γ2表达可能与宫颈腺癌的发生机制有关,肿瘤间质LN-5γ2表达是宫颈腺癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素之一。

小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件的原核表达及多克隆抗体制备

目的:用原核表达的方法获得带有6个His标记的小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件的重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠心肌组织中扩增出小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件cDNA片段,将该片段与原核表达载体pET-28a连接,构建重组表达质粒pETLG1-3并转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组表达菌株。用IPTG诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)/pETLG1-3表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子质量60000处有特异性重组蛋白表达条带,并经Western印迹进一步鉴定。用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件多克隆抗体,ELISA方法检测抗体滴度。结果:从小鼠心肌组织中克隆了层粘连蛋白α5链LG3组件的基因,并在大肠杆菌得以表达和纯化;制备了重组蛋白的多克隆抗体,其滴度可达到1∶10240。结论:小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能打下了基础。

层粘连蛋白-5结构及功能的研究进展

层粘连蛋白-5是基底膜的主要组成蛋白之一,对上皮细胞与基底膜之间的稳定结合起着重要的作用。层粘连蛋白-5通过受体介导,具有促进上皮细胞粘附、迁移和扩散的功能。层粘连蛋白-5与结合上皮和种植体上皮的关系密切,在牙周炎性疾病中有异常表达。本文就层粘连蛋白-5的结构及功能等作一综述。

重组胸腺素β4调节创伤皮肤层粘连蛋白5表达的研究

目的探讨重组胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)调节层粘连蛋白5(laminin5,LN-5)表达促进创伤愈合的机制。方法成年雄性SD大鼠60只,体重200～250g,采用直径8mm自制打孔器于脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型。根据伤口用药的不同,随机分为实验组(45只)和对照组(15只),实验组再根据用药剂量不同分为低、中、高剂量组,每组15只。实验组于模型制备后即刻、每天7:00、19:00分别予每个伤口表面滴加50μLTβ4,低、中、高剂量组Tβ4浓度分别为2、6、18μg/50μL,对照组同法滴加等量PBS液(pH7.2),共滴加7d。造模后观察大鼠大体情况,术后2、4、7d观察大鼠伤口愈合情况及取材行免疫组织化学观察。结果除高剂量组1只大鼠于术后7d死亡,余均存活至实验完成。术后7d,中剂量组伤口明显缩小,多数伤口与创缘皮肤衔接良好。术后2d,对照组和低、中、高剂量组伤口愈合率分别为7.67%±5.46%、29.01%±7.43%、26.54%±11.49%、10.39%±3.96%;术后4d分别为28.16%±13.76%、37.99%±13.05%、42.00%±9.56%、39.58%±12.74%;术后7d分别为59.08%±19.02%、64.15%±17.92%、77.39%±8.45%、69.78±8.45%。术后2d,低、中、高剂量组伤口愈合率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后2d,各组均可见较多LN-5阳性表达,对照组与低剂量组阳性表达强(P<0.05),中剂量组阳性表达最少;术后4d,中剂量组阳性表达最强(P<0.05);术后7d,中剂量组仍有较强阳性表达(P<0.01)。结论重组Tβ4早期抑制LN-5表达,有利于细胞的增殖、分化,中晚期上调LN-5表达,改善基质环境,促进表皮细胞迁移和创伤愈合。

层粘连蛋白5和表皮生长因子受体在肺癌患者肿瘤组织中的表达关系

目的探讨肺癌患者肿瘤组织中层粘连蛋白5(LN5)和表皮生长因子受体(EGFR)表达水平的关系,为EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)个体化靶向治疗提供依据。方法应用实时定量PCR方法检测了39例肺癌患者肿瘤组织LN5和EGFRmRNA表达水平,并分析二者之间的关系。结果Pearson相关分析提示LN5和EGFR表达水平呈正相关(r=0.541,P<0.0005)。线性回归分析提示EGFR随LN5表达水平的变化而变化,回归方程为:lgEGFR=2.202+0.458lgLN5。结论本研究提示LN5的表达水平和EGFR-TKI的靶分子EGFR的表达水平呈线性相关,LN5的低水平表达可能是肺癌中EGFR-TKI靶向治疗疗效的预测因子之一。本研究为EGFR-TKI的个体化靶向治疗提供了试验依据。

