尿苷二磷酸-葡萄糖4-差向异构酶编码基因galE影响甘薯青枯菌致病性和碳代谢

为明确尿苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)-葡萄糖4-差向异构酶编码基因galE的功能,通过构建甘薯青枯菌galE基因敲除菌株ΔgalE及回补菌株CΔgalE,探索galE基因与甘薯青枯菌致病相关表型间的关联及对甘薯青枯菌生理代谢的影响。结果表明:galE基因缺失显著降低了青枯菌对甘薯的致病性,并且影响了致病相关表型。ΔgalE菌落流动性、菌体泳动能力、胞外多糖含量和生物膜形成量均明显低于野生型SPRS911和CΔgalE。在半乳糖代谢途径中,galE基因缺失后,参与尿苷二磷酸葡糖与葡萄糖之间代谢的galU、pgm、glk基因表达量降低,D-葡萄糖-6-磷酸累积;与UDP-半乳糖代谢有关的dgoK、dgoAa、dgoAb、malZ和galM基因表达量升高。galE基因缺失还加强了甘薯青枯菌对于苹果酸的同化作用。上述研究结果说明,galE基因对青枯菌的致病性与碳代谢水平均有明显影响。

鲜地黄中α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶的提取与初步纯化

目的:从鲜地黄中提取并初步纯化α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶。方法:以总酶活为考察指标,通过正交试验确定两种酶的最佳提取条件。以酶活力和蛋白质含量为考察指标,确定两步盐析法的硫酸铵饱和度。结果:提取温度和溶剂量对α-Gal的提取具有显著性影响,而提取溶剂对-βG lu的提取具有显著性影响,因此确定以3倍量(v/w)磷酸盐缓冲液,4℃提取4 h为两种酶的最佳提取条件。以30%和60%为两步盐析的最佳硫酸铵饱和点。结论:鲜地黄中存在α-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶,两步盐析法可以使二者得到初步纯化。

大肠癌组织中β-半乳糖苷结合蛋白-3与β-葡萄糖醛酸苷酶表达的意义

目的:通过观察β-半乳糖苷结合蛋白-3(Galectin-3)与β-葡萄糖醛酸苷酶(β-G)在大肠癌组织中的表达,与大肠癌的生物学特征进行比较,以探讨其临床意义.方法:采用SP免疫组织化学方法检测98例临床新鲜标本,其中包括15例癌旁正常大肠黏膜组织及83例大肠癌组织中galectin-3和β-G的表达情况,并进行两种蛋白的表达相关性分析.结果:Galectin-3和β-G蛋白在浸润程度深、分化程度低及Dukes分期较晚的大肠癌组织中的表达高于浸润程度浅(0.15±0.03 vs 0.16±0.05,P=0.02)、分化程度高(0.15±0.012 vs 0.16±0.03,P=0.03)及Dukes分期较早(0.18±0.06 vs 0.17±0.05)的大肠癌组织(P<0.05);在大肠癌组织中,ga-lectin-3的表达和β-G的表达呈正相关(r=0.628,P<0.01).结论:Galectin-3和β-G的异常表达在大肠癌的发生、发展中起着重要作用,具有一定的诊断价值.

地稍瓜β-葡萄糖苷酶和多聚半乳糖醛酸酶基因克隆

地稍瓜是一种利用价值极高的野生植物,但是地稍瓜采后不易保存,极易腐烂,货架期短,严重限制了其开发利用.细胞壁降解是引起植物果实腐烂的主要原因之一.β-葡萄糖苷酶和多聚半乳糖醛酸酶在细胞壁降解中起关键作用.实验首先从地稍瓜转录组测序结果中筛选出这2个酶的cDNA全长序列并设计特异性引物,然后以地稍瓜的cDNA为模板,进行RT-PCR扩增,扩增产物经测序后,得到它们cDNA序列,长度分别为1311 bp和1434 bp,经Blast分析结果表明:成功克隆了地稍瓜的β-葡萄糖苷酶和多聚半乳糖醛酸酶基因的cDNA全长.为后续基因的表达水平研究提供了基础,相关研究结果对于地稍瓜果实保鲜及提高地稍瓜利用价值具有重要意义.

