PDGFR-β/TGF-β/Smad2/3信号通路调控阿尔茨海默病血脑屏障完整性和学习记忆能力的分子机制研究

目的:分析PDGFR-β/TGF-β/Smad2/3信号通路调控阿尔茨海默病(AD)血脑屏障(BBB)完整性和学习记忆能力的分子机制。方法:利用APP/PS1转基因AD小鼠模型,通过水迷路及觅食试验分析学习记忆能力;荧光免疫组织化学法检测海马区血管周细胞增殖率(ki67/desmin)、周细胞覆盖率(desmin/lectin);Western blot检测海马区血管周细胞TGF-βR1及其下游信号通路分子、紧密连接(TJs)蛋白的表达水平。经过外源性PDGF-BB脑室内注射和/或TGF-βR1激酶抑制剂SB431542腹腔内注射预处理后,分别进行上述分析。构建AD体外BBB模型,经过PDGF-BB和/或SB431542作用后,进行异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白(FITC-BSA)渗透性和跨细胞电阻检测。结果:与对照组相比,APP/PS1小鼠经过虚拟平台次数明显减少,达到终点所需时间明显延长(水迷路训练试验),投食区正确选择率明显下降(觅食训练试验);海马区desmin/lectin阳性细胞比例明显下降;TGF-βR1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平明显升高;TJs蛋白表达水平明显下降。外源性PDGF-BB可使APP/PS1小鼠经过虚拟平台次数明显增加、达到终点所需时间明显缩短(水迷路正式试验第28天)、投食区正确选择率明显提高(觅食正式试验第28天);海马区desmin/lectin阳性细胞比例明显增加;使TGF-βR1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平明显升高;使TJs蛋白表达水平明显升高。SB431542则可部分抑制上述作用。体外试验证明:外源性PDGF-BB可明显降低AD模型组的最终渗透系数,提高24 h时相对TEER值;SB431542则可部分抑制上述作用。结论:PDGFR-β/TGF-β/Smad2/3信号通路可通过诱导周细胞分化、覆盖,提高内皮细胞TJs的表达,调控AD血脑屏障完整性,以促进学习记忆能力恢复。

芒柄花素对脑缺血再灌注后血脑屏障完整性影响

目的:基于脑缺血再灌注后,血脑屏障通透性随时间变化具有一定规律,进一步考查芒柄花素磺酸钠(Sul-F)对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障(BBB)完整性的影响。方法:将模型大鼠分为溶剂组(n=5)和给药组(n=5),另设假手术组(n=5)。于相应时间点前0.5 h尾静脉注射2%伊文思兰(EB)(内含Sul-F),心脏灌流后取脑组织,样品经处理后于酶标仪620 nm测吸光度。结果:BBB的开放呈一定规律性,缺血1 h再灌注0、4和48 h,EB的脑透过量均显著增高,且缺血1 h再灌注4 h,EB的脑透过量最高;每个时间点给药组较溶剂组EB的透过量低7.0~9.0μg/ml(P<0.05),有统计学意义。结论:脑缺血再灌注损伤后BBB完整性受到破坏,Sul-F可以随BBB通透性的增加而透过BBB进入脑实质,脑缺血1 h再灌注4 h时BBB透过率最大;Sul-F能一定程度上降低脑缺血再灌注模型大鼠BBB伊文思兰透过率。

多模式CT预测评估缺血性卒中患者血脑屏障完整性和侧支循环的价值分析

目的探讨多模式CT对评估缺血性卒中患者血脑屏障完整性和侧支循环的价值。方法选取我院收治的确诊为缺血性卒中的患者76例,行多模式CT检查,包括CT平扫(NCCT)、CT灌注成像(CTP)及CT血管成像(CTA)等模式。分析灌注范围的分布并绘制感兴趣区(ROI),测定脑血流量(CBF)、脑血容量(CBV)、平均通过时间(MTT)及表面通透性(PS)等灌注指标。结果1)依据侧支循环分组,良好组患者的CBV、CBF、MTT明显高于不良组(P<0.05)。良好组患者末次随访时的梗死范围、mRS评分明显低于不良组(P<0.05);2)依据出血性转化分组,HT组的PS明显高于未HT组,而MTT明显低于未HT组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于脑血管狭窄及侧支循环的建立,多模式CT可观察侧支循环的建立或开放状况,预测缺血性卒中预后水平,可评估血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的完整性及HT的发生风险,对临床治疗有指导意义。

