鸡源山夫登堡沙门菌分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

【目的】确定广东某肉鸡养殖场疑似沙门菌感染病例的病原及其药物敏感性,为制定有效的防控和净化措施及合理的用药方案提供科学依据。【方法】本研究对广东省某规模化鸡场若干份病鸡的肝脏和肠道样品进行沙门菌的分离培养、革兰染色、生化试验、invA特异性基因PCR鉴定、16S rRNA鉴定、血清学分型,采用K-B纸片法检测菌株对20种抗菌药物的敏感性,并通过PCR方法检测菌株的耐药基因和毒力基因。【结果】细菌分离培养可见无色透明、呈细小的露珠样菌落或光滑圆整、透明湿润、中心为黑色的菌落,疑似菌落革兰染色呈粉红色、散在分布、两端稍圆的短杆菌,无荚膜,无芽孢;分离菌生化试验呈产气、底层产酸、产硫化氢呈黑色且斜面产碱变红现象;对疑似菌落DNA进行PCR扩增,invA特异性基因扩增出大小约为285 bp的条带,16S rRNA基因扩增出大小约为1500 bp的条带,本研究共分离鉴定出8株山夫登堡沙门菌。药物敏感性试验结果显示,8株菌对头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、米诺环素、强力霉素、多黏菌素B均无耐药性,但对青霉素、头孢氨苄、万古霉素、红霉素、林可霉素、氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢曲松、头孢哌酮、链霉素、四环素的耐药率较高,介于87.5%~100%,且分离株均为多重耐药菌;有7株菌均检出qnrS和stcM耐药基因,有1株未检出任何耐药基因;毒力基因检测结果显示,毒力基因invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 1的检出率均为100%,sopB和ssaR基因检出率分别为50.0%和62.5%。【结论】本研究分离的鸡源山夫登堡沙门菌均具有多重耐药性,对头孢他啶、阿米卡星等7种药物敏感,invA、hilA、sipA、sipC、ssrA、stnP 16种毒力基因的携带率均为100%。本研究结果补充了鸡源沙门菌病的流行病学资料,为临床沙门菌的防控和净化提供了理论参考。

不典型山夫登堡沙门菌流行菌株的鉴定

目的对新出现的硫化氢(H2S)阴性山夫登堡沙门菌流行菌株进行鉴定。方法比较腹泻患者分离的山夫登堡沙门菌落、生化、耐药表型和沙门菌毒力岛1(SPI-1)的编码基因表型(hilA、invA),使用Riboprinter(进行核糖体指纹图谱分型,脉冲凝胶电泳(PFGE)选用XbaⅠ限制性内切酶,聚类软件选用BioNumerics软件。结果 2006年30株山夫登堡沙门菌腹泻菌株中,确认12株属于H2S和hilA、invA基因均阴性的表型不典型菌株;所有菌株除对四环素有较高耐药性(75.6%)外,对其他测试抗菌药物均较敏感;Riboprinter(核糖体分型图谱证实不典型与典型山夫登堡沙门菌在遗传学上属独立的克隆;PFGE分型将34株腹泻株分成16个带型,11株不典型菌株间存在90%的遗传学同源,优势带型为6型(6株)和4型(3株);13株典型菌株间有80%的遗传学同源,优势带型为17型(5株)、23型(5株)和11型(3株),不典型与典型菌株分别聚类成2个克隆族。结论生化、基因表型和遗传学特征不典型的山夫登堡沙门菌构成了2006年上海市山夫登堡的多点暴发病例,建议使用经过优化的常规和分子生物学方法以避免临床实验室对表型不典型沙门菌株的漏检。

上海市动物源食品中山夫登堡沙门菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

【目的】了解上海市动物源食品中山夫登堡沙门菌Salmonella Senftenberg的流行情况、耐药性和分子分型情况.【方法】于2008—2012年在上海分离鉴定得到15株动物食品源山夫登堡沙门菌,通过琼脂稀释法进行最小抑菌浓度测定,并应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型研究.【结果和结论】15株山夫登堡沙门菌有7株对磺胺异恶唑具有耐药性(46.7%),除1株对链霉素耐药外(6.67%),对其他抗生素均较为敏感.PFGE分型分为10个基因型.部分不同来源的基因型(X3,X4,X5)具有高度的相似性(88.2%),表明这些不同来源的菌株可能存在流行相关性.

一起山夫登堡沙门菌食物中毒的检测与溯源

目的查明一起食物中毒事件的病原,并对其进行溯源分析。方法对4份患者样本和8份食品留样进行病原菌的分离、培养和鉴定,对分离株进行药敏实验和脉冲场凝胶电泳分子分型。结果 4份患者样本和1份食品留样中检出山夫登堡沙门菌,5株分离菌株均对磺胺甲恶唑耐药,其PFGE图谱相似性系数为100.0%。结论本起食源性疾病暴发疫情是由进食被山夫登堡沙门菌污染的食品所致。

