雏鸭病毒性肝炎病毒山东株的分离鉴定

自山东地区疑似雏鸭病毒性肝炎的发病或病死肉雏鸭的肝脏中分离到3株病毒,经病毒分离、血清中和试验、单抗Dot-ELISA鉴定、氯仿敏感试验以及动物回归试验,确诊该地区雏鸭所患为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。高免卵黄抗体的被动保护试验结果表明,高免卵黄抗体可有效控制Ⅰ型雏鸭病毒性肝炎的发生。

家蚕核型多角体病毒山东株p35基因的克隆及序列分析

根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条1080bp的片段。测序结果表明,该片段含有p35基因,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,分子量为34.91kDa,pI=6.4。序列分析表明,BmNPV山东株的p35基因与T3株存在差异。

Ⅰ群禽腺病毒山东株的分离鉴定及hexon基因的克隆与分析

从山东省自然发生疑似鸡包涵体肝炎的商品肉鸡群中分离到4株病毒。这些毒株的复制可被5-溴尿嘧啶-2-脱氧核苷抑制，表明毒株的核酸类型为DNA；对乙醚和氯仿有抵抗力；耐酸不耐碱；对热敏感。根据已发表的I群禽腺病毒hexon基因的保守区域设计合成了2E引物。用这2对引物对4株病毒的核酸模板进行PCR扩增，结果均扩增出与设计片段大小一致的片段。测序分析表明，4株分离株为I群禽腺病毒。用本实验室自制的I群禽腺病毒12个血清型参考毒株的抗血清进行双向琼脂扩散试验，证明4株病毒中1株为血清2型，其余3株为血清8型。

黄瓜花叶病毒山东株(CMV-SD)RNA2全长cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列，在此基础上，利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３，并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２Ｆ。通过对ｐＣ２５和ｐＣ２３进行序列测定，得到了ＲＮＡ２的全序列。序列分析结果表明ＣＭＶＳＤＲＮＡ２由３０４８ｎｔ组成，其中存在２个部分重叠的阅读框ＯＲＦ１（７９～２６５２ｎｔ）和ＯＲＦ２（２４１４～２７４６ｎｔ），分别编码８５８ａａ的２ａ蛋白和１１１ａａ的２ｂ蛋白，并在２ａ蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系ＲＮＡ２核苷酸序列与分属ＣＭＶＩ亚组的Ｆｎｙ株系和ＩＩ亚组的Ｑ株系ＲＮＡ２的核苷酸序列同源性分别为９１７％和７５６％；２ａ蛋白的氨基酸序列同源性分别为９３８％和６７７％，２ｂ蛋白的氨基酸序列同源性分别为８３０％和５１３％。同源性比较的结果表明ＳＤ株系属于ＣＭＶＩ亚组。

A型副鸡嗜血杆菌(山东株)的分离与鉴定

2011年11月,山东某肉鸡场发生以肉鸡眼睑及眶下窦周围明显肿胀为主要特征的传染性疾病。从采集的发病鸡眶下窦中分离到1株细菌,根据发病鸡群的临床症状、细菌的分离培养、形态观察、过氧化氢酶试验、革兰氏染色、动物回归试验、免疫攻毒试验和PCR等方法初步鉴定为副鸡嗜血杆菌(Hpg)。此外通过分离菌株的水平传播试验结果表明,造成该鸡场Hpg的水平传播和鸡传染性鼻炎的反复发作与饲养密度有很大的关系。最后将分离菌株送匈牙利诗华研发中心进行分型鉴定,确定为A型副鸡嗜血杆菌。根据分离地点将分离菌株命名为A型副鸡嗜血杆菌(山东株)。另外通过与GenBank已发表的Hpg基因序列进行同源性比对分析,结果显示,该基因序列与参考株的基因核苷酸序列同源性达99.0%。

传染性支气管炎病毒山东及北京分离株血清型及RFLP基因分型的比较研究

分离并鉴定出山东省不同地区的 IBV分离株 A、B、C、D和北京分离株 F,利用中和试验分别对各分离株及标准株M4 1 、T等进行血清分型。设计一对引物 ,分别对各毒株的 S1 基因进行 RT- PCR扩增 ,扩增片段长约 170 0 bp,利用其 PCR产物进行 Hae 酶切 ,根据酶切图谱 ,进行基因分型。结果表明 :A、C、D和 M4 1 酶切图谱相同 ,属 Mass基因型 ,分别为 90 0、4 0 0和30 0 bp左右的片段 ;北京 F株有 4条酶切条带 ,与 4 /91基因型不同 ,分别为 10 0 0、30 0、2 0 0和小于 10 0 bp左右的片段 ;B株有4条酶切条带 ,理论推断与 T株相似 ,分别为 70 0、5 0 0、30 0和 180 bp左右的片段 ,可能为同一基因型。血清学分型结果与基因分型结果不符。

