茶黄素-3,3’-双没食子酸酯对α-葡萄糖苷酶的抑制机制

利用酶抑制动力学、多光谱、分子对接分析了茶黄素-3,3’-双没食子酸酯(theaflavin-3,3’-digallate,TFDG)对α-葡萄糖苷酶的抑制机制,结果表明抑制是可逆的,并呈现竞争型和非竞争型混合抑制;TFDG与α-葡萄糖苷酶形成复合物猝灭其固有荧光;热力学参数表明结合是自发吸热、熵增的,且疏水相互作用是主要驱动力;结合增强了酪氨酸残基附近的疏水性和色氨酸残基周围的极性,降低了α-螺旋、β-折叠和β-转折的含量。分子对接显示TFDG结合在酶活性位点附近,并与附近氨基酸残基Phe450、Trp406之间存在两种疏水相互作用,且与Asp203、Phe450、Gln603形成3个氢键。本研究揭示了TFDG抑制α-葡萄糖苷酶的分子机理,为治疗糖尿病提供一种可行的候选功能因子。

HPLC测定仙鹤草中山奈酚-3-O-(6-p-香豆酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷含量

目的：建立高效液相色谱法测定仙鹤草药材中山奈酚-3-O-（6-P-香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷含量的方法。方法：采用依利特ODS C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0．05％磷酸（30：70），流速为1．0mL min-1，柱温为30℃；检测波长315nm。结果：山奈酚-3-O-（6-P-香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷的线性范围为1．272—8．904μg·mL-1（r=0．9999）；加样回收率为100．5％，RSD为1．94％。结论：该方法简便易行、准确、重复性好，为仙鹤草药材的质量控制提供了依据。

高效液相色谱法测定肿节风药材中异秦皮啶与山柰酚-3-O-葡萄糖醛酸苷的含量

目的建立肿节风药材中山柰酚-3O-葡萄糖醛酸苷与异秦皮啶的含量测定方法。方法色谱柱为Kromasil ODS-1（4．6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0．1％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为344nm，柱温为25℃。结果山柰酚-3-O-葡萄糖醛酸苷在0．2006～4．012μg线性关系良好，相关系数r=0．9999．平均回收率为100．1％，RSD=1．8％；异秦皮啶在0．4352～8．704μg线性关系良好，相关系数r=0．9999．平均回收率为99．8％，RSD=1．5％。结论所用方法简便、准确，重复性好，在同一高效液相色谱条件下可同时测定山柰酚-3-O-葡萄糖醛酸苷和异秦皮啶的含量，提供了更好的控制肿节风药材质量的方法。

毛菊苣中山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品的制备研究

目的建立维药毛菊苣中山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品的制备分离方法。方法取毛菊苣药材醇提浸膏的乙酸乙酯萃取部位上样于硅胶柱色谱分离,收集黄酮苷富集流份,继续用凝胶柱色谱及制备HPLC进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱方法鉴定化合物结构,经TLC、HPLC-UV及MS联用等技术进行质量分数检测。结果制备分离得到2个化合物分别鉴定为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),质量分数均大于98%,其中2为首次从该属植物中分离得到。结论该法制备得到的2个黄酮苷类对照品符合中药化学对照品的相关技术要求,为药材毛菊苣和含毛菊苣的成方制剂的质量控制及药效物质基础研究提供化学对照品。

双齿围沙蚕β-1,3-葡萄糖苷酶分离纯化及其酶学性质

从双齿围沙蚕中提取、分离纯化β-1,3-葡萄糖苷酶,并研究其酶学性质。通过80%饱和度(NH4)2SO4沉淀从双齿围沙蚕中得到粗β-1,3-葡萄糖苷酶,粗酶依次经DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化。酶纯化倍数为35.74,回收率为39.49%。SDS-PAGE检测表明其分子量为28.7 k Da。该酶最适温度为50℃,最适p H为7,Km为8.2×10-4mol/L,Vmax为3.2×10-4μmol/h。金属离子K+、Mg^(2+)、Fe^(2+)、Ba^(2+)、Ca^(2+)对β-1,3-葡萄糖苷酶酶活力影响较小,Al^(3+)、Cu^(2+)、Zn^(2+)、Ag^+对β-1,3-葡萄糖苷酶酶活力抑制较大,其中Zn^(2+)抑制作用最强。双齿围沙蚕可作为β-1,3-葡萄糖苷酶的潜在来源。