肠道山夫登堡沙门菌感染误诊达6年

患者女,56岁,医师。因反复粘液便达6年,于1990年10月入院,患者曾于1984年夏有不洁食物史,因吐、泻较轻未经特殊治疗。2周后,渐起粘液便3～6次/日,伴里急后重感。粪常规:粘液++～++++,白细胞2个～满视野/HP,红细胞0～2个/HP,先后作细菌培养20次均未见致病菌。纤维结肠镜、钡灌肠检查均未见异常。曾诊断为慢性结肠炎、溃疡性结肠炎、慢性菌痢、肠功能紊乱等。用过黄连素、复方苯乙哌啶、次碳酸铋及中药等治疗,均无显效。体检:慢性消瘦病容,心肺正常,腹平软,肝脾未触及,左下腹压痛,无反跳痛。粪常规:粘液++。

2021年新乡市一起山夫登堡沙门菌食物中毒分离株的病原特征分析

目的分析2021年新乡市一起山夫登堡沙门菌食物中毒分离株的病原特征。方法对食物中毒事件进行流行病学调查;对采集的11份样本进行致病菌分离鉴定;对分离出的10株沙门菌进行血清学分型、药敏试验、5种毒力岛(SPIs)特征基因片段(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB)检测及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型分析。结果10株沙门菌血清抗原式均为1,3,19;g,s,t,即山夫登堡沙门菌。10株沙门菌对头孢唑啉、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星的耐药率为100%,其中从患者粪便中分离出的2株对氨苄西林、四环素、多西环素、氯霉素、复方新诺明的耐药率为100%。PFGE图谱聚类分析显示,10株菌(2株病例株,5株食品株,3株环境株)之间条带无差异,高度同源。10株菌中5种毒力岛特征基因片段均检出。结论本起食物中毒事件致病因子为山夫登堡沙门菌,该菌携带5种毒力岛特征基因片段,2株病例株沙门菌具有多重耐药性,建议相关部门高度关注。

一起山夫登堡沙门菌引起的食源性疾病事件分析

目的对一起食源性疾病事件进行病原检测及溯源分析,为事件处置提供依据。方法依据有关食品安全国家检测标准,对患者肛拭子(5份)、酒店食品(21份)、酒店餐具涂抹物(2份)、酒店服务员以及厨师肛拭子(7份)等35份样本进行细菌分离。通过平板划线分离、生化反应、质谱鉴定及沙门菌血清学凝集实验进行致病菌种鉴定,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对沙门菌分离菌进行同源性分析。结果5份肛拭子、3份食品、3份酒店服务员及厨师肛拭子共11份样本检出山夫登堡沙门菌,且11株不同标本来源分离菌株PFGE分子分型相似度达100.0%。结论该起群体性发热、腹痛、腹泻事件是由山夫登堡沙门菌引起的食物中毒。应加强酒店餐饮行业及从业人员的食品安全风险意识教育和监管。

上海市山夫登堡沙门菌流行特征和分子分型研究

目的分析上海市2006—2007年山夫登堡沙门菌分离株的分子流行病学特征。方法追溯2002--2007年山夫登堡沙门菌食品分离株的来源；对2005--2007年从腹泻病例分离的山夫登堡沙门菌进行生化和hilA、invA基因表型鉴定、药敏试验、Riboprinter （RP）核糖体分型和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析。结果2006年山夫登堡沙门菌列上海市非伤寒沙门菌监测确认病例第3位，2002--2005年的食品分离株主要源自猪和牛肉制品。所有腹泻病例分离株除四环素（75．6％）外对其他抗生素均有较高敏感性。经RP和PFGE分子分型将硫化氢和hilA、invA基因全部有和无的两组菌株分别归属两类在遗传学上相对独立的克隆族。34株腹泻病例分离株分为16种PFGE带型，以同源程度较高的4型（4株）、5型（1株）、6型（6株）、7型（1株）共12株菌和11型（3株）、17型（5株）、23型（5株）共13株菌等优势带型聚类成2个克隆族。结论2006年上海市山夫登堡沙门菌感染病例是经过一定时间积累演变，由2个不同表型PFGE克隆族菌株构成较为少见的多点暴发。2007年病例大幅减少和未监测到同一时期食品污染源的结果表明，菌株存在遗传克隆的不稳定性和传播途径的复杂性。

不典型山夫登堡沙门菌腹泻株的分子溯源研究

上海市疾病预防控制中心（SCDC）于2006年始加入WHO全球非伤寒沙门菌的监测网络（GSS），通过临床腹泻病例的监测发现：2006年7-9月间，山夫登堡沙门菌血清型呈现过暴发的流行病学特征，其中一类罕见的H2S阴性山夫登堡沙门菌流行菌株占较大比例，为掌握山夫登堡沙门菌在本市的流行规律，本研究对2006--2007年GSS山夫登堡沙门菌腹泻菌株的耐药型谱、RP核糖体分型和脉冲凝胶电泳（PFGE）分子分型进行分析，了解不产硫化氢山夫登堡沙门菌的遗传学特征，为本市的非伤寒沙门菌监测和防治提供依据。