山东省PRRS血清学调查及PRRSV分离株ORF3-7基因的克隆及序列分析

应用荧光抗体技术对山东省猪场PRRS的流行情况进行了血清学调查并分离到一株PRRSV。用 5对引物分别扩增了PRRSV山东分离株ORF3_ORF7,将其克隆入PMDl8_TVector并进行了序列测定。结果表明 ,山东分离株与美洲疫苗株ATCCVR_2 332 0RF3_ORF7各读码框核苷酸同源性分别为 98%、99%、99%、10 0 % ,氨基酸同源性分别为97%、98%、98%、98%、10 0 %。

H9N2亚型猪流感病毒山东分离株的分离鉴定及其HA、NP、NS基因序列分析

从山东地区疑似流感发病猪分离到 10株流感病毒 ,经国家流感中心鉴定均为 A型流感病毒 H9N2亚型。将其中 1株 Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3(H9N2 )的血凝素基因 (HA)、核蛋白基因 (NP)和非结构蛋白基因 (NS)进行克隆与测序 ,与Gen Bank收录的其他猪流感和禽流感 H9N2亚型的相关基因进行比较 ,推测 Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3(H9N2 )可能源于禽流感病毒 H9N2亚型和 H5 N1亚型的重组病毒 ;Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3的 HA氨基酸裂解位点与其他 H9N2亚型不同 ,Sw/ SD/1/ 2 0 0 3的 HA氨基酸裂解位点是 R- S- L- R- G,而其他猪流感和禽流感 H9N2亚型都是 R- S- S- R- G。

鸡新城疫山东强毒株的分离鉴定及致病性研究

从山东省不同地区的发病鸡群中分离了 6株病毒 ,经HA、HI试验、病毒回归试验和血清中和接种鸡胚试验确定所分离的毒株为新城疫病毒。分别对 6个毒株的MDT、ICPI和IVPI进行了测定 ,结果表明这些毒株为鸡新城疫强毒 ,但各个毒株的致病性有所差异。

牛流行热病毒山东流行株G基因的克隆及序列分析

为了解牛流行热病毒(BEFV)山东流行株G基因的特点,从临床病料中获得山东流行株牛流行热病毒的G基因,并对其进行序列测定和分析。参考GenBank中牛流行热病毒的G基因序列,设计并合成一对特异性扩增G基因引物进行PCR,扩增目的片段,并克隆于pEASY-T3载体上,筛选阳性重组质粒进行序列测定,用MEGA软件、NJ法构建进化树。结果显示,该流行毒株G基因与GenBank中其他BEFV株G基因的核苷酸推导氨基酸的同源性均大于96%;遗传进化关系分析结果表明,BEFV山东流行株与中国台湾流行株具有较高同源性和较近的亲缘关系。

传染性法氏囊病超强毒山东分离株SD0210的致弱研究

本研究将鸡传染性法氏囊病超强毒(vvIBDV)SD0210株经SPF鸡胚培育及鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养,获得了对CEF适应的细胞毒,并对细胞毒进行了致病性、回归动物的稳定性试验及免疫原性方面的试验,结果表明已成功获得了具有髙免疫原性且安全无毒力返强的致弱株,并初步揭示了vvIBDV在适应细胞、从超强毒力向弱毒力转化过程中,VP2高变区氨基酸序列的变化情况。SD0210株培养至18代开始适应细胞,出现细胞病变。21代细胞毒已对SPF鸡失去了致病性,在鸡体内连续传代15代毒力不返强,而且具有较高的免疫原性。

鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定

鸡新城疫病毒 (NDV)山东分离株在鸡胚增殖后纯化 ,利用特异性引物 ,经RT -PCR技术扩增出了F基因重要功能片段 ,将该基因克隆入pGEM -T载体后 ,对其进行酶切分析和序列测定 ,结果表明 ,山东分离株为强毒株。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比较 ,经遗传基因进化树分析 。

新城疫病毒山东流行株F基因的序列测定和分析

用 SPF鸡胚从发生新城疫鸡群分离到一株病毒 ,进行了生物学特性的研究 ,结果表明 ,最小致死量鸡胚平均死亡时间 (MDT)为 5 0 ,1日龄鸡脑内接种致病指数 (ICPI)为 1.82 ,6周龄鸡静脉接种致病指数 (IVPI)为 2 .6 2 ,属强毒力毒株。以异硫氰酸胍法提取病毒基因组 RNA,RT- PCR扩增其融合蛋白 F基因重要功能区片段 ,经回收后 ,克隆到 p GEM- T载体上进行酶切鉴定与核苷酸序列测定 ,并与多株已报道的 NDV国内外参考株相应片段进行序列比较 ,F基因的同源性在 84% - 91%之间 ,氨基酸同源性为 82 % - 93% ,经基因进化树分析 ,证实流行株为基因