完全乙酰基化4-氨基-4-脱氧-D-甲基葡萄糖苷(S)-TBMB甲酸衍生物的合成

Starting from \%D\%\|galactose, per\|\%O\|\%acetylated (\%S\%)\|TBMB carboxylic acid derivant of methyl\|4\|amino\|4\|deoxy\|\%D\%\|glucopyranoside was prepared. The mechanism of the possible side reactions of the catalytic reduction from different types of azide sugar to the corresponding amino sugar was discussed. 1\|\%O\%\|Me\|protection was selected for preventing the intramolecular dehydration of the 4\|amino sugar, which was a key intermediate product in this synthetic process. The product was characterized by HRMS and \{\{\}\+1H NMR\} spectroscopy and will be used as a molecular model to develop a new identification method of the \%D, L\|\%configurations of amino sugar.

4,4'-二羟基-2-甲氧基-二苯甲酮-6-O-β-D-葡萄糖苷衍生物的合成

为研究4,4'-二羟基-2-甲氧基-二苯甲酮-6-O-β-D-葡萄糖苷的构效关系,合成生物活性更高的化合物,以4,4'-二羟基-2-甲氧基-二苯甲酮-6-O-β-D-葡萄糖苷为先导化合物,通过对其进行选择性保护,酸水解,设计合成了9个衍生物,并通过IR,NMR和MS等谱图数据对其化学结构进行了结构表征,发现了4,4'-二羟基-2-甲氧基-二苯甲酮-6-O-β-D-葡萄糖苷衍生物的合成的一条捷径.

蜂蜜-乳酸发酵过程中相关酶活力的研究

乳酸菌能以蜂蜜为碳源、脱脂乳粉为氮源进行发酵,产生对人体有益的乳酸,而保留了蜂蜜中其他的营养成分和特殊风味。本实验通过测定发酵过程中蔗糖转化酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶的活力,研究了其对还原糖转化率的影响。实验表明,在发酵时间为4.0h,蜂蜜添加量为8%,接种量为3%时,相应的蔗糖转化酶酶活力为23.845mg/g·h,葡萄糖氧化酶酶活力为10.621μg/g·0.5h,β-半乳糖苷酶酶活力为1.211μg/μmol·min,该条件下的还原糖转化率为44.34%,产品品质最佳。

茶条槭叶化学成分的分离鉴定及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

目的研究茶条槭Acer tataricum subsp.ginnala树叶80%乙醇提取物中的化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法实验采用硅胶,ToyopearlHW-40c、SephadexLH-20凝胶和制备液相色谱等手段进行分离纯化,并应用1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱技术鉴定了化合物结构,并对部分单体化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测试。结果从茶条槭叶的乙酸乙酯和正丁醇部位中分离得到23个化合物,分别鉴定为maplexinB(1)、3″-O-galloyl-benzyl-O-α-Lrhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(2)、没食子酸甲酯(3)、没食子酸(4)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(5)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-β-D-来苏糖苷(7)、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷(8)、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(9)、槲皮素-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(10)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、槲皮素-3-O-(2″,6″-二-O-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(12)、3,6-di-O-没食子酰基-1,5脱水葡萄糖醇(13)、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-α-L-阿拉伯糖苷(14)、山柰酚-3-O-(2″-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷(15)、山柰酚-3-O-(6″-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(16)、槲皮素(17)、山柰酚(18)、1-p-香豆酰基-β-D-葡萄糖苷(19)、茶条槭素B(20)、茶条槭素C(21)、茶条槭素A(22)、槲皮素-3-O-(2″-O-没食子酰基)-β-D-半乳糖苷(23)。结论化合物1、2、10、12、16、19为首次从本植物分离得到,化合物2、10、12、16、19同时为本科植物中首次分离得到。化合物8、12、14~16具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