脉冲场凝胶电泳技术用于两起山夫登堡沙门菌疫情溯源

目的:用脉冲场凝胶电泳技术对北京市两起沙门菌暴发疫情进行病原菌菌株之间的相关性分析。方法:对两起食物中毒事件中分离到的菌株进行PFGE实验,将得到的图谱利用BioNumerics软件UPGMA方法进行聚类分析。结果:两起食物中毒事件中分离到的9株山夫登堡沙门菌经过XbaI酶切后,得到同一种带型。结论:两起食物中毒均为同一带型山夫登堡沙门菌引起,提示可能有共同的传染源。

一起由山夫登堡沙门菌引起食源性聚集性病例的耐药性与病原学溯源分析

目的明确一起食源性聚集性病例的病原菌,并确认病原菌分离株的同源性。方法依据GB 4789和WS 271-2007进行病原菌分离鉴定,对分离鉴定的山夫登堡沙门菌采用脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis, PFGE)技术进行分子分型。结果 1份食物样品和2份肛拭子样品共检出3株山夫登堡沙门菌。3株分离菌均对头孢唑啉耐药,对四环素、红霉素和萘啶酸中介敏感,对其余11种抗生素敏感。3株分离菌经PFGE得到同一种带型,PFGE图谱相似度为100%。结论根据临床与流行病学调查资料,结合实验室检测结果,确认此次食源性聚集性病例是由同一克隆山夫登堡沙门菌污染导致。PFGE在食源性致病菌的追踪溯源中发挥着重要作用。

一类罕见H_2S阴性山夫登堡沙门菌腹泻株的研究

目的:研究一类罕见H2S阴性山夫登堡沙门菌腹泻菌株遗传克隆特征。方法:收集、分析本地区参加全球沙门菌监测(GSS)腹泻病例中分离的山夫登堡沙门菌生化、编码SPI-1毒力岛基因(hilA、invA)和耐药特征;应用Riboprinter(RP)DNA指纹图谱系统比较表型典型与不典型菌株的核糖体型;通过PluseNet China数据库中同型菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱聚类比较分子型谱。结果:2006年卢湾区GSS监测病例分离4株山夫登堡沙门菌中有2株属于H2S阴性和SPI-1毒力岛缺失的表型变异菌株。RP分型证实发生变异的山夫登堡沙门菌与典型菌株间分属2个不同的克隆。PluseNet China数据库将包括卢湾区4株山夫登堡沙门菌在内共36株山夫登堡腹泻株共分18种PFGE带型。卢湾区的2株表型变异株分属4型和5型,2株典型菌株分属11型和23型。聚类分析显示表型变异株的克隆在遗传相似度上高于典型株。结论:分子溯源证实SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌变异菌株与典型菌株同样具有引发局部暴发的致病性,2006年卢湾区分离的H2S阴性山夫登堡沙门菌变种腹泻株与2002年深圳市的1例食物中毒案例分离的2株SPI-1毒力岛缺失株存在同源性。

一类罕见硫化氢阴性山夫登堡沙门菌腹泻株的分子溯源

[目的]研究一类罕见硫化氢阴性山夫登堡沙门菌腹泻菌株遗传克隆特征。[方法]收集、分析本地区参加全球沙门菌监测(GSS)腹泻病例中分离的山夫登堡沙门菌生化、编码SPI-1毒力岛基因(hilA、invA)和耐药特征;应用Riboprinter(r)(RP)DNA指纹图谱系统比较表型典型与不典型菌株的核糖体分型;通过Pluse Net China数据库中同型菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱聚类比较分子型谱。[结果]2006年长宁区GSS监测病例分离出19株山夫登堡沙门菌,其中10株属于硫化氢阴性和SPI-1毒力岛缺失的表型变异菌株。RP分型证实发生变异的山夫登堡沙门菌与典型菌株间分属2个不同的克隆。Pluse Net China数据库将包括长宁区19株山夫登堡沙门菌在内的36株山夫登堡腹泻株共分18种PFGE带型。长宁区的表型变异株优势型分属4型(2株)和6型(6株),典型菌株的优势型分属11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。聚类分析显示,表型变异株的克隆在遗传相似度上高于典型株。[结论]分子溯源证实,SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌变异菌株与典型菌株同样具有引发局部爆发的致病性。2006年长宁区分离的硫化氢阴性山夫登堡沙门菌变种腹泻株与2002年深圳市的1例食物中毒案例分离的2株SPI-1毒力岛缺失株存在同源性。

89株山夫登堡沙门菌脉冲场凝胶电泳分子分型及耐药性分析研究

目的分析2005-2011年杭州市下城区89株山夫登堡沙门菌的脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)分子型别和耐药性,建立杭州市沙门菌指纹图谱数据库。方法 89株山夫登堡沙门菌用XbaⅠ酶切、PFGE获得电泳图谱,使用BioNumerisc统计软件聚类分析比较同源性。采用K-B法测定菌株对抗生素敏感性。结果以相似度≥85%为判定标准,89株山夫登堡沙门菌可分为10个PFGE带型,其中68株集中在一个PFGE基因型内。不同年份基因型无明显规律性。89株山夫登堡沙门菌对所选11种抗生素敏感性≥85.19%。结论杭州市下城区2005-2011年分离的89株山夫登堡沙门菌有明显的克隆株优势带型存在,对抗生素敏感性较高。