miR-520f-3p靶向LAMA3对结直肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-520f-3p靶向层黏连蛋白(LAMA)3对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测病理组织样本、正常结直肠细胞FHC及CRC细胞SW480、LOVO、HCT116、HT29中miR-520f-3p表达;Western印迹检测病理组织样本中LAMA3蛋白表达。将对数生长期的LOVO细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-520f-3p inhibitor组、mimics NC组、miR-520f-3p mimics组、miR-520f-3p mimics+pcDNA组、miR-520f-3p mimics+pcDNA-LAMA3组;qRT-PCR检测各组细胞中miR-520f-3p表达;CCK-8法检测各组细胞增殖;划痕实验检测各组细胞迁移;Western印迹检测各组细胞中LAMA3、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-520f-3p与LAMA3的靶向关系;采用裸鼠皮下注射上述LOVO细胞以构建裸鼠体内成瘤模型,分为对照组、inhibitor NC组、miR-520f-3p inhibitor组、mimics NC组、miR-520f-3p mimics组、miR-520f-3p mimics+pcDNA组、miR-520f-3p mimics+pcDNA-LAMA3组,注射3 w后处死裸鼠,称量肿瘤质量。结果miR-520f-3p在CRC组织和SW480、LOVO、HCT116、HT29细胞中低表达,且在LOVO细胞中表达量最低,差异有统计学意义(P<0.05),因此,选用LOVO细胞为研究对象;与对照组、inhibitor NC组比较,miR-520f-3p inhibitor组miR-520f-3p表达显著降低,OD450值(24、48 h)、划痕愈合率、LAMA3、PCNA、CyclinD1、MMP-2蛋白表达及裸鼠体内肿瘤质量显著升高(P<0.05);与对照组比较,miR-520f-3p mimics组LOVO细胞中miR-520f-3p表达水平显著升高,OD450值(24、48 h)、划痕愈合率、LAMA3、PCNA、CyclinD1、MMP-2蛋白表达及裸鼠体内肿瘤质量显著降低(P<0.05);与miR-520f-3p mimics组比较,miR-520f-3p mimics+pcDNA-LAMA3组LOVO细胞中miR-520f-3p表达水平差异无统计学意义(P>0.05),OD450值(24、48 h)、划痕愈合率、LAMA3、PCNA、CyclinD1、MMP-2蛋白表达及裸鼠体内肿瘤质量显著升高(P<0.05)。结论过表达miR-520f-3p通过下调LAMA3抑制CRC细胞增殖、迁移及裸鼠体内移植瘤的生长。

子宫内膜癌组织LAMB3、FABP6表达及其预后价值

目的探讨层黏连蛋白亚基β3(LAMB3)、脂肪酸结合蛋白6(FABP6)在子宫内膜癌组织中的表达及预后价值。方法以本院接受手术治疗的113例子宫内膜癌患者术中收集的子宫内膜癌组织及其癌旁组织为研究样本。检测LAMB3、FABP6在组织中的表达情况;分析LAMB3和FABP6与患者预后的关系;分析影响子宫内膜癌患者预后的危险因素。结果子宫内膜癌组织中LAMB3、FABP6表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。子宫内膜癌组织中LAMB3与FABP6表达具有正相关关系(P<0.05)。LAMB3低表达组的生存率高于高表达组(P<0.05),FABP6低表达组的生存率高于高表达组(P<0.05);FIGO分期为Ⅲ期、肌层浸润深度≥1/2、淋巴结转移、低分化、POLE无突变型、LAMB3高表达及FABP6高表达是子宫内膜癌患者3年内死亡的危险因素(P<0.05)。结论LAMB3、FABP6在子宫内膜癌组织中异常高表达,两者与患者临床病理特征及预后密切相关。

层黏连蛋白α3亚基在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系

回顾性分析82例行手术切除且病理证实为胰腺癌患者的临床资料,探讨层黏连蛋白α3亚基(LAMA3)在胰腺癌组织中的表达及其与肝转移的关系。结果显示,胰腺癌肝转移组LAMA3高表达率显著高于非肝转移组,肿瘤分化程度、病理分期及LAMA3表达水平与胰腺癌肝转移相关且是其独立危险因素。LAMA3高表达可能促进胰腺癌发生肝转移,LAMA3可作为一种潜在治疗靶点和预后标志物。