黄芪多糖APS-Ⅰ、APS-Ⅱ制备及其对溃疡性结肠炎小鼠抗炎活性

目的从黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)中分离制备出2种多糖APS-Ⅰ(相对分子质量>2×10~6)、APS-Ⅱ(相对分子质量1×10~4),明确APS、APS-Ⅰ、APS-Ⅱ对葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的疗效。方法对APS-Ⅰ、APS-Ⅱ进行分离制备,并进行相对分子质量、糖醛酸含量、单糖组成以及糖苷键连接方式测定。建立BALB/c小鼠溃疡性结肠炎模型,分别给予APS、APS-Ⅰ、APS-Ⅱ,记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、结肠长度、脾脏指数、肝脏指数;采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;测定结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性和Th1相关细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)以及Th2相关细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-10水平;采用qRT-PCR检测结肠组织TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10 mRNA表达;免疫组化法测定结肠组织T细胞特异性转录因子(transcription factor T-bet,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA-3)蛋白表达,比较APS、APS-Ⅰ、APS-Ⅱ疗效。结果APS中共有2个组分APS-Ⅰ、APS-Ⅱ,其相对分子质量分别为>2×10~6、1×10~4,糖醛酸质量分数分别为26.25%、1.62%。单糖结果显示,APS-Ⅰ和APS-Ⅱ均由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,APS-Ⅰ中甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖占比均大于APS-Ⅱ。糖苷键结果显示,APS-Ⅰ以1,4连接的葡萄糖和1,6连接的半乳糖为主,APS-Ⅱ以1,4连接的葡萄糖为主。与模型组比较,APS-Ⅰ可显著改善结肠长度降低、体质量减轻、DAI评分增加、脾脏和肝脏指数增加等临床症状(P<0.05、0.01、0.001),减轻结肠组织病理损伤,降低结肠组织中MPO活性及TNF-α、IFN-γ水平(P<0.01、0.001),升高结肠组织中IL-4、IL-10水平(P<0.05、0.01、0.001),下调结肠组织TNF-α、IFN-γmRNA表达和T-bet蛋白表达(P<0.05、0.001),上调IL-4、IL-10 m RNA表达和GATA-3蛋白表达(P<0.05、0.01)。而APS-Ⅱ在MPO活性、IFN-γ水平以及IL-4、IL-10 mRNA表达和T-bet、GATA-3蛋白表达方面与模型组相比无显著差异。结果表明APS-Ⅰ对溃疡性结肠炎的治疗效果优于APS-Ⅱ。结论APS-Ⅰ是APS治疗溃疡性结肠炎的主要成分,其活性可能与其糖醛酸含量、多糖的种类以及糖苷键连接方式有关,APS-Ⅰ治疗溃疡性结肠炎可能通过调节Th1/Th2免疫平衡实现。

黄酮醇糖苷与茶树品种适制性关系

对不同加工适制性的18个茶树品种春季茶叶中10种黄酮醇糖苷进行了超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用检测,并计算了葡萄糖苷化黄酮醇与半乳糖苷化黄酮醇的比值。结果发现相比于适制绿茶的茶树品种,适制红茶品种茶叶中黄酮醇葡萄糖苷化水平较高,而半乳糖苷化水平较低。山柰酚-3-葡萄糖苷含量、山柰酚-3-葡萄糖酰芸香糖苷含量、山柰酚-3-葡萄糖苷/山柰酚-3-半乳糖苷比值、槲皮素-3-葡萄糖苷/槲皮素-3-半乳糖苷比值、杨梅素-3-葡萄糖苷/杨梅素-3-半乳糖苷比值在不同适制性品种间具有显著性差异(P<0.05)。其中山柰酚-3-葡萄糖苷含量和山柰酚-3-葡萄糖苷/山柰酚-3-半乳糖苷比值差异极显著(P<0.001),对于绿茶适制性品种和红茶适制性品种的判断准确率分别为100%和83%,具有作为指导茶树品种适制性生化指标的可能。

乳糖不耐症与结肠代谢

乳糖是由1分子葡萄糖和1分子半乳糖通过β-1,4-糖苷键连接构成的一种双糖。乳糖是哺乳动物乳汁中的一种重要碳水化合物，牛乳乳糖平均含量为4.8%，约占牛乳总能量的30%，人乳平均含7%乳糖，是新生儿主要能量来源[1]。乳糖对于人类有多种益处：乳糖溶解度好，提供相应能量的渗透性负荷低，为新生儿提供了均衡的葡萄糖和半乳糖，葡萄糖供应能量而半乳糖促进大脑发育（参与脑苷糖和黏多糖合成）[2]。乳糖必需在小肠内通过乳糖酶水解为葡萄糖和半乳糖而被吸收，见图1。乳糖酶属于β-半乳糖苷酶家族（学名为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，β-D-galactosidegalatohydrolase，EC3.2.1.23），可以特异性水解β-1,4-糖苷键，将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖。

