基于“以不变应万变”的策略研发泛β属冠状病毒疫苗

21世纪以来,全球已发生3次由冠状病毒感染引起的高致病性传染病疫情。其中,新冠病毒疫情规模空前,已造成数百万人死亡,给人类社会带来巨大冲击。接种疫苗是防控传染病的有效方法之一。目前,大部分疫苗开发商选择“以变应变”的策略(使用最新变异株的抗原位点)开发新冠疫苗。然而,疫苗开发的速度远远赶不上病毒变异的速度。笔者团队坚持采用“以不变应万变”的策略(使用原始毒株蛋白中保守的抗原位点)研发高效广谱抗沙贝冠状病毒或β属冠状病毒疫苗,以期更好地应对新冠病毒变异株以及未来新发与再现的β属冠状病毒疫情。

Beta属冠状病毒亚基因组检测及应用进展

目前已知可以感染人类的冠状病毒(coronavirus)有7种,其中Beta冠状病毒属(beta coronavirus)有5种。人冠状病毒OC43(human coronavirus OC43,HCoV-OC43)、人冠状病毒HKU1(human coronavirus HKU1,HCoV-HKU1)感染呈现季节性特征,症状轻微。严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(middle east respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染后迅速在人与人之间传播,病毒流行对公共卫生安全和国民经济造成严重威胁。核酸检测是鉴别、诊断和排查病毒感染患者的关键检测方法之一,但核酸阳性并不意味着病毒具有传染性,需要探索一种快速反应病毒复制能力的检测方法作为补充。研究证实Beta属冠状病毒在细胞复制过程中产生的亚基因组(subgenomic RNA,sgRNA)可以作为判断病毒活性的指标。本文对Beta属冠状病毒亚基因组的检测应用等进行综述,旨在建立亚基因组检测方法,优化病毒检测方式,完善实验室动物模型创建及药物疫苗有效性评价体系,助力开展实验研究。

α属冠状病毒入侵宿主所需宿主因子研究进展

属冠状病毒包含众多对畜牧业存在重大威胁的成员,如猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎病毒等。病毒识别细胞表面的受体是感染宿主的第一步。因此,探索冠状病毒感染机制对了解病毒的组织嗜性和宿主谱具有重要意义。本文系统总结了近年来α属冠状病毒入侵宿主所需的受体和其它辅助性宿主因子的作用机理。

冠状病毒与宿主细胞受体相互作用的研究进展

冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒,具有复杂的进化历史,属于套式病毒目,冠状病毒科,冠状病毒亚科,冠状病毒属,这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^([1])。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒,成熟的冠状病毒直径为60~220 nm,分为4个不同的属:α、β、γ和δ冠状病毒(图1)。冠状病毒粒子多呈现球形或不规则形,其基因组大小介于26 000~32 000 bp,长度约为30 kb^([2]),包含6~11个开放阅读框(Open reading frame,ORF),第一个ORF占整个基因组约67%,编码16种非结构蛋白(Nonstructural protein)^([3]),其余的ORF编码辅助蛋白和结构蛋白。4种主要的结构蛋白为刺突表面糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)^([4])(图2A、2B)。S蛋白在结合宿主细胞上的受体中起着至关重要的作用,也决定了病毒的宿主向性^([5,6])。冠状病毒可以通过S蛋白的突变或与其他毒株重组获得与新的宿主受体结合的能力,从而发生组织或宿主嗜性的改变。冠状病毒受体特异性的改变决定了病毒的进化方向和跨种间传播。冠状病毒因其跨越多种宿主物种屏障的灵活性而闻名,具有传播人兽共患疾病的能力。

冠状病毒TGEV调控Ⅲ型干扰素的新机制

冠状病毒是一类单股正链不分节段的RNA病毒,属于尼多病毒目,冠状病毒科,根据其遗传演化可分为α、β、γ、δ4个属,其中许多病毒能够感染人或动物的呼吸道或肠道,如β冠状病毒属的新型冠状病毒主要侵袭呼吸道,严重威胁人类健康;而α冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)主要感染肠道,引起仔猪腹泻,死亡率可高达100%。