天然黄酮山奈酚(Kaempferol)与Alpha-葡萄糖苷酶的相互作用机制分析

α-葡萄糖苷酶是治疗2型糖尿病的重要药物靶点之一,而基于天然产物寻找先导化合物是药物开发的重要途径。研究通过酶动力学实验和分子对接初步探讨了天然黄酮山奈酚与α-葡萄糖苷酶之间的相互作用规律。结果表明,山奈酚非竞争性抑制α-葡萄糖苷酶,并呈现浓度依赖性(IC 50=91.11±1.12μM);山奈酚可逆性结合于α-葡萄糖苷酶而呈现抑制效应。山奈酚能够显著性淬灭α-葡萄糖苷酶的内置荧光,诱使酶二级结构构象发生改变。此外,分子对接分析表明,抑制剂山奈酚可结合于α-葡萄糖苷酶活性中心,氢键和疏水性相互作用对于配体α-葡萄糖苷酶复合物构象稳定性的维系有着重要作用。

HPLC法测定复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3α-O-β-d-葡萄糖苷的含量

目的建立复方鲜竹沥液中南烛木树脂酚-3α-O-β-d-葡萄糖苷含量的测定方法。方法采用HPLC法,以资生堂capcell pak C_(18)(250mm×4.6mm×5μm)为色谱柱,柱温30℃,乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为220nm。结果南烛木树脂酚-3α-O-β-d-葡萄糖苷在0.2264~11.32μg·mL^(-1)浓度范围内线性良好(R^(2)=0.9999),加标回收率为97.06%,RSD(n=9)为1.08%,且方法的精密度、稳定性以及重复性的RSD均小于3.0%。结论该方法快速、简便、准确,可为复方鲜竹沥液的质量控制和评价提供依据。

[Bmim]Cl/FeCl_3离子液体催化α-生育酚与β-D-五乙酰葡萄糖的糖基化反应

以[Bmim]Cl/FeCl3(三氯化铁/氯化丁基甲基咪唑)离子液体作为反应介质和催化剂,考察了离子液体的酸度、反应温度及反应时间对α-生育酚与β-D-五乙酰吡喃型葡萄糖糖基化反应的影响.结果表明,离子液体的催化活性与其酸强度密切相关,离子液体的酸性越强,其对此糖基化反应催化活性越高.在FeCl3与[Bmim]Cl物质的量比为2的[Bmim]Cl/FeCl3离子液中,α-生育酚与β-D-五乙酰吡喃型葡萄糖在45℃下反应3h,可以得到较高的转化率,α-生育酚的转化率最高可达70.2%.同有机溶剂作为反应介质相比,反应条件温和,反应时间短,室温离子液体具有更好的催化活性,所得产物与离子液体不溶,便于分离,催化体系可循环使用,且对环境友好.

超高压处理对天竺葵-3-葡萄糖苷辅色反应的影响

通过测定不同超高压处理条件下儿茶素、芥子酸和阿魏酸与天竺葵-3-葡萄糖苷辅色反应后溶液的吸收光谱及强度,研究不同压力(0.1、50、300、500 MPa)、pH值(1.5、3.6)、温度(20、60℃)、反应时间(5、30min)和天竺葵与多酚浓度比(1∶1、1∶10)对辅色效果的影响规律。结果表明,天竺葵-多酚复合物在pH=1.5溶液中吸光度高于pH=3.6时,儿茶素辅色效果最好,其次为芥子酸和阿魏酸。多因素方差分析结果表明:pH值、压力、时间对儿茶素辅色作用影响显著;温度、浓度对儿茶素辅色反应影响不显著;pH值对芥子酸和阿魏酸辅色反应影响显著;温度、压力、时间和天竺葵与多酚浓度比对辅色作用影响不显著。

不同产地不同采收时间枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷含量的比较

目的:比较不同产地、不同采收期枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法:采收相同产地下不同采收期和相同采收期下不同产地的枫香树叶,称重、晒干,并用HPLC法测定异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。结果:24批枫香树叶,同一采收期中江西余江、江西鹰潭、江西弋阳三个产地的枫香树叶异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量均较高;同一产地的8个采收期中,以5,6,7月份采收的枫香树叶异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量较高,12月份采收的异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量最低。结论:不同产地、不同采收期枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量存在明显差异,应注意生长环境和采收季节对枫香树叶药材质量的影响。