缺氧-缺血性脑病新生儿尿酶的改变及其临床意义

目的探讨缺氧-缺血性脑病(HIE)新生儿尿中N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)和β-D-半乳糖苷酶(GAL)的改变及临床意义。方法28例轻度HIE患儿(轻度组)和29例中重度HIE患儿(重度组)作为研究对象,25例正常足月新生儿作为对照组,采用终点法测定尿中NAG和GAL。结果重度组尿NAG为(56.60±10.63)U/gcr,明显高于轻度组的(16.98±7.06)U/gcr和对照组的(16.82±4.43)U/gcr(P<0.01)。重度组尿GAL为(22.66±5.52)U/gcr,明显高于轻度组的(10.94±3.55)U/gcr和对照组的(8.54±2.58)U/gcr,轻度组尿GAL亦明显高于对照组(P<0.01)。结论HIE患儿尿NAG、GAL均有显著改变,且和HIE的程度有关。

独脚金药材HPLC-DAD特征图谱研究

目的:建立独脚金药材的HPLC-DAD特征图谱。方法:采用HPLC法测定,使用Acchrom XAqua C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1 m L·min^(-1),检测波长为340 nm,柱温为30℃。对10个批次独脚金药材检测,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2008版)进行数据处理分析。并用HPLC-ESI-MS技术对部分共有峰进行了初步归属。结果:建立了以8个共有峰为指标成分的独脚金药材HPLC特征图谱,并通过MS技术初步鉴定出7个共有峰的可能化学成分,分别为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(2号峰)、芹菜素-7-半乳糖醛酸苷或芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(3号峰)、金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(4号峰)、木犀草素(5号峰)、刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(6号峰)、芹菜素(7号峰)、金圣草素(8号峰)。以木犀草素色谱峰为参照,其他7个色谱峰的相对保留时间分别为(0.441±0.004)、(0.513±0.004)、(0.665±0.010)、(0.727±0.005)、(1.048±0.005)、(1.258±0.008)、(1.333±0.009)。结论:该方法经过方法学验证,可用于独脚金药材的质量控制。

矿物尘粒对大肠埃希菌作用的体外研究

目的研究来自全国各地的含硅矿物尘粒对大肠埃希菌生长、代谢产物、酶及形态的影响,从而探讨矿物尘粒对大肠埃希菌作用的机制。方法分析矿物尘粒主要物理组成及化学成分,测定大肠埃希菌数量、培养基pH值、钙离子(Ca2+)、镁离子(Mg2+)、葡萄糖(GLU)、丙酮酸的含量、β-半乳糖苷酶的活力,扫描电镜观察大肠埃希菌的形态变化。结果矿物尘粒物理组成基本一致,化学成分各不相同;含Ca2+或Mg2+高的矿物尘粒能使大肠埃希菌数量、丙酮酸含量增加,使β-半乳糖苷酶的活力增强,并能增加大肠埃希菌对GLU的利用;各矿物尘粒均可引起大肠埃希菌形态的变化。结论含Ca2+或Mg2+高的矿物尘粒能促进大肠埃希菌的生长代谢。

鹊肾树心材的化学成分及体外抗菌活性研究

本文研究鹊肾树Streblus asper心材的乙酸乙酯部分化学成分及体外抗菌活性。运用正相硅胶柱色谱层析,反相C-18柱色谱层析和Sephadex LH-20分离、纯化,最终得到8个化合物,经波谱解析并结合理化鉴定确定化合物结构为:银杏双黄酮(1)、异黄酮-4'-甲氧基-7-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-葡萄糖(2)、鼠李柠檬素-3-O-β-D-半乳糖苷(3)、β-香树脂酮(4)、β-谷甾醇(5)、香草酸(6)、山俞酸(7)、二十六烷酸(8)。除化合物5外,均为首次从该植物中提取到。此外研究了化合物1-4的抗菌活性,实验表明化合物2具有一定的抑菌活性。

黄芪对嗜酸乳杆菌生长及其产酶活的影响

研究添加不同浓度的黄芪提取液对嗜酸乳杆菌生长及产酶能力的影响,对比在改良的MRS培养基中添加与未添加黄芪提取液对嗜酸乳杆菌的生物量和生长周期的影响,同时测定了嗜酸乳杆菌产β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶和淀粉酶的酶活,确定黄芪提取液的最佳添加浓度。结果表明:当添加黄芪提取液浓度为0.032mg/mL时对嗜酸乳杆菌生长有明显的促进作用,且在此浓度下pH达最低值3.88;当添加黄芪提取液浓度为0.016g/mL时,嗜酸乳杆菌产β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶和淀粉酶的酶活达到最高值,分别为387.56、14.42、4.4U。

脐橙果实发育过程中果肉质地与水解酶活性的变化(英文)