肺癌细胞株中层粘连蛋白5多态性与其表达水平的关系

目的探讨肺癌细胞株中层粘连蛋白5(LN5)5′非翻译区多态性与其表达水平的关系。方法应用测序及实时定量PCR方法检测12株肺癌细胞株中LN55′非翻译区多态性和LN5基因mRNA表达水平,分析相互之间的关系。结果 LN55′非翻译区-183G/A中GA基因型的LN5mRNA表达水平明显高于GG基因型(t=7.136,P<0.001)。本研究中尚未发现LN5基因-6C/A和-89A/G多态性位点与其mRNA表达的相关性。结论本研究提示LN5启动子区-183G/A多态性位点具有转录调控功能,为进一步的机制探讨提供了依据。

多层螺旋CT灌注扫描联合血清FABP5、SEMA-3B对老年原发性肝癌的诊断和预后评估价值

目的探讨多层螺旋CT灌注扫描联合血清脂肪酸结合蛋白(FABP)5、信号素(SEMA)-3B对老年原发性肝癌的诊断和预后评估价值。方法选取老年原发性肝癌患者110例为原发性肝癌组;慢性肝炎或肝硬化患者50例为肝脏良性病变组;同期健康志愿者50例为健康对照组。使用美国GE的64排多层螺旋CT进行平扫和增强扫描,记录血流量、对比剂达到时间、肝动脉灌注量、平均通过时间。采集空腹肘静脉血4 ml,酶联免疫吸附试验检测血清FABP5、SEMA-3B水平。收集原发性肝癌组肿瘤数目、肿瘤直径、血管侵犯情况、组织分化程度、TNM分期、Child-Pugh肝功能分级及甲胎蛋白、乙肝表面抗原表达情况。对患者进行1年的随访,将转移、复发、死亡的患者纳入预后不良组,其他患者纳入预后良好组。结果原发性肝癌组肝癌组织血流量、肝动脉灌注量、平均通过时间明显高于癌旁组织及肝脏良性病组、健康对照组,对比剂达到时间明显短于癌旁组织及肝脏良性病组、健康对照组(P<0.05)。原发性肝癌组血清FABP5水平明显高于肝脏良性病变组和健康对照组,SEMA-3B水平明显低于肝脏良性病变组和健康对照组(P<0.05);肝脏良性病变组血清FABP5水平明显高于健康对照组,SEMA-3B水平明显低于健康对照组(P<0.05)。血清FABP5、SEMA-3B水平在不同肿瘤数目、肿瘤直径、血管侵犯、组织分化程度、TNM分期、Child-Pugh肝功能分级的老年原发性肝癌患者间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。110例老年原发性肝癌患者随访1年期间预后良好39例(35.45%)。预后良好组入院时血清FABP5水平明显低于预后不良组,SEMA-3B水平明显高于预后不良组(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,多层螺旋CT及血清FABP5、SEMA-3B单独和联合检测对老年原发性肝癌均具有较高的预测价值(P<0.05);其中联合检测的预测价值最高〔曲线下面积(AUC)=0.952〕,特异度、阳性预测值明显高于各指标单独检测。结论多层螺旋CT灌注扫描联合血清FABP5、SEMA-3B在老年原发性肝癌诊断中具有较高的应用价值,且与患者预后水平密切相关。

小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件的表达及纯化

目的:用原核表达的方法获得带有6×His标记的小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件的重组蛋白。方法与结果:从小鼠心肌组织中提取总RNA,利用RT-PCR扩增出小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件的cDNA片段,并与pET-28a载体连接,构建重组表达质粒pET-LG3,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件基因的成熟肽编码序列。用IPTG诱导,LG3蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,并经Ni-NTA层析柱获得纯化。结论:层粘连蛋白α_5 LG3组件的重组蛋白得到表达和纯化,为后续相关研究奠定了基础。