RP-HPLC法测定中药木贼中黄酮醇苷的含量

目的 建立以高效液相法测定中药木贼中一个黄酮醇苷山奈酚-3-双葡萄糖苷的含量方法。方法 色谱柱为Calesil ODS-100（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-水（45：55），流速为1．0ml／min，检测波长254nm，柱温30℃，进样量10μ1。结果 山奈酚-3，7-双葡萄糖苷的检测浓度在0．003 12-0．104mg／ml范围内与峰积分面积呈良好线性关系（r=0．9999），平均回收率为100．2％，RSD=1．74％（n=9）。3个不同产地批号的样品中山奈酚-3-双葡萄糖苷的含量均在0．30％以上。结论 该方法简便、快捷、重复性好，可作为木贼药材的质量控制的方法。

矢车菊素-3,5-O-双葡萄糖苷改善五氟尿嘧啶诱导小鼠化疗性肠黏膜炎的效果初探

目的探讨矢车菊素-3,5-O-双葡萄糖苷(cyanidin-3,5-O-diglucoside,C35G)对改善五氟尿嘧啶(5-FU,30mg/kg)诱导化疗性小鼠肠黏膜炎作用机制。方法将BALB/c雄性小鼠随机分成正常组、模型组、C35G组。以连续4 d腹腔注射5-FU诱导肠黏膜损伤小鼠模型,C35G低高剂量组连续7日分别灌胃C35G(50、150 mg/kg)。末次给药后,CO_(2)处死小鼠,取血和结肠组织。采用酶联免疫吸附试法(ELISA)检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)水平。苏木精-伊红(H&E)、过碘酸-雪夫(PAS)、阿利新蓝(Alcian Blue)染色观察各组小鼠结肠组织病理变化、杯细胞分布及黏蛋白2(mucin2,MUC2)的分泌情况。Westernblot法检测结肠中Wnt、c-Myc蛋白表达水平。荧光实时定量PCR检测各组小鼠结肠组织中紧密连接蛋白mRNA表达水平。结果与5-FU组相比,C35G处理能显著降低5-FU造成的小鼠结肠肠黏膜损伤,并显著降低小鼠血清中TNF-α与IL-1β水平(P<0.05),且升高IL-10水平(P<0.01)。C35G能显著促进结肠组织中Wnt和c-Myc的蛋白表达,并显著提高紧密连接蛋白(Zo1、claudin1、claudin7、occludin)mRNA表达水平。结论C35G对5-FU诱导的小鼠化疗性肠黏膜炎具有明显改善作用。

RP-HPLC法同时测定枫蓼肠胃康胶囊中4种黄酮苷成分的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定枫蓼肠胃康胶囊中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷含量的方法。方法:采用Waters X bridge C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相系统:乙腈(A)-0.2%甲酸水溶液(B),梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:25℃;检测波长:350 nm。结果:芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷的质量浓度分别在12.42~310.50、5.95~148.75、6.85~171.25、7.88~197.00μg·mL与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率分别为98.6%、104.2%、104.5%、101.0%(n=6),RSD分别为1.3%、1.1%、1.3%、1.6%。结论:本方法符合方法学验证要求,简便、快捷,可用于枫蓼肠胃康胶囊中4种黄酮苷成分的同时测定。

UPLC-MS法同时测定玉簪花中3种成分

目的建立超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)法同时测定玉簪花中3种成分的含有量。方法玉簪花60%乙醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX RRHD Ecilipse Plus-C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱;检测波长265、350 nm;柱温30℃;体积流量0.4 mL/min。结果山柰酚、山柰酚-7-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷分别在0.08~2.5、0.16~5.0、3.75~120.0μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999),平均加样回收率96.4%~102.9%,RSD 1.2%~2.7%。结论该方法专属性强,重复性好,可用于玉簪花的质量控制。

RP-HPLC测定芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的含量

目的:对芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷(tiliroside)的含量进行测定。方法:采用反相高效液相色谱,ZORBAX XDB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%醋酸水溶液(B),梯度洗脱,0～18 min A:B 26∶74,18～33 mim A:B 80∶20;流速1.0 mL.min-1,检测波长310 nm,柱温25℃。结果:山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷在进样量0.1~5.0μg与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=6)。山柰酚-3-O-β-D-(6″-P-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的平均回收率101.50%,RSD 0.90%(n=6)。结论:该方法可准确地测定芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷,方法精密度高、简便、快速。