鸡传染性支气管炎山东A株病毒的分离与鉴定

鸡传染性支气管炎(IB)是由IBV引起的一种急性高度接触性传染病,该病可发生于不同日龄的鸡群,以呼吸困难、产蛋下降以及肾病变等为主要危害特征,是继新城疫、马立克氏病、传染性法氏囊病后严重影响我国养禽业的又一重要疫病[1].其致病性,主要表现在幼鸡感染后引起不同程度的死亡,幼雏鸡感染可引起输卵管永久性的退化,丧失产蛋能力.产蛋鸡感染会发生产蛋下降,蛋品质降低;此外,还容易和其他病原体混合感染导致感染鸡群死亡率提高.

肾型IBV山东分离株S1高变区(HVR)的基因克隆与序列分析

根据Genbank上发表的IBV病毒的S1基因序列,用Oligo6.0设计了一对用于扩增HVR基因的引物,经RT-PCR扩增得到了预期大小的产物。将目的条带纯化回收后克隆到PMD18-T载体上,对插入的目的片段进行序列测定,并与已发表的IBVHVR基因序列进行比较,发现与ARK-1592-29株的血清型较近,其同源性为91%,从基因序列比较来看可初步把SF株定为ARK株的变异株。

山东省传染性支气管炎病毒分离株的电镜观察

从山东省分离到 4株病毒株 ,经病理剖检、鸡胚传代 ,血凝检测、动物回归、电镜和免疫电镜观察确证为传染性支气管炎病毒。将分离毒分别接种 SPF鸡胚 ,制备各自的阳性血情 ,经磷钨酸负染 ,电镜和免疫电镜观察。可见到典型的冠状病毒粒子 ,病毒的直径界于 60 - 2 0 0 mm之间 ,呈多形性 ,有囊膜 ,个别有纤突。病毒大量聚集 。

不同地理株柔嫩艾美耳球虫对地克珠利敏感性试验

进行了3个不同地理株的柔嫩艾美耳球虫(吉林株、山东株、黑龙江株)对地克珠利饮水剂的敏感性试验。分别给予试验组鸡1×105个孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,感染后饮水给予地克珠利药物治疗。结果表明,3株球虫的敏感性不同,其敏感顺序为:山东株>黑龙江株>吉林株。由此可见,柔嫩艾美耳球虫不同地理株间存在对地克珠利的敏感性差异。

浒苔多糖体外抗犬冠状病毒临床分离株的作用研究

利用A72细胞(犬纤维肉瘤细胞系)从山东某宠物医院临床上表现为急性胃肠炎症状的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,通过间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR进行鉴定,确定为犬冠状病毒,命名为CCoV-SW1。为探讨浒苔多糖(EPS)体外抗CCoV-SW1毒株的作用效果,以A72细胞为细胞模型,通过直接杀灭、抑制复制及阻断吸附3个方面进行研究。结果表明,EPS对A72细胞最大安全浓度为62.5mg/L;EPS对CCoV感染A72细胞抑制率与EPS质量浓度有一定量效关系;EPS对CCoV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,并且与EPS浓度具有量效关系;EPS抑制CCoV复制效果不明显,但仍有一定效果,当EPS浓度为62.5mg/L时,细胞存活率为37.2%。EPS在体外对CCoV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,为CCoV的预防和治疗提供依据。

HP-PRRSV原始株在抗体压下传代突变株抗原性及致病力变化研究

为了比较高致病性蓝耳病山东分离株SD0612原始株及其在抗体选择压下突变株在回归猪体后的抗体动态变化，试验中，将15头健康猪分为5组，分别为SD0612原毒感染组、

不同地域来源的家蚕微孢子虫DNA特异片段序列及同源性分析

利用碱裂解方法抽提到山东株系的家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)的基因组DNA ,通过PCR技术扩增得到了N .b的一段特异的DNA片段 ,经测序发现 ,该片段大小为 317bp。将其与日本株N .b和广东株N .b的序列比较得知 ,山东株N .b和广东株N .b ,山东株N .b和日本株N .b ,以及广东株N .b和日本株N .b之间的序列同源性分别为 94 .0 0 %、96 .2 1%、92 .11%。进一步聚类分析发现 ,山东株N .b和日本株N .