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基于乙型肝炎病毒核心蛋白的颗粒性肽展示载体的构建
被引量:
2
1
作者
杨海杰
陈敏
+5 位作者
何水珍
程通
顾颖
管保全
张军
夏宁邵
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期436-440,共5页
为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1~6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1~3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4~6拷贝的重组抗原则未...
为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1~6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1~3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4~6拷贝的重组抗原则未见明显表达.电镜检测显示重组抗原CI、CII和CIII可以形成形态与HBcAg类似的类病毒颗粒,颗粒直径在30~34nm之间.ELISA分析显示这3种VLP抗原具有很强的preS1抗原的免疫反应性,而对HBc单克隆抗体则基本失去反应性.提示外源多肽pre(21 47)可被有效地递呈至类HBc颗粒的表面,且外源多肽的插入使HBc主要的免疫优势表位遭到了破坏.这些证据表明利用HBcAg的专一性呈递能力来构建多价抗原可作为免疫原设计时的一种策略.
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关键词
乙型肝炎病毒
核心蛋白
颗粒性肽
展示载体
preSl
免疫原性
类病毒颗粒
原核表达
下载PDF
职称材料
酵母细胞表面展示载体的构建及功能验证
被引量:
1
2
作者
张秀艳
侯晓彦
+1 位作者
陈福生
王小红
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期1-4,共4页
目的:构建酵母细胞表面展示载体。方法:通过酶切连接方法在pADH1载体中插入信号肽、α-凝集素(含连接子)编码序列构建表面展示载体,并用EGFP来验证该载体的功能。结果:得到了267 bp的信号肽序列、1 623 bp的凝集素编码序列和717 bp的绿...
目的:构建酵母细胞表面展示载体。方法:通过酶切连接方法在pADH1载体中插入信号肽、α-凝集素(含连接子)编码序列构建表面展示载体,并用EGFP来验证该载体的功能。结果:得到了267 bp的信号肽序列、1 623 bp的凝集素编码序列和717 bp的绿色荧光蛋白编码序列,酵母细胞表面展示载体被成功构建,且绿色荧光蛋白被插入到pADH1-agg中后,阳性转化子能在荧光显微镜下呈现绿色荧光。结论:这说明酵母细胞表面展示载体已经构建成功,并能成功表达和展示蛋白在酵母细胞表面。该载体的构建成功将为利用酵母表面展示系统表达和展示相关蛋白提供了平台。
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关键词
酵母表面
展示载体
绿色荧光蛋白
凝集素
原文传递
枯草芽孢杆菌表达载体的构建及猪源表皮生长因子的表达
被引量:
2
3
作者
董兵
肖童
+4 位作者
李志辉
李聪
季明月
陈海清
檀建新
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期71-76,共6页
本文首先以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)穿梭载体pDG150为基础,构建了含有5个克隆位点的表达载体pTD160,并在此基础上构建了带有淀粉酶信号肽的分泌表达载体pTD161和可用于外源蛋白与胞衣蛋白cotG融合表达的表面展示载体pTD162。将脂肪酶基...
本文首先以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)穿梭载体pDG150为基础,构建了含有5个克隆位点的表达载体pTD160,并在此基础上构建了带有淀粉酶信号肽的分泌表达载体pTD161和可用于外源蛋白与胞衣蛋白cotG融合表达的表面展示载体pTD162。将脂肪酶基因lipa分别插入pTD161和pTD162,在B.subtilis 168中表达,其LipA酶活性分别为23.4U/mg和15.3U/mg,表明pTD载体具有良好的表达性能。通过无抗生素压力传代培养10代后,发现其稳定性仍为96.5%和95.0%,证明pTD载体具备较高的稳定性。将密码子优化后的猪源表皮生长因子基因pegf分别导入pTD161和pTD162,转化B.subtilis 168获得工程菌Bs168-pTD161-pegf和Bs168-pTD162-pegf,ELISA法证明pEGF在工程菌中表达量分别达到365ng/mL和285ng/mL,证明pEGF获得高效表达和展示。
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关键词
枯草芽孢杆菌
穿梭表达
载体
表面
展示载体
pEGF
lipaseA
下载PDF
职称材料
题名
基于乙型肝炎病毒核心蛋白的颗粒性肽展示载体的构建
被引量:
2
1
作者
杨海杰
陈敏
何水珍
程通
顾颖
管保全
张军
夏宁邵
机构
厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学
出处
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期436-440,共5页
基金
国家重点科技(攻关)计划(96 920 37 09)
文摘
为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1~6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1~3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4~6拷贝的重组抗原则未见明显表达.电镜检测显示重组抗原CI、CII和CIII可以形成形态与HBcAg类似的类病毒颗粒,颗粒直径在30~34nm之间.ELISA分析显示这3种VLP抗原具有很强的preS1抗原的免疫反应性,而对HBc单克隆抗体则基本失去反应性.提示外源多肽pre(21 47)可被有效地递呈至类HBc颗粒的表面,且外源多肽的插入使HBc主要的免疫优势表位遭到了破坏.这些证据表明利用HBcAg的专一性呈递能力来构建多价抗原可作为免疫原设计时的一种策略.