S1P/S1PR1通路调节LAMB3的表达对食管鳞癌细胞迁移、黏附和转移的影响

该文主要探讨1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)/1型1-磷酸鞘氨醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor 1,S1PR1)通路调节层黏连蛋白亚基β3(laminin subunit beta 3,LAMB3)的表达对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移、黏附及转移的影响。使用GEO数据库分析LAMB3在ESCC癌组织与癌旁正常组织中的表达差异情况;用Western blot检测人食管上皮细胞HEEC及人食管鳞癌Eca109、TE-1、KYSE-150细胞中LAMB3的表达量;用S1P处理TE-1细胞,或在Eca109细胞中敲低或过表达S1PR1,采用Western blot检测LAMB3的表达情况;S1PR1-EGFP过表达载体和LAMB3小干扰RNA(siRNA)共转染Eca109细胞,采用划痕实验检测迁移能力;采用LAMB3 siRNA或LAMB3短发夹RNA(shRNA)下调ESCC细胞LAMB3的表达,过表达LAMB3的慢病毒上调ESCC细胞LAMB3的表达,通过CCK8法、划痕实验、细胞–基质黏附实验分别检测ESCC细胞的增殖、迁移和黏附能力,Western blot检测上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的表达情况;裸鼠尾静脉注射LAMB3 shRNA敲低的Eca109细胞,观察其转移能力及生存期。结果显示,LAMB3在ESCC癌组织及ESCC细胞中的表达均高于癌旁正常组织及正常食管上皮细胞;S1P作用后的TE-1细胞LAMB3表达水平增高;在Eca109细胞中敲低S1PR1,LAMB3表达下调;在Eca109细胞中过表达S1PR1,LAMB3表达上调,促进细胞迁移,并且干扰LAMB3表达可抑制上述作用;敲低LAMB3的表达,Eca109、TE-1细胞增殖无显著变化,而迁移、黏附受到明显抑制,过表达LAMB3后,Eca109细胞增殖无显著变化,而迁移、黏附增强;LAMB3 shRNA敲低的Eca109细胞EMT过程被抑制,MMP9表达降低,过表达LAMB3则出现相反的效应;与NC shRNA组相比,注射LAMB3 shRNA敲低的Eca109细胞的裸鼠生存期明显延长,肿瘤体内转移灶减少。该研究得出,LAMB3在ESCC细胞及组织中表达上调,S1P/S1PR1通路能诱导LAMB3的表达,促进ESCC细胞的体外迁移、黏附和体内转移。

LAMB3的理化性质及其分子结构的分析

层黏连蛋白亚基β3(laminin subunit beta 3, LAMB3)在结肠癌与甲状腺癌等肿瘤发生发展中参与调控肿瘤的增殖、迁移和侵袭。本文对LAMB3的理化性质和分子结构进行了分析,为进一步研究LAMB3的功能提供了新的思路。利用ExPASy、TMHMM、SignalP、PSORTⅡ、SOPMA、SWISS MODEL等方法对LAMB3的理化性质、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、二级结构和高级结构进行了分析。采用STRING、GEPIA分别对蛋白互作网络、肿瘤与正常组织中表达水平等进行分析。分析得出,LAMB3的分子式为C5497H8802N1702O1735S96,相对分子质量为129 572.48,理论等电点PI=7.14,不稳定指数为57.85;脂溶指数为68.06,总平均亲水性为–0.513;LAMB3是经典的分泌型蛋白,具有信号肽结构;LAMB3的亚细胞定位主要在细胞核内(60.9%);LAMB3的二级结构主要由不规则卷曲(45.82%)和α-螺旋(45.05%)组成;LAMB3包含有15个糖基化位点(12个O-糖基化位点+3个N-糖基化位点)和46个磷酸化位点;LAMB3的互作蛋白主要包括ITGB4、LAMC2、LAMA3等20个蛋白;与正常组织相比,LAMB3主要在头颈部鳞状细胞癌和胰腺癌中高表达。以上结果提示,LAMB3是一种不稳定的核内亲水碱性蛋白,具有多个修饰位点,主要与整合素家族及层黏连蛋白家族相互作用,可能参与细胞外基质受体相互作用、黏着斑、PI3K-AKT等信号通路。这将为进一步探讨LAMB3在肿瘤等疾病中的功能及作用机制提供参考。