上皮细胞激酶-2与层黏连蛋白5-γ-2在食管鳞癌细胞株TE13中相关性的研究

目的探讨上皮细胞激酶与层黏连蛋白laminin5-γ-2在食管鳞癌细胞株TE13中表达相关性。方法采用细胞免疫组化法检测EphA2与laminin5-γ-2在食管鳞状细胞癌细胞株TE13中的表达相关性;采用RT-PCR方法检测EphA2与LN5-γ-2mRNA表达的关系;采用Western Blot法检测食管鳞状细胞癌细胞株TE13中经RNA干扰技术特异性沉默EphA2后LN5-γ-2蛋白表达的变化。结果细胞免疫组化结果显示LN5-γ-2蛋白在细胞胞浆表达,且沉默EphA2后,LN5-γ-2表达减少。RT-PCR及Western Blot实验结果显示在食管鳞状细胞癌细胞株TE13中,LN5-γ-2mRNA及蛋白均随EphA2的沉默而受抑制(P<0.05)。结论 LN5-γ-2表达受EphA2的调控,可能为EphA2的靶基因。EphA2可能通过调控laminin5-γ-2对食管鳞癌肿瘤血管生成拟态进行调节。

层粘连蛋白5与肿瘤

层粘连蛋白5(LN鄄5)在上皮基底膜的构建及细胞粘附、生长、迁移和分化中起着至关重要的作用。全文就该蛋白的结构与功能、它的亚单位γ2链与肿瘤发生与转移关系,及γ2的表达与上皮细胞生长因子受体(EGFR)关系进行综述。

肺腺癌中LN-5蛋白表达及其与EGFR突变关系的临床研究

目的探讨肺腺癌组织中层粘连蛋白-5(LN-5)表达及其与人表皮生长因子受体(EGFR)基因突变关系。方法收集2015年1月至2015年12月57例肺腺癌及其配对癌旁组织标本,采用免疫组化SP法检测LN-5蛋白表达,同时通过液相芯片技术检测EGFR基因突变状态,分析LN-5表达与肺腺癌临床病理特征的关系以及与EGFR基因突变的相关性。结果肺腺癌组织中LN-5蛋白阳性表达率为21.1%(12/57),癌旁组织中为1.7%(1/57),差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR敏感突变(E19+E21)的发生率为43.9%(25/57),EGFR非敏感突变(野生型+E20)的发生率为56.1%(32/57)。LN-5蛋白表达与淋巴结转移和EGFR突变有关(P<0.05),与TNM分期无关(P>0.05)。LN-5表达与EGFR突变呈负相关(r=-0.283,P<0.05)。结论 LN-5在肺腺癌组织中的表达升高,且其表达与EGFR突变状态具有相关性。

CXCL5、MMP-9在宫腔粘连子宫内膜组织表达及其临床意义

目的研究细胞趋化因子配体-5(CXCL5)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在宫腔粘连(IUA)子宫内膜组织中的表达及临床意义。方法收集48例IUA患者,予以实施宫腔粘连分离术(TCRA),术中获取子宫内膜组织,术后一个月复查宫腔镜,评估手术效果的同时再次获取子宫内膜组织。同期行宫腔镜检查排除子宫内膜病变的48例女性为对照组。免疫组化测定CXCL5、MMP-9在子宫内膜组织的相对表达,使用Western blot检测其蛋白相对表达,RT-PCR检测mRNA表达情况。结果 48例IUA在TCRA术后宫腔形态恢复较好,1例粘连较重,再次TCRA手术。免疫组化结果显示:CXCL5、MMP-9在IUA组相对表达低,在IUA术后组表达增加,但两组的表达量均低于对照组,3组之间的差异有统计学意义(P<0.01);Western blot及RT-PCR检测结果显示,IUA组子宫内膜CXCL5、MMP-9蛋白及mRNA表达量均低于IUA术后组,并且两组都低于对照组。3组之间的差异有统计学意义(P <0.05);CXCL5与MMP-9表达存在相关性,且呈一致性变化。结论 CXCL5、MMP-9在IUA子宫内膜中呈低表达,在IUA患者术后子宫内膜中增加,CXCL5影响MMP-9水平,CXCL5和MMP-9可能参与了IUA发生。