关键词
乙型肝炎病毒
核心蛋白
颗粒性肽
展示载体
preSl
免疫原性
类病毒颗粒
原核表达
Keywords
preS1
core protein
immunogenicity
virus-like particles
prokaryotic expression
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
Q71 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
酵母细胞表面展示载体的构建及功能验证
被引量:
1
2
作者
张秀艳
侯晓彦
陈福生
王小红
机构
华中农业大学食品科技学院
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期1-4,共4页
基金
高等学校博士学科点科研专项基金项目(No.200805041071)
国家自然科学基金项目(No.31071588)资助
文摘
目的:构建酵母细胞表面展示载体。方法:通过酶切连接方法在pADH1载体中插入信号肽、α-凝集素(含连接子)编码序列构建表面展示载体,并用EGFP来验证该载体的功能。结果:得到了267 bp的信号肽序列、1 623 bp的凝集素编码序列和717 bp的绿色荧光蛋白编码序列,酵母细胞表面展示载体被成功构建,且绿色荧光蛋白被插入到pADH1-agg中后,阳性转化子能在荧光显微镜下呈现绿色荧光。结论:这说明酵母细胞表面展示载体已经构建成功,并能成功表达和展示蛋白在酵母细胞表面。该载体的构建成功将为利用酵母表面展示系统表达和展示相关蛋白提供了平台。
关键词
酵母表面
展示载体
绿色荧光蛋白
凝集素
Keywords
Yeast cell surface display vector
EGFP
α-agglutinin
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
枯草芽孢杆菌表达载体的构建及猪源表皮生长因子的表达
被引量:
2
3
作者
董兵
肖童
李志辉
李聪
季明月
陈海清
檀建新
机构
河北农业大学食品科技学院/河北省农产品加工工程技术中心
西北农林科技大学生命科学学院
河北农业大学理工学院
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期71-76,共6页
基金
河北省重点研发计划项目(16275505D)
河北省食品科学与工程学科"双一流"建设资金项目(2016SPGCA18)
文摘
本文首先以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)穿梭载体pDG150为基础,构建了含有5个克隆位点的表达载体pTD160,并在此基础上构建了带有淀粉酶信号肽的分泌表达载体pTD161和可用于外源蛋白与胞衣蛋白cotG融合表达的表面展示载体pTD162。将脂肪酶基因lipa分别插入pTD161和pTD162,在B.subtilis 168中表达,其LipA酶活性分别为23.4U/mg和15.3U/mg,表明pTD载体具有良好的表达性能。通过无抗生素压力传代培养10代后,发现其稳定性仍为96.5%和95.0%,证明pTD载体具备较高的稳定性。将密码子优化后的猪源表皮生长因子基因pegf分别导入pTD161和pTD162,转化B.subtilis 168获得工程菌Bs168-pTD161-pegf和Bs168-pTD162-pegf,ELISA法证明pEGF在工程菌中表达量分别达到365ng/mL和285ng/mL,证明pEGF获得高效表达和展示。
关键词
枯草芽孢杆菌
穿梭表达
载体
表面
展示载体
pEGF
lipaseA
Keywords
Bacillus subtilis
shuttle expression vector
surface display vector
pEGF
lipase A
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于乙型肝炎病毒核心蛋白的颗粒性肽展示载体的构建
杨海杰
陈敏
何水珍
程通
顾颖
管保全
张军
夏宁邵
《厦门大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
下载PDF
职称材料
2
酵母细胞表面展示载体的构建及功能验证
张秀艳
侯晓彦
陈福生
王小红
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
原文传递
3
枯草芽孢杆菌表达载体的构建及猪源表皮生长因子的表达
董兵
肖童
李志辉
李聪
季明月
陈海清
檀建新
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
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