山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察不同浓度山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以SW480细胞为研究对象,设立不同浓度山慈菇提取物与空白组,采用CCK-8法检测SW480细胞的活性,克隆形成实验检测SW480细胞克隆形成能力,Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡时细胞核的形态学变化,Western blot法检测SW480细胞中星形细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-associated X的蛋白质(Bax)表达水平,最后采用shRNA干扰技术沉默SW480细胞中AEG-1基因的表达检测AEG-1基因是否能影响SW480细胞的增殖以及Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白组比较,山慈菇提取物能显著抑制SW480细胞活性和细胞克隆形成能力(P<0.05);Hoechst 33258染色后观察可见细胞形态皱缩并形成凋亡小体;与空白组比较,山慈菇提取物组AEG-1和Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平则明显增加(P<0.05);经shRNA沉默AEG-1基因表达后,SW480细胞中AEG-1蛋白水平显著下降(P<0.05);与阴性对照组比较,AEG-1沉默慢病毒转染组SW480细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),细胞活性和细胞克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05)。结论:山慈菇提取物具有明显抑制SW480细胞增殖并诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制AEG-1蛋白表达、继而下调Bcl-2蛋白的表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。

山慈菇提取物通过下调AEG-1表达抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭

目的本研究旨在观察山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法取人结直肠癌SW480细胞作为研究对象,采用划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,采用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默SW480细胞中星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)基因的表达,利用Western blot法检测基质金属蛋白酶-2,9(matrix metalloproteinase-2,9,MMP-2,9)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和AEG-1等蛋白的表达变化。结果山慈菇提取物可使人结直肠癌SW480细胞愈合率、迁移率和侵袭率均显著下降(P<0.05),下调MMP2、MMP9和AEG-1蛋白表达水平(P<0.05)以及上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05),上述作用均具有浓度依赖性。经shRNA干扰AEG-1基因表达后,SW480细胞中AEG-1蛋白表达水平显著下降(P<0.05);同时AEG-1干扰SW480细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),MMP2和MMP9蛋白表达水平均显著下降,同时单独或者联合山慈菇提取物组的细胞迁移率、侵袭率也降低(P<0.05)。结论山慈菇提取物能浓度依赖性地抑制人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭,这可能与山慈菇提取物抑制AEG-1蛋白表达,继而下调MMP2、MMP9蛋白表达和上调E-cadherin蛋白表达有关。

山慈菇提取物对肝癌细胞增殖及TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响

目的观察山慈菇提取物对肝癌SMMC-7721细胞增殖及TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响。方法对SMMC-7721细胞分别给予0、100、200、400、600、800、1000 mg/L山慈菇提取物培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SMMC-7721细胞分为0 mg/L组、400 mg/L组、600 mg/L组、800 mg/L组,分别加入0、400、600、800 mg/L的山慈菇提取物培养24 h,采用平板克隆形成实验测算细胞克隆形成率,光学倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用qRT-PCR法检测细胞中的TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA,采用ELISA法检测细胞培养液上清中的TNF-α、IL-1β、IL-6。结果400、600、800 mg/L组细胞克隆形成率低于0 mg/L组,600、800 mg/L组克隆形成率低于400 mg/L组(P均<0.05)。400、600、800 mg/L组随着药物浓度增大,细胞形态皱缩,贴壁差,细胞易脱落,尤以800 mg/L组最明显。400、600、800 mg/L组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达及细胞培养液上清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均低于0 mg/L组,600、800 mg/L组低于400 mg/L组(P均<0.05)。结论山慈菇提取物可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,并抑制细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达与分泌。山慈菇提取物可能是通过抑制炎症因子分泌,调节肿瘤微环境,从而抑制肿瘤细胞增殖。

山慈菇提取物对肝癌细胞Huh7增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨山慈菇提取物(CAE)对肝癌细胞Huh7增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养Huh7细胞,使用不同浓度(10、20、30 mg/mL)CAE处理24 h;采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法检测miR-329-3p及含跨膜Bax抑制剂的母体6(TMBIM6)mRNA表达,Western blotting法检测TMBIM6及Cyclin D1、p21、Bcl-2、Bax蛋白表达。双荧光素酶报告实验验证miR-329-3p与TMBIM6的靶向关系。将细胞分为CAE+anti-miR-329-3p组、CAE+anti-miR-NC组,分别转染miR-329-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-329-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC),并加入含有30 mg/mL的CAE处理24 h。参照上法检测细胞存活率、细胞凋亡率、miR-329-3p表达、TMBIM6及凋亡相关蛋白表达。结果随着加入CAE浓度的升高,细胞存活率、TMBIM6 mRNA及蛋白、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达均逐渐降低,细胞凋亡率、miR-329-3p表达、p21及Bax蛋白表达均逐渐升高(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-329-3p能够靶向结合TMBIM6。与CAE+anti-miR-NC组比较,CAE+anti-miR-329-3p组细胞存活率及TMBIM6、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达升高,细胞凋亡率、miR-329-3p表达及p21、Bax蛋白表达均降低(P均<0.01)。结论CAE可抑制肝癌细胞Huh7增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与激活miR-329-3p表达并负向调控其靶基因TMBIM6有关。