重组胸腺素β4调节ICAM-1、MMP-2和LN-5促进创伤愈合的实验研究

目的探讨重组胸腺素β4(Thymosin β4,Tβ4)通过改善创面基质环境促进大鼠皮肤创伤愈合的作用机制。方法在大鼠背部制作直径8mm的全层皮肤损伤模型,动物分为对照组(PBS)、Tβ4低剂量组、Tβ4中剂量组、Tβ4高剂量组,每组5只,每天两次给药,2d、4d、7d取材,行ICAM-1(Intercellular adhesion molecule-1)、MMP-2(Matrix metallopoproteinase-2)、LN-5(Laminin-5)的免疫组化并进行平均积分光密度(IOD)分析。结果经Tβ4处理后的创面,ICAM-1阳性表达多,早期中、高剂量组表达较强(p<0.01),中期均减弱,高剂量组相对较强;晚期各组表达增强,高剂量组最强(p<0.01)。MMP-2早期对照组表达最高(p<0.01),高剂量组最弱(p<0.01);中期中剂量组表达明显(p<0.05);晚期基质阳性明显增多,对照组表达最强(p<0.01),高剂量组最弱(p<0.01)。LN-5早期各组均可见较多的阳性表达,对照组与低剂量阳性强(p<0.01),中剂量组阳性最少;中期中剂量组表达最强(p<0.01);晚期中剂量组仍然有较强的阳性表达(p<0.01)。结论Tβ4可能是通过调节ICAM-1、MMP-2、LN-5的表达,改善创面基质环境,促进皮肤创伤愈合。

钛表面PDLLA-LN5复合涂层的构建及对角质形成细胞生物学行为的影响

目的:在纯钛表面构建聚消旋乳酸-层粘连蛋白5(PDLLA-LN5)复合缓释涂层,观察对角质形成细胞生物学行为的影响。方法:以纯钛为基底(P组),表面滴加PDLLA(PDLLA组),通过层层组装-物理吸附的方法制备载LN5的PDLLA涂层(PDLLA/LN5组),扫描电镜观察试样表面形貌,ELISA法测定LN5的释放曲线。将HaCaT细胞分别培养在3组试样表面,扫描电镜观察接种后细胞形态;CCK8法测定细胞增殖;DAPI染色后共聚焦显微镜观察接种后细胞黏附数量;细胞划痕法分析细胞迁移情况。结果:PDLLA-LN5复合涂层可以实现28 d以上LN5的持续释放;PDLLA/LN5组较P组和PDLLA组显著促进角质形成细胞增殖与黏附(P<0.05);与PDLLA组相比,PDLLA/LN5组划痕愈合百分比更高(P<0.05)。结论:钛表面PDLLA-LN5涂层对角质形成细胞的增殖、黏附及迁移具有促进作用。

Laminin-5,Cassis,Escin(LCE)修复霜促进点阵激光术后皮肤修复的研究

目的:研究Laminin-5,Cassis,Escin(LCE)修复霜对2 940 nm Er∶YAG点阵激光术后皮肤的修复作用。方法:试验采取随机双盲、半边脸自身对照的方法,2 940 nm Er:YAG点阵激光对15名受试者双侧眼角或眼周皱纹进行治疗。激光术后即刻及术后第1至第14天,试验侧使用A霜(LCE修复霜),阳性对照侧使用B霜(皮肤修护保湿霜),每日2次,共15 d。医生评估两种修复霜对点阵激光术后皮肤各种症状的改善作用,并检测皮肤血红素、含水量及经皮水分丢失(TEWL)值。结果:激光术后即刻使用两种修复霜,试验侧皮肤水肿评分为(4.7±0.3)分,明显低于阳性对照侧评分(6.9±0.5)分(P=0.036)。试验侧红斑持续时间为(4.0±0.3)d,短于阳性对照侧的(4.9±0.2)d(P=0.032),水肿持续时间(2.0±0.5)d短于阳性对照侧(4.0±0.7)d(P=0.041)。激光术后即刻、7 d及14 d,试验侧皮肤与阳性对照侧皮肤比较,两侧皮肤含水量、TEWL值及皮肤血红素值无统计学差异。结论:面部皮肤点阵激光术后使用LCE修复霜其功效与阳性对照产品基本相同。