通过皮肤脂质屏障完整性评估香波刺激性

利用改良的测试皮肤脂质屏障完整性(Corneosurfametry)方法评估香波的刺激性,并和皮肤保湿和皮肤屏障功能测试做对照。结果表明,用2款香波清洗后,温和指数(CIM)值整体均降低,表明角质层的脂质屏障受损,尤其在表层2款香波之间具有显著差异,但皮肤保湿和皮肤屏障功能测试无法区分两者差异。研究结果表明,对于评估洗发香波对皮肤的刺激性,Corneosurfametry方法比皮肤保湿和屏障功能测试方法更为灵敏。

安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的完整性探讨

探讨安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的完整性。 方法:回顾性分析 2020 年 1 月~2021 年 6 月在我院接受短暂性脑缺血发作(TIA)治疗的 240 例患者的临床资料,均经 CT、颈动脉超声等检查确诊,根据不同治疗方法分为两组,对照组使用常规药物治疗,在此基础上,观察组使用安宫牛黄丸治疗,对比两组的氧化应激指标、血脑屏障相关指标。 结果:观察组治疗后 MDA、ROS 明显低于对照组,T-AOC 明显高于对照组(P<0.05);观察组治疗后脑组织含水量、NF-κB、NOX4 表达明显低于对照组(P<0.05)。 结论:安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的完整性效果显著,能有效减轻脑水肿,抑制氧化应激反应,发挥脑保护作用。

局灶性脑缺血后血脑屏障采取安宫牛黄丸维持的完整性分析

探讨局灶性脑缺血后血脑屏障采取安宫牛黄丸维持的完整性分析。 方法:回顾性分析 2020年 1 月~2021 年 7 月在我院接受短暂性脑缺血发作(TIA)治疗的 240 例患者的临床资料,根据治疗方案不同,将所有患者分为对照组和观察组,对照组使用常规药物治疗,在此基础上,观察组使用安宫牛黄丸治疗,对比两组的血脑屏障各指标。 结果:观察组治疗后脑组织含水量、脑缺血组织细胞凋亡率均明显低于对照组(P<0.05);观察组治疗后 TNF-α,IL-1β,MMP-9、iNOS 水平均明显低于对照组(P<0.05)。 结论:局灶性脑缺血后血脑屏障采取安宫牛黄丸维持的完整性效果显著,能有效减轻血脑屏障损伤,抑制炎症反应及氧化应激反应,减轻脑水肿,改善预后。

安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的完整性的临床研究

探讨安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的完整性的临床研究。 方法:回顾性分析2020 年 1 月~2021 年 6 月期间在我院接受短暂性脑缺血发作(TIA)治疗的 18 岁以上 240 例患者的临床资料,所有患者均接受了脑成像、颈动脉超声检查和 24h 心电图监测,根据治疗方案不同,将所有患者分为对照组和观察组,对照组使用常规药物治疗,在此基础上,观察组使用安宫牛黄丸治疗,对比两组的血脑屏障各指标、各项血清因子。 结果:观察组治疗后脑组织含水量、AQP4 mRNA 表达量明显低于对照组(P<0.05);观察组治疗后 NF-κB、MMP-9、ICAM-1、TNF-α、IL-1β 水平均明显低于对照组(P<0.05)。 结论:安宫牛黄丸治疗 TIA 的效果显著,能有效减轻脑水肿,抑制炎症反应及脑血管通透性,维持局灶性脑缺血后血脑屏障的完整性。

气井完整性屏障系统可靠性定量评价方法研究

高温高压高含硫气井当前已经形成了基于两级完整性屏障分析的气井完整性评价方法,该方法将井完整性屏障评价分为一级井屏障和二级井屏障,通过孤立的分析各级屏障部件服役状况来确定气井完整性状况,但针对大量非三高气井的完整性评价,直接采用两级屏障分析方法获取的井完整性评价结论过于保守,因为单一的屏障部件削弱和失效并不会导致井筒流体不受控制的进入地表或大气。因此,文章引入一种全新的井完整性分析方法。该方法将气井完整性屏障作为一个不可分割的整体进行系统可靠性分析,通过引入事件树分析方法,对井屏障系统进行泄漏路径识别,构造事件树及系统逻辑框图,分析各个泄漏路径上各级完整性屏障部件的失效概率,并依据系统逻辑框图定量计算气井井屏障系统发生失效的可能性。

