山杏仁蛋白酶水解物抑制炎症因子NO、TNF-α和IL-1β的产生

分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶制备山杏仁蛋白酶水解物,通过格里斯实验和ELISA方法,研究山杏仁蛋白酶水解物对巨噬细胞产生炎症因子NO、TNF-α和IL-1β的影响。结果表明山杏仁木瓜蛋白酶水解物显著抑制炎症因子NO、TNF-α和IL-1β产生,其抑制率分别为62%、11%和21%,而其它四种蛋白酶水解物没有显示明显的抗炎作用。将山杏仁木瓜蛋白酶水解物分离制备为5~10,3~5,1~3 k Da和小于1 k Da等不同分子量组分,进一步研究其抗炎活性,结果表明小于1 k Da低分子量组分具有较高抗炎活性,其对NO、TNF-α和IL-1β产生的抑制率分别为81%、59%和46%。分析氨基酸组成与含量结果表明,抗炎活性较强的小于1 k Da组分中,疏水性氨基酸和亲水性氨基酸含量均较高,同时谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸等具有抗炎作用的氨基酸含量也较高。以上结果表明,山杏仁蛋白被木瓜蛋白酶水解后能够释放抗炎生物活性肽,该活性肽的分子量小于1 k Da,可能是具有两亲性的结构。

谷氨酰胺转氨酶对山杏仁蛋白凝胶特性的影响

为提高山杏仁蛋白的凝胶特性,采用谷氨酰胺转氨酶(TG)作为交联剂,通过单因素实验研究了TG酶添加量、p H、交联温度、交联时间对蛋白凝胶硬度、弹性、内聚力的影响,并以凝胶强度为指标,利用响应面法对山杏蛋白形成条件进行优化。优化的TG酶交联山杏仁蛋白形成凝胶的条件如下:TG酶添加量17 U/g,交联温度43℃,p H为7.2,交联时间2.5 h时,此时凝胶硬度达到(135±7.14)g。结果表明利用TG酶交联山杏仁蛋白形成凝胶具有可行性,为提高山杏仁蛋白的功能性质和应用价值提供参考。

山杏仁蛋白诱导Caco-2人结肠癌细胞死亡

分别以水、盐、乙醇及NaOH溶液为提取剂,从山杏仁中提取蛋白,通过细胞增殖分析实验,研究山杏仁蛋白对人结肠癌细胞Caco-2生长的影响。结果表明,用有机溶剂乙醇提取的山杏仁蛋白显著抑制Caco-2细胞生长(P<0.01,其IC50值为1.018 mg/mL),而用其他提取剂提取的山杏仁蛋白并没有显示同样活性。以乙二醇、异丙醇及叔丁醇等其他有机溶剂代替乙醇提取的山杏仁蛋白,也没有显示抑制Caco-2细胞生长作用。因用乙醇提取的山杏仁蛋白具有显著抑制Caco-2细胞生长作用,称为活性山杏仁蛋白。SDS-聚丙烯凝胶电泳分析结果表明,21 ku和41 ku 2个亚基存在于活性山杏仁蛋白中。细胞活力检测结果表明,用5 mg/mL浓度活性山杏仁蛋白处理Caco-2细胞48 h后,死细胞占细胞总数的89.5%。TUNEL和Annexin V-FITC染色等细胞凋亡检测结果分别表明,活性山杏仁蛋白诱导了Caco-2细胞凋亡。

山杏仁肽的体外抗氧化活性研究

分析了山杏仁蛋白的氨基酸组成,比较了分别使用蛋白酶M、AX、Alcalase和Papain酶解山杏仁蛋白所制备的山杏仁肽的抗氧化性质。结果显示:山杏仁蛋白中疏水性氨基酸占氨基酸组成的35.97%,谷氨酸含量超过了27%。使用蛋白酶M制备的山杏仁肽还原能力最好,并且与其质量浓度呈正相关性。使用Alcalase制备的山杏仁肽在清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH.)方面能力最强,40 mg/mL时清除率达到91.97%。使用蛋白酶AX所制备的山杏仁肽在清除羟基自由基(.OH)及超氧阴离子自由基(O2-.)方面有着更强的能力,在山杏仁肽质量浓度为50 mg/mL时清除率分别达到78.91%和89.47%。

低苯丙氨酸山杏仁肽的制备

为了制备低苯丙氨酸肽,山杏仁蛋白经Alcalase2.4L降解后,利用单因素和正交实验确定了外肽酶Flavourzyme 1000L的水解工艺。结果显示,在50℃、pH为7.5、添加量为3000U/g条件下处理2h水解度可达41.23%。添加10g/dL粉末活性炭,于35℃、pH2.0条件下吸附3h,浓缩干燥后经氨基酸分析,产物中苯丙氨酸质量分数大幅降低。所得产物可用于为苯丙酮尿症患者制备的特殊医学配方食品。