亚溶解剂量的补体C5b-9复合物诱导肾小球系膜细胞增生及其NF-κB活化的作用

目的:研究亚溶解剂量补体C5b-9(SC5b-9)复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增生和细胞外基质(ECM)分泌的作用,并探讨NF-κB核转录因子是否介入SC5b-9的促增生效应。方法:体外纯培养大鼠GMCs,并行光镜、电镜及功能鉴定。质控SC5b-9后,将GMCs分为5组,即SC5b-9刺激组、SC5b-9+PDTC组(吡咯啉烷二甲基硫脲)、ATS组、灭活人血清组及完全营养液组。应用RT-PCR检测40minPCNA和FNmRNA水平;同时应用免疫组化检测18hGMCs增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维粘连蛋白(FN)及细胞核内NF-κBp65表达情况。结果:实验40min,SC5b-9刺激组PCNA和FNmRNA表达上调,PDTC处理后表达则明显下降,其余3组PCNA均呈阴性,另3组FN则均有一定基础表达。SC5b-9刺激组,GMCs免疫组化显示:PCNA、α-SMA、FN、NF-κBp65表达增加,PDTC处理后则4者表达明显下调,其余各组,PCNA、α-SMA、NF-κBp65均呈阴性,FN亦有一定的基础表达。结论:SC5b-9可能通过激活NF-κB促进GMCs增生和ECM分泌。

miR-450b-5p调控IL-1β诱导人牙龈上皮细胞粘附和迁移

目的:本研究旨在明确miR-450b-5p对炎症因子IL-1β调控人牙龈上皮细胞(HGEs)粘附与迁移的作用。方法:体外培养HGEs,在对数生长期饥饿培养12 h,5 ng/mL IL-1β刺激3 h,RNAiso Plus提取总RNA,进行small RNA测序以及实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)分析;细胞划痕实验观察IL-1β调控HGEs迁移;转染miR-450b-5p mimic、inhibitor和NC慢病毒质粒,qRT-PCR检测IL-1β调控HGEs中miR-450b-5p、Integrinβ6(ITGβ6)、Lamininγ2(LAMC2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:测序结果和qRT-PCR示IL-1β诱导miR-450b-5p表达降低;IL-1β诱导ITGβ6、LAMC2和MMP-9表达升高;过表达miR-450b-5p抑制ITGβ6、LAMC2和MMP-9基因表达,部分挽救IL-1β诱导的ITGβ6、LAMC2和MMP-9表达升高,敲低miR-450b-5p则出现相反结果;细胞划痕实验示过表达miR-450b-5p抑制IL-1β诱导的HGEs迁移。结论:miR-450b-5p抑制IL-1β诱导HGEs粘附与迁移,提示miR-450b-5p对维持HGEs稳定、抑制细胞迁移以及保护牙龈上皮屏障有重要作用。

胸腺素β_4调节血管内皮生长因子、层粘连蛋白5表达,促进糖尿病大鼠皮肤损伤愈合

目的研究胸腺素β_4(Tβ_4)调节血管内皮生长因子(VEGF)和层粘连蛋白5(LN-5)的表达,探讨其促进糖尿病大鼠皮肤损伤愈合的机制。方法 60只雄性SD大鼠建立糖尿病大鼠全层皮肤损伤模型(D=8mm),随机分为糖尿病对照(DM)组和Tβ_4治疗组[又分为低(L-Tβ_4)、中(M-Tβ_4)、高(H-Tβ_4)3个剂量组]。计算皮肤愈合率和表皮迁移率。一侧伤口进行HE染色,弹力纤维、胶原纤维、网状纤维三联染色和VEGF、LN-5免疫组化染色;另一侧伤口进行LN-5 ELISA测定。结果 M-Tβ_4和H-Tβ_4组各时间点伤口愈合率均较DM组高(P<0.05或P<0.01);损伤后10d M-Tβ_4和H-Tβ_4组的表皮迁移率高于DM组(P<0.01)。Tβ_4治疗组肉芽组织中VEGF表达较多、阳性血管较丰富,LN 5在表皮基底细胞和基底膜早期表达;损伤后2d和10d Tβ_4治疗组LN-5含量较高,损伤后4d较低。结论 Tβ_4可促进糖尿病大鼠皮肤损伤愈合,其机制可能与调节VEGF和LN-5表达有关。