山慈菇提取物调控circ_0003998/miR-330-5p表达对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的研究山慈菇提取物对口腔鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生物学行为的影响,分析其作用机制是否与调控circ_0003998和miR-330-5p表达有关。方法采用集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法分析不同剂量山慈菇提取物对口腔鳞癌细胞CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。实时定量PCR分析CAL-27细胞中circ_0003998和miR-330-5p表达情况。双荧光素酶报告基因实验用于确定circ_0003998和miR-330-5p之间靶向关系。分别转染circ_0003998小干扰RNA、miR-330-5p模拟物至CAL-27细胞,分析干扰circ_0003998或过表达miR-330-5p对CAL-27细胞生物学行为的影响。结果山慈菇提取物作用后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量和circ_0003998表达量显著降低(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著升高(P<0.05)。circ_0003998与miR-330-5p直接结合,干扰circ_0003998可上调miR-330-5p表达(P<0.05)。干扰circ_0003998或过表达miR-330-5p后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量显著降低(P<0.05)。过表达circ_0003998或抑制miR-330-5p均可减弱山慈菇提取物对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论山慈菇提取物能够降低口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与下调circ_0003998/miR-330-5p分子轴有关。

山慈菇提取物对结肠癌HT29细胞凋亡的影响

目的:研究山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法检测山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响。结果:不同浓度的山慈菇提取物对HT29细胞增殖均有抑制作用,且抑制率呈时间、剂量依赖关系;山慈菇提取物干预后诱导HT29细胞凋亡(P<0.01)差异有统计学意义;山慈菇提取物诱导细胞凋亡过程中的CytC、Bax、Caspase-3蛋白表达明显增强,Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论:山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞有明显的促凋亡作用,其机制可能与上调Cyt-C、Bax、Caspase-3下调Bcl-2蛋白的表达有关。

山慈菇水提取物对胃癌HGC27细胞增殖抑制的影响

目的:研究山慈菇水提取物对人胃癌细胞(未分化)(Human Gastric Cancer Cell Lines,HGC-27)的抑制作用及其机制。方法:用四甲基偶氮唑盐(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)法检测不同剂量的山慈菇水提取物对胃癌HGC-27的增殖抑制作用。免疫印迹法检测各浓度组48 h时PI3K/Akt信号通路中的重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果:48 h的时候,不同浓度的山慈菇水提取物对胃癌HGC-27均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性和时间依赖性。随着浓度升高,时间的推移,p-Akt/Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:山慈菇水提取物对胃癌HGC-27增殖起抑制作用,同时与药物浓度、给药时间有一定的相关性,其可能通过抑制PI3K/Akt通路中的Akt活性实现。

山慈菇乙酸乙酯提取物和阿霉素抗4T1乳腺癌的差异蛋白分析

目的 通过蛋白质组学分析对比研究山慈菇乙酸乙酯提取物(以下简称山慈菇酯提物)与阿霉素抗4T1乳腺癌的作用靶点。方法 利用基于质谱的多肽体外标记技术(TMT),研究山慈菇酯提取物/阿霉素影响4T1乳腺癌荷瘤小鼠的差异蛋白,并利用生物信息学技术解析不同细胞表达蛋白质的互作关系和生物功能。结果 蛋白质组学研究发现,以Fold change>1.5或<0.67, P <0.05为筛选标准,山慈菇酯提取物/阿霉素两种给药组抗4T1乳腺癌的作用靶点相似,差异表达蛋白仅有13个,包括Ighg1、Ighm、Igkc、Gm5571及Cd5l等,这些差异表达蛋白主要与抗4T1乳腺癌免疫调节作用相关。其中Ighm、Igkc与Th1和Th2细胞因子分泌、Th17细胞分化、吞噬、细胞黏附有关。结论 山慈菇酯提物与阿霉素抗乳腺癌的作用靶点相似。