嗜热古菌Infirmifilum uzonense来源的双功能高温β-葡萄糖苷酶IuBgl3的原核表达及酶学性质分析

葡萄糖苷酶在食品、医药、生物质转化等领域具有重要的应用价值,因此发掘适应性强、性质优良的β-葡萄糖苷酶是国内外研究热点。本研究从嗜热古菌Infirmifilum uzonense中成功克隆出一个GH3家族的β-葡萄糖苷酶基因,命名为Iubgl3。基因序列分析显示Iubgl3全长为2109 bp,编码702个氨基酸,理论分子量为77.0 kDa。将该基因在大肠杆菌中进行克隆表达并对纯化后的IuBgl3进行酶学性质研究。结果显示,重组酶IuBgl3最适pH 5.0,最适温度85℃。该酶具有良好的热稳定性,80℃处理2 h后仍能保持85%以上的酶活力。其具有优良的pH稳定性,在pH 4.0-11.0范围内处理1 h,仍维持85%以上的酶活力。通过底物特异性测定发现,该酶对对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl β-D-glucoside,p NPG)和对硝基苯-β-D-吡喃木糖苷(p-nitrophenyl β-D-xylopyranoside,p NPX)均有很高的水解能力,是典型的双功能酶。以p NPG为底物时的动力学参数K_(m)和V_(max)分别为0.38 mmol和248.55μmol/(mg·min),催化效率k_(cat)/K_(m)=6149.20 s^(-1)mmol^(-1)。大多数金属离子对IuBgl3的酶活力没有显著影响,SDS可导致酶完全失活,而EDTA却能提高30%的酶活力。本研究丰富了高温古菌GH3家族的β-葡萄糖苷酶基因,获得了一个稳定性优良的高温酸性双功能酶,具有良好的工业应用前景。

红槭树枝条酚类成分及其抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

目的研究红槭树枝条甲醇提取物中的酚类化学成分及其抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性。方法采用甲醇浸泡提取红槭树枝条,系统溶剂萃取其甲醇提取物,并用硅胶、Sephadex LH-20、ODS和制备HPLC等各种柱色谱技术对其醋酸乙酯部位进行分离纯化,根据化合物的理化性质和谱学数据鉴定化合物结构,并对单体化合物进行DPPH自由基清除和抑制α-葡萄糖苷酶活性测试。结果从红槭树枝条醋酸乙酯部位中分离得到了10个酚类化合物,分别鉴定为儿茶素(1)、表儿茶素(2)、表儿茶素-3-O-没食子酸酯(3)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(4)、槲皮素-3-O-(3″-没食子酰基)-吡喃鼠李糖苷(5)、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-吡喃鼠李糖苷(6)、根皮苷(7)、条茶槭甲素(8)、条茶槭乙素(9)和条茶槭丙素(10)。结论化合物3、5～7为首次从红槭树枝条中分离得到,其中化合物7是首次从槭树科植物中分离得到的一个查耳酮类成分。所有化合物均具有很强的抗氧化活性,化合物3和8具有很强的抑制α-葡萄糖苷酶活性。

金属离子及酚酸添加对模拟葡萄酒溶液辅色作用的影响

为探究不同种类、浓度及添加酚酸条件下金属离子的辅色效果,该试验采用紫外-分光光度法和CIELab颜色空间法,研究K^(+)、Mg^(2+)和Al^(3+)在模拟葡萄酒中的辅色作用。结果表明,随着金属离子摩尔浓度增加,K^(+)未表现出明显的效果,Mg^(2+)和Al^(3+)却能使模拟酒的亮度(L^(*))更低、红度值(a^(*))和视觉饱和度(C_(ab)^(*))更高,且Al^(3+)在高浓度条件下(>1∶50,摩尔浓度比)能产生明显的视觉差别。此外,在花色苷-金属辅色体系中添加香草酸和原儿茶酸等酚酸化合物可使K^(+)和Al^(3+)辅色作用增强,但Mg^(2+)处理的模拟酒却产生减弱效果的“反辅色作用”,且香草酸的效果优于原儿茶酸。固定金属离子浓度添加不同浓度酚酸发现,当酚酸浓度较低时,供试的3种金属离子均表现出一定的“反辅色作用”,但随着酚酸浓度升高,3种离子的辅色效果逐渐显现,并对模拟酒颜色产生积极影响。这些结果将为研究金属离子的辅色反应,及其在提升葡萄酒颜色品质的作用中提供一定的数据支撑。