桑叶中山奈酚-3-O-芸香糖苷水热酸控质子化作用

KR(山奈酚-3-O-芸香糖苷)具有药理高附加值。采用水热酸控醇提法提制桑叶中KR,优化获得KR浸提适宜参数,构建动力学模型,探究KR的传质溶浸过程。结果表明:投加柠檬酸质量浓度0.050 g/L,桑叶与45%的乙醇溶液质量体积比为1∶20 g/mL,80℃水热反应釜中处理40 min,2.00 g桑叶可溶浸KR 16.09 mg/g,是自动中药煲水热浸提KR(0.41 mg/g)的40倍;SEM(扫描电镜)显示水热酸控反应后桑叶表面孔隙明显增多增大,FT-IR(傅里叶变换红外光谱)表明水热酸控反应有利于桑叶C-O、C-H等键水裂解,KR溶浸满足一级动力学模型,溶出速率为-3.45 min-1,为桑叶高值化开发提供理论依据。

HPLC-ELSD法测定赤雹不同药用部位中山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量

目的:建立赤雹不同药用部位(根、茎、果实)中山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷含量的PLC-ELSD测定方法。方法:采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器检测。色谱柱:Alltima C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(19∶81);柱温:30℃,流速:0.8 ml·min^(-1)。ELSD条件:漂移管温度:105℃;载气流速:2.8 L·min^(-1)。结果:山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷在51.15~920.70μg·ml^(-1)浓度范围内线性关系良好(r=0.999 8);平均回收率根、茎、果实分别为100.1%,100.5%,101.1%,RSD分别为1.82%,1.79%,1.54%(n=6)。结论:该方法简便、准确,可用于赤雹药材的质量控制。

山柰酚-3-O-芸香糖苷对血管平滑肌细胞增殖、迁移及TGFBR1信号通路活化的影响

目的:探索山柰酚-3-O-芸香糖苷(KR)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及转化生长因子β受体1(TGFBR1)信号通路活化的影响。方法:将KR(10、20和40μmol/L)孵育大鼠VSMC细胞系A7R5 24 h,或将40μmol/L KR孵育A7 R5细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色检测细胞增殖情况,Transwell小室实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;分子对接技术探索KR与TGFBR1之间的相互关系,Western blot检测TGFBR1及其下游的Smad2和Smad3的激活情况。结果 :KR剂量和时间依赖性地降低细胞活力,剂量依赖性地减少Ed U染色阳性细胞数量,降低迁移细胞数量,减少迁移相关蛋白MMP2和MMP9的表达(P<0.05)。KR与TGFBR1发生分子对接的结合力为-9.804 kcal/mol,与TGBFR1的SER-280、ARG-215、ASP-290和LYS-335氨基酸残基形成氢键连接。KR剂量依赖性地降低TGFBR1及其下游Smad2和Smad3的激活(P<0.05)。结论:KR能抑制VSMC的增殖和迁移,其机制可能与抑制TGFBR1信号通路相关。

毛菊苣中山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品的制备研究

目的建立维药毛菊苣中山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品的制备分离方法。方法取毛菊苣药材醇提浸膏的乙酸乙酯萃取部位上样于硅胶柱色谱分离,收集黄酮苷富集流份,继续用凝胶柱色谱及制备HPLC进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱方法鉴定化合物结构,经TLC、HPLC-UV及MS联用等技术进行质量分数检测。结果制备分离得到2个化合物分别鉴定为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1)和山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),质量分数均大于98%,其中2为首次从该属植物中分离得到。结论该法制备得到的2个黄酮苷类对照品符合中药化学对照品的相关技术要求,为药材毛菊苣和含毛菊苣的成方制剂的质量控制及药效物质基础研究提供化学对照品。

从布渣叶中制备异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的研究

目的从布渣叶中分离制备高纯度异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷。方法采用大孔吸附树脂富集布渣叶总黄酮,用Sephadex LH-20凝胶柱从布渣叶总黄酮中分离化合物单体,并采用IR、MS和1H-NMR、13C-NMR对其进行结构鉴定,利用TLC和HPLC对其纯度进行测定。结果从布渣叶中分离出异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷,其质量分数大于98.0%。结论该方法简便有效,可以从布渣叶中制备异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷对照品。

山柰酚-3-O-