以四川井研县的纽霍尔、罗脐、丰脐为研究材料,进行了定点、定位和定期的观测、取样;首次用NIRS法对脐橙果实生长发育过程中果肉质地组成的WSP、HP、ADF、NDF、SDFI、DF、HC和CEL含量进行了优化建模和定量分析;对影响脐橙果肉质地的果胶甲酯酶、多聚半乳糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶的变化进行了研究。结果表明:①用NIRS法定量分析果肉质地主要的8个指标,优化模型交差检验的结果基本接近化学分析精度,能够用于预测脐橙新样品各质地组成的含量;②3个不同品种脐橙果肉质地组成的变化分析表明,质地组成在数量上化渣的纽霍尔较不易化渣的罗脐和丰脐有更低的CEL而WSP和SDF更高,果实发育过程中纽霍尔WSP和SDF含量的变幅较后二者大;③果实动态变化中,水解酶PE和PG的活性纽霍尔比罗脐和丰脐强、变化幅度较大,影响脐橙果肉质地的关键水解酶是PE和PG,而β-葡萄糖苷酶是PE和PG作用的补充。

糖尿病患者尿NAG与微量清蛋白、GAL及血糖的关系

目的探讨糖尿病(DM)患者尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)与尿微量清蛋白(mAlb)、β-D-半乳糖苷酶(GAL)及血糖(GLU)之间的关系。方法用葡萄糖氧化酶法和免疫比浊法分别检测对照组和DM患者(DM组)空腹GLU和mAlb水平,用酶法检测乳酸(LAC)、β-羟丁酸(β-HB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、糖化血清蛋白(Fruc)含量,用比色法检测NAG和GAL。结果 DM组中NAG与mAlb(r=0.546,P<0.01)、GAL(r=0.428,P<0.05)、GLU(r=0.531,P<0.01)均呈正相关,而与Fruc、LAC、β-HB、BUN、Cr均无相关性(P>0.05),以NAG为因变量(Y),得到回归方程式Y=-13.128+1.896GLU+0.207GAL+0.084mAlb。对照组中,NAG与mAlb、GAL、GLU、Fruc、LAC、β-HB、BUN和Cr间均无相关性(P>0.05)。结论控制DM患者GLU水平可以减轻肾小管的损伤,从而降低患者肾脏损害的风险。

三个脐橙品种果实主要细胞壁酶动态变化研究

以罗伯逊脐橙、丰脐、纽荷尔脐橙果实为试材,对其果皮和果肉的果胶甲酯酶(PE)、多聚半乳糖醛酸酶(PG)、β-葡萄糖苷酶和纤维素酶(CX)的动态变化进行研究。结果表明,三个品种PE活性均为果肉明显高于果皮,其中纽荷尔和罗脐分别在果实膨大期、转色期和成熟期出现三个峰值;PE活性变幅纽荷尔大于罗脐,丰脐变化较平稳。PG活性果肉略高果皮,且皆在转色期开始快速升高。首次对脐橙果实β-葡萄糖苷酶研究表明,该酶活性微弱,成熟期活性最高,纽荷尔高于丰脐和罗脐;动态变化中果皮和果肉无明显差异。酶活性高峰出现的时间为PE早于PG和β-葡萄糖苷酶;PE和PG是影响脐橙果实发育的主要酶,β-葡萄糖苷酶可能是PE和PG的补充。

脐橙果实发育过程中细胞壁物质及其水解酶活性的变化

以纽霍尔、罗脐、丰脐为研究材料,进行了定点、定位和定期的观测、取样;首次用NIRS法对甜橙果实生长发育过程中果肉质地组成的W SP、HP、ADF、NDF、SDF、IDF、HC和CEL含量进行了优化建模和定量分析;对影响果肉质地的果胶甲酯酶、多聚半乳糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶的变化进行了研究。结果表明:①用NIRS法定量分析甜橙果实质地主要有8个指标,优化模型交差检验结果基本接近化学分析的精度,能够用于预测脐橙新样品各质地的含量;②3个不同品种脐橙果肉质地组成的动态变化表明,质地组成在数量上化渣的纽霍尔较不易化渣的罗脐和丰脐有更低的CEL而W SP和SDF更高,果实发育过程中纽霍尔W SP和SDF含量的变幅较后二者大;③果实动态变化中,水解酶PE和PG的活性纽霍尔比罗脐和丰脐橙强、变化幅度也大,影响脐橙果肉质地的关键水解酶是PE和PG,β-葡萄糖苷酶是PE和PG作用的补充。