迷走神经刺激对腹部创伤大鼠肠黏膜屏障的影响研究

目的迷走神经电刺激可在多种病理生理情况下保护肠屏障功能。文中探讨迷走神经刺激对腹部创伤大鼠肠黏膜屏障的影响。方法建立腹部创伤大鼠模型,将24只大鼠按随机数字表法分为对照组(腹部创伤)和实验组(腹部创伤模型+迷走神经刺激),每组12只。实验组分离左颈部迷走神经,电刺激10 min(5 V,2 ms,1 Hz),然后进行腹部创伤造模手术,并再行迷走神经刺激10 min,分别于术后1、6、24 h进行取材,每个时间点分配4只大鼠。检测大鼠血浆中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)、肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,i FABP)、D-乳酸(D-Lactate acid,D-LA)浓度;FITC-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate dextran,FD4)对大鼠肠黏膜屏障的通透性;肠黏膜中紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1、Claudin1/2)的表达水平;肠组织中胶质细胞纤酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)的表达与分布。结果实验组迷走神经刺激6 h和24 h,i FABP浓度显著高于同一时间点的对照组[(442.55±16.16)pg/m L vs(335.72±35.46)pg/m L,(411.45±26.18)pg/m L vs(318.66±45.84)pg/m L,P<0.05];实验组IL-6、TNF-α、D-LA浓度虽然高于同一时间点对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);实验组中1 h和6 h的血浆FD4浓度显著低于同一时间的对照组(P<0.05);而紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin1/2的表达显著高于对照组(P<0.01);实验组GFAP阳性细胞数在迷走神经刺激后6 h亦显著高于对照组(P<0.01),而在24 h显著低于对照组(P<0.01)。结论腹部创伤动物模型中,刺激迷走神经可显著降低肠黏膜屏障通透性,增强肠黏膜机械屏障。

S-亚硝基谷胱甘肽对腹部创伤大鼠肠黏膜屏障的影响

目的:探讨S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对腹部创伤大鼠肠黏膜屏障的保护作用。方法:建立腹部创伤大鼠模型,将24只大鼠随机分为对照组(腹部创伤组)和GSNO组(腹部创伤模型+GSNO干预,50μg/kg),每组12只。分别在第1、6和24 h检测肠黏膜紧密连接蛋白(Occludin、Zo-1、Claudin1/2)的表达水平;FITC-葡聚糖(FD4)对大鼠体内肠黏膜屏障的通透性;肠壁中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的数量。结果:GSNO作用1 h和6 h,血浆中FD4水平显著低于对照组(P<0.05);GSNO处理6 h、24 h,肠黏膜屏障中紧密连接蛋白Claudin、Occludin、Zo-1表达水平均显著高于对照组(P<0.01);GSNO作用6 h和24 h时,GFAP阳性细胞数均显著低于对照组(P<0.01)。结论:使用GSNO干预,可改善腹部创伤大鼠的肠黏膜屏障通透性增加和肠屏障功能损害。

关于安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的效果研究

探讨关于安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的效果研究。 方法:将 2020 年 1 月 ~2021 年 8 月在我院接受短暂性脑缺血发作(TIA)治疗的 240 例患者按不同治疗方案随机分为两组,对照组使用常规药物治疗,在此基础上,观察组使用安宫牛黄丸治疗,对比两组的血脑屏障损伤各指标、血管新生指标。结果:观察组治疗后 ICAM-1、LFA-1、MMP-9、AQP-4 表达明显低于对照组,EB、NGF 表达明显高于对照组(P<0.05);观察组治疗后 VEGF、HIF-1α 水平明显高于对照组(P<0.05)。 结论:安宫牛黄丸维持局灶性脑缺血后血脑屏障的效果显著,能有效减轻血脑屏障损伤,促进血管新生,促进缺血区域的损伤修复。

黑豆皮提取物对果蝇结肠炎的保护作用

黑豆是东方医学中常见的药食同源材料,黑豆皮提取物(black bean seed coat extract,BBSCE)含有高浓度的酚类化合物,具有很好的抗氧化和抗炎症活性。文章采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)诱导的果蝇溃疡性结肠炎研究BBSCE对肠道损伤的防御作用。研究发现,果蝇在SDS暴露实验中,其存活率、攀爬能力以及肠道形态会受到显著影响,肠道屏障的完整性也会受到严重破坏。膳食喂养BBSCE可以有效地减轻SDS暴露对果蝇造成的损害,包括行为学损伤、肠道形态及肠道屏障的完整性。结果表明,BBSCE可以通过改善肠道萎缩和提高肠道屏障的完整性保护肠道免受化合物造成的损伤,可为功能性食品或天然药物的开发提供理论依据。