猪德尔塔冠状病毒的流行、传播及防控策略

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是德尔塔冠状病毒属的成员,是一种猪肠道致病性冠状病毒,可引起新生仔猪急性腹泻、呕吐和脱水。PDCoV最初于2012年在香港地区进行的一项分子监测研究中被发现,后来于2014年在美国俄亥俄州腹泻猪群中出现。随后,疫情在全球蔓延,目前,已在韩国、中国内地、泰国、越南和老挝等多国的仔猪粪便样本中检测到该病毒。

抗猪肠道冠状病毒生物活性化合物的研究

在生猪养殖中,各种肠道疾病频繁发生,严重影响了生猪生产性能,给养猪业带来了巨大的经济损失。猪肠道冠状病毒是引起猪腹泻的常见病原体,传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒均属于冠状病毒科α冠状病毒属。传染性胃肠炎病毒最早于1946年在美国被发现,尽管该病毒在养猪场的发病率不高,但新生仔猪感染后的死亡率几乎达到100%。

天津地区新型冠状病毒肺炎患者临床特征分析

目的探讨天津地区新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者的流行病学特征、临床及影像学特点。方法回顾性分析2020年1月21日—3月15日天津市海河医院收治的135例有完整病历资料的COVID-19患者的人口学、流行病学、临床资料、实验室指标及影像学特征。根据病情分为轻症(轻型+普通型)组(n=74)和重症(重型+危重型)组(n=61),比较2组临床表现、流行病学特征、实验室指标改变及影像学特点。结果135例COVID-19患者中合并基础疾病70例(51.9%),重症组合并心律失常者较多,发热、乏力、胸闷、厌食的发生率较高(P<0.05)。聚集性感染为主,共26起,涉及74例(54.8%),通过1次核酸检测确诊112例(83.0%)。135例中发病时有症状者126例(93.3%),核酸转阴平均14(10,20)d;无症状9例(6.7%),其核酸转阴平均7.0(5.5,13.0)d。外周血细胞主要为淋巴细胞下降40例(29.6%),C反应蛋白升高65例(48.1%)、白细胞介素6升高57例(42.2%),D-二聚体升高62例(45.9%),纤维蛋白原升高33例(24.4%),乳酸脱氢酶升高36例(26.7%),肌红蛋白升高9例(6.7%)。胸部CT示127例(94.1%)有异常表现,病变以胸膜下区分布为主122例(96.1%),其中磨玻璃密度影为主要表现106例(83.5%),重症组双肺受累、且3个肺叶以上分布、磨玻璃影和实变影更多见(均P<0.05),大部分患者经治疗可吸收,或遗留少许纤维条索。最终好转出院133例(98.5%),死亡2例(1.5%)。结论天津地区COVID-19感染以家族聚集性为主,多数合并基础疾病,淋巴细胞计数降低较为明显,总体预后良好。早期胸部CT检查可以弥补胸部X线检查的局限性,尽早行胸部CT检查及多次呼吸道标本的核酸检测有利于早期诊断,减少漏诊。

新型冠状病毒肺炎患者继发感染的危险因素分析

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者继发细菌感染的危险因素。方法回顾性分析天津市海河医院收治的136例COVID-19患者的临床资料,根据临床诊断结果分为继发细菌性肺炎(继发感染组,44例)和非继发感染组(92例)。比较2组患者临床特征、治疗、疾病转归等差异,Logistic回归分析患者继发感染的危险因素。结果继发感染组患者年龄、合并基础疾病比例高于非继发感染组(P<0.01),入院的氧合指数(OI)<400 mmHg、高热(体温>39℃)、重症、合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、低蛋白血症、心功能不全比例也均高于非继发感染组,接受机械通气治疗、有创操作、激素治疗比例及住院时间均高于非继发感染组(P<0.05)。Logistics回归分析显示,合并基础疾病(OR=4.613,95%CI:1.756~12.118)、激素治疗(OR=2.403,95%CI:1.012~6.422)、入院OI<400 mmHg(OR=6.534,95%CI:2.064~20.691)、低蛋白血症(OR=12.949,95%CI:3.284~51.067)是继发细菌感染的独立危险因素。结论COVID-19继发感染与患者入院氧合指数低于400 mmHg、低蛋白血症、激素治疗、基础疾病关系密切,临床尽早干预可预防患者继发感染,有利于改善预后。