肠道黏膜紧密连接与通透性研究进展

肠道不仅是机体营养物质消化吸收的主要器官,同时也担任着重要的免疫角色。完整的肠道在消化吸收各种小分子营养物质如葡萄糖、氨基酸和电解质等的同时,可以阻止肠道内病原微生物和一些大分子物质等通过肠壁进入血液循环系统。肠道黏膜屏障,特别是肠道上皮细胞间的紧密连接屏障,在此过程中起着非常重要的作用。肠道屏障的完整性与通透性是反映肠道健康的一个重要指标。就肠道屏障及影响屏障完整性的因素与维持保护肠道屏障健康的措施进行综述。

非糜烂性胃食管反流病烧心症状感知机制的认识

非糜烂性胃食管反流病是一组异质性疾病,目前其发病机制尚未明确,已有大量研究发现食管黏膜屏障完整性受损及食管内脏高敏感性是其烧心症状感知的重要机制。因此,本文将就这两种重要机制在其发病中的作用作一综述。

辣木多肽对LPS所致Caco-2细胞间高通透性的保护作用

探讨了辣木多肽(MOPP)对脂多糖(LPS,2μg/m L)诱发Caco-2细胞高通透性的保护作用。MTT法测定细胞生存率,细胞乳酸脱氢酶(LDH)水平依说明用试剂盒测定。酶联法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌水平。跨上皮细胞电阻(TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度评估细胞通透的改变。实时定量PCR检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、ZO-1和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的mRNA表达。与模型细胞相比,高浓度(150μg/m L)的MOPP处理能显著提高受损细胞生存率至83.8%,并有效抑制50.3%的LDH溢出。MOPP有效降低模型细胞中IL-1β(19.8%),IL-8 (43.7%)和TNF-α(37.9%)的分泌并抑制其mRNA转录(IL-1β:44.3%,IL-8:35.0%,TNF-α:33.5%)。此外,MOPP可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的mRNA转录,并抑制31.3%的MLCK的mRNA转录。结果意味着,MOPP具有较强的抗炎活性,可由上调细胞内紧密连接相关因子的mRNA转录显著来改善LPS所致Caco-2细胞间高通透性的发生。

柚叶总黄酮对LPS所致Caco-2结肠上皮细胞间高通透性的保护作用

探讨柚叶总黄酮(PLTFE)对脂多糖(LPS,2μg/m L)诱发Caco-2高通透性细胞模型的保护作用。Caco-2模型细胞以不同浓度的PLTFE(0、10、50、100、150μg/m L)处理培养24 h进行后续实验。MTT法测定细胞生存率,细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平依说明书使用试剂盒测定。酶联法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定白介素(interlukin-1β,IL-1β)、IL-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平。跨上皮细胞电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度用于评估细胞通透性水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、封闭小带蛋白(ZO-1)和肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的m RNA表达。结果表明,柚叶总黄酮能显著提高受损细胞生存率至86.1%,抑制受损细胞中LDH的溢出(p <0.05)。同时还能有效抑制受损细胞中炎性细胞因子(IL-1β、IL-8、TNF-α)的分泌及m RNA转录。此外,柚叶总黄酮可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的m RNA转录,抑制MLCK的m RNA转录,改善细胞间高通透性q RT-PCR法检测细胞中相关因子的m RNA转录水平。结果提示,柚叶总黄酮具有较强的抗炎活性,能通过上调细胞内细胞紧密连接相关因子的m RNA转录显著改善LPS造成的Caco-2细胞间高通透性的发生(p <0.05)。

美金刚对脓毒症相关性脑病模型小鼠神经保护作用

目的探讨美金刚对脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)小鼠神经行为的作用及其机制。方法将90只8~12周雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为3组(每组30只):假手术组、模型组和美金刚组。假手术组和美金刚组小鼠采用盲肠结扎穿孔法制备SAE模型。假手术组小鼠只给予开腹和关腹,美金刚组小鼠于术前3 h和造模后连续7 d给予美金刚灌胃(15 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组和假手术组小鼠则灌胃等体积0.9%氯化钠溶液。观察各组小鼠造模后7 d生存率及神经行为学和认知功能评分。通过伊文思蓝实验检测血脑屏障通透性;免疫荧光染色检测星形胶质细胞表达;酶联免疫吸附实验检测细胞炎性因子;谷氨酸实验检测谷氨酸表达。采用Graphpad Prism 8.3.0软件分析所有数据,生存率使用Kaplan-Meier生存曲线分析;计量资料多组间比较采用单因素方差分析或非参数Kruskal-Wallis检验。结果(1)3组小鼠造模后7 d生存率差异有统计学意义(F=24.11,P<0.01),造模后7 d美金刚组生存率高于模型组[57%(17/30),27%(8/30),P<0.01]。(2)行为学结果:造模7 d后,3组小鼠旷场实验总路程、中央区域停留时间、四角区域停留时间、神经行为学评分、爬杆实验、新物体识别实验偏好指数比较均差异有统计学意义(F/χ^(2)=17.67,17.30,9.39,14.06,10.36,14.81,均P<0.05)。模型组小鼠神经行为学评分、爬杆实验评分、新物体识别实验偏好指数、旷场实验总路程、中央区域停留时间均低于假手术组(均P<0.05);而四角区域停留时间高于假手术组(P<0.05)。美金刚组小鼠旷场实验总路程[1564.07(1363.24,1988.19)cm,913.91(574.32,1096.23)cm]、中央区域停留时间[5.21(4.91,8.76)s,1.09(0.25,1.64)s]、神经行为学评分[(9.75±0.50)分,(8.25±0.50)分]、爬杆实验评分[(5.67±0.52)分,(4.56±0.53)分]、新物体识别实验偏好指数[(56.50±10.59),(26.84±2.91)]均高于模型组(均P<0.05);而四角区域停留时间低于模型组[(480.30±50.64)s,(529.80±36.20)s,P<0.05]。(3)分子指标结果:3组小鼠脑内伊文思蓝含量、海马区和大脑皮质区星形胶质细胞数量、细胞促炎因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)、细胞抗炎因子(IL-10)及谷氨酸等指标均差异有统计学意义(F/χ^(2)=8.84,6.43,28.46,23.63,12.23,16.04,69.22,6.65,均P<0.05)。模型组伊文思蓝含量、海马区和大脑皮质区星形胶质细胞数量、细胞促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及谷氨酸表达均低于假手术组,模型组细胞抗炎因子IL-10低于假手术组(P<0.05)。美金刚组伊文思蓝含量[(5.67±1.38)μg/g,(11.08±2.79)μg/g]、海马区星形胶质细胞数量[16.50(13.75,22.25)个/μm 2,80.00(73.50,83.50)个/μm^(2)]、大脑皮质区星形胶质细胞数量[40.00(29.00,48.00)个/μm^(2),81.50(72.25,89.00)个/μm^(2)]低于模型组(均P<0.05)。美金刚组细胞促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及谷氨酸表达水平均低于模型组(均P<0.05),美金刚组细胞抗炎因子IL-10则高于模型组(均P<0.05)。结论美金刚能改善SAE小鼠受损的神经行为和认知功能,这可能与其改善小鼠受损血脑屏障的完整性、缓解脑内炎性反应以及降低脑内谷氨酸水平有关。

柚叶总多酚对LPS所致Caco-2细胞间高通透性的保护作用

本文探讨了柚叶总多酚对脂多糖(LPS,2μg/m L)致Caco-2细胞高通透性的保护作用。MTT法测定细胞生存率,细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平依说明书使用试剂盒测定。酶联法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定白介素(Interlukin,IL)-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α分泌水平。跨上皮细胞电阻(trans epithelial electrieal resistanee,TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度用于评估细胞通透性水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、ZO-1和肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的m RNA表达。柚叶总多酚能显著提高受损细胞生存率,抑制LDH溢出,有效抑制受损细胞炎性细胞因子(IL-1β、IL-8、TNF-α)的分泌及m RNA转录。柚叶总多酚可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的m RNA转录,抑制MLCK的m RNA转录从而改善细胞间高通透性。结果提示,柚叶总多酚具有较强的抗炎活性,能通过上调细胞内细胞紧密连接相关因子的m RNA转录显著改善LPS造成的Caco-2细胞间高通透性的发生。