浅谈天津地区新型冠状病毒肺炎救治体会

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种新型传染性疾病,尽管我国在临床诊治和防控上已取得了很大进步,但COVID-19具有独特的临床症状和影像学表现,其病毒亦具有特有的生物学特征,临床救治仍面临许多挑战,需要医学专家们在救治工作中不断认知和积累经验,从而进一步规范临床诊治方案。本文就天津市收治的136例确诊病例的总体救治情况及重症病例的早期诊断和预警、抗感染策略、危重患者管理等方面进行总结,以更好地指导临床实践。

福州地区儿童急性呼吸道感染与人类冠状病毒NL63

目的探讨福州地区小儿急性呼吸道感染是否与人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)相关。方法收集211份急性呼吸道感染(ARTI)患儿鼻咽分泌物,RT-PCR法对HCoV-NL631b基因进行筛查,阳性者再对HCoV-NL631a基因进行扩增并与GenBank中相关序列进行比较。结果HCoV-NL631b基因阳性标本3份(1.4%),用HCoV-NL631a基因扩增也得到阳性结果,PCR产物测序后与基因库中多株HCoV-NL63Ⅰa基因比较,同源性98%～99%。结论福州地区部分儿童急性呼吸道感染与HCoV-NL63有关。

天津地区新型冠状病毒肺炎患者特异性IgM和IgG动态变化研究

目的动态检测与评估重症与非重症新冠病毒肺炎(COVID-19)患者血清特异性IgM和IgG水平及其变化规律。方法收集天津地区2020年1月21日—3月15日确诊的30例新冠病毒肺炎患者血清,重症组20例,非重症组10例,动态检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性IgM和IgG抗体,并进行纵向分析。结果患者发病0~6 d,IgM和IgG阳性率分别为42.86%和28.57%,随着病程的进展,2种抗体的阳性率逐步增高,在大约5周后阳性率开始下降。重症组与非重症组患者在发病后约28 d内IgM、IgG水平逐步升高,28 d后开始下降,重症组患者IgM、IgG水平下降明显。重症组患者在发病后28~33 d IgG水平较非重症组高,差异有统计学意义(P<0.05)。重症组恢复期IgG水平较非重症组高(P<0.05)。结论COVID-19患者特异性IgM和IgG抗体水平随病程进展先升高后降。重症较非重症组患者特异性IgG抗体水平高。高水平的IgG可能是病情危重的预警指标。

SARS患者SARS冠状病毒RNA的动态检出特点及其意义

目的 观察SARS患者各种临床标本的带毒状况 ,分析SARS冠状病毒 (SARS CoV)在患者体内的动态变化及其临床意义。方法 设计针对SARS CoVP区和N区的 2套引物 ,应用巢式RT PCR对 84例SARS患者的血、尿、痰、粪便、咽拭子等 4 94份不同发病时间收集的标本进行病毒定性检测 ,并将PCR产物直接进行DNA序列分析。结果 两套引物均能较好地扩增出部分标本SARS CoV基因的特异性片段。在所有标本中痰液阳性检出率最高 ,联合检测多种标本或同时应用两套引物进行PCR扩增可明显提高标本阳性检出率。跟踪观察发现 ,SARS患者发病第 2周时PCR阳性检出率最高 ,第 3～ 4周次之 ,但各种标本阳性检出率的动态变化不尽相同。结论 应用巢式RT PCR进行SARS早期诊断和检测是一种可行的方法 ,针对SARS CoV基因组不同区域设计多对引物 ,联合检测多种临床标本可明显提高阳性检出率 ;研究SARS

SARS冠状病毒S1基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的:为获得抗SARS的转基因植物疫苗,进行了SARS S1基因的克隆,植物表达载体构建的研究。方法:根据SARS S蛋白受体结合结构域318-510氨基酸区域,设计合成长579 bp的序列片断(S1基因)。并以之为模板,进行PCR扩增,扩增产物被克隆至pGEM-Teasy载体进行序列测定。然后将S1基因插入植物表达载体pCAMB IA2301的35S启动子和NOS终止子之间,构建植物表达载体pCS1。将重组体转化大肠杆菌E.coliXL1,并对重组体进行了鉴定。结果:酶切鉴定和序列分析显示,克隆的目的基因与设计的片断序列一致;双酶切表明,植物表达载体的构建完全正确。结论:成功地克隆了S1基因和构建了含有S1基因的植物表达载体,为进一步获得抗SARS的转基因植物疫苗打下了基础。

石家庄地区新型冠状病毒肺炎患者的临床特征及影像学分析

目的分析石家庄地区新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者的临床特征及影像学特点。方法以2020年1月21日—2月10日石家庄市第五医院收治的21例COVID-19患者为研究对象,回顾性分析患者的人口学特征、临床资料、实验室指标及肺部影像学特征。根据年龄分为2组:<45岁组(n=13),≥45岁组(n=8),比较2组上述指标的差异。结果21例COVID-19患者中男14例,女7例;有7组家庭聚集性发病(共19例)。临床体征:发热15例(71.4%),咳嗽9例(42.9%),无任何临床症状5例(23.8%)。实验室检查:T淋巴细胞亚群CD3+计数降低8例(38.1%),CD4^+计数降低12例(57.1%),CD8^+计数降低6例(28.6%),白细胞计数降低2例(9.5%),中性粒细胞(N)计数降低2例(9.5%),淋巴细胞(L)计数降低5例(23.8%),C反应蛋白(CPR)升高10例(47.6%)。年龄≥45岁组及<45岁组患者CD3^+计数、CD4^+计数、CD8^+计数、白细胞计数、N及L计数及其降低比例、CRP水平及CRP升高比例比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。21例患者中,3例胸部CT检查未见异常;入院前首次影像学检查为胸部X线者11例,胸部CT者10例,其中胸部X线检查假阴性6例(漏诊率54.5%),而胸部CT检查均呈阳性。结论石家庄地区COVID-19感染以家族聚集性为主,T淋巴细胞亚群降低较为明显,早期胸部X线检查极易漏诊。

一例犬冠状病毒病的诊治与体会

犬冠状病毒(Canine coronavirus, CCV)是冠状病毒的1个种,属于套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronaviurs),冠状病毒Ⅰ群[1]。CCV已确定有2个基因型,即CCV-Ⅰ和CCV-Ⅱ。犬冠状病毒病是由CCV感染犬引起的一种高度接触性传染病,以急性出血性胃肠炎为主要症状,具有很高的病死率。

鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1内保守序列LLRKxGxKG的功能研究

目的研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能。方法扩增并构建MHVNSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒。用所构建的真核表达质粒转染L929细胞,经新城疫病毒(NDV)刺激诱导后,采用ELISA法检测IFN-β的表达水平,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β表达的影响。通过与含CAT和Luc报告基因的重组质粒进行共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β启动子活性和干扰素刺激应答元件(ISRE)活性的影响。通过与三种报告基因(pRLuc-CMV、pGL3-basic、pGL3-control)共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对共转染基因表达的影响。结果MHVNSP1对真核细胞产生干扰素有一定的影响,并可显著抑制IFN-β启动子或ISRE应答元件的活性,且该抑制作用不受LLRKxGxKG序列缺失的影响。同时,MHVNSP1还可强烈抑制多种共转染报告基因的表达。该抑制作用在LLRKxGxKG序列缺失后显著降低。结论MHVNSP1对Ⅰ型干扰素信号通路有特异的抑制作用。LLRKxGxKG序列是MHVNSP1的一个重要功能域,在抑制共转染基因表达过程中发挥着重要作用。

新型冠状病毒肺炎合并颞叶癫痫一例报告

肺是新型冠状病毒肺炎主要受累器官。有文献报道中枢神经系统也可受累。本文报告1例天津市海河医院收治的无癫痫既往史但在病程中出现颞叶癫痫发作的新型冠状病毒肺炎患者的诊断与治疗过程,并对可能原因进行分析,以供同行参考。

区别认识2019新型冠状病毒与水生动物病毒

1什么是2019新型冠状病毒?2019年12月以来发生的新型冠状病毒感染的肺炎疫情牵动亿万人的心。先前国家卫生健康委员会将该肺炎暂命名为"新型冠状病毒肺炎"(Novel coronavirus pneumonia,NCP),简称"新冠肺炎"。近日,世界卫生组织将该疾病称为COVID-19。现已查明,引发本轮疫情的病原为一种新型冠状病毒,被国际病毒分类委员会(ICTV)正式命名为"严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)"。已有研究发现其传播途径主要为飞沫传播、气溶胶传播和接触传播,不存在垂直传播。

冠状病毒核衣壳蛋白细胞核定位特征的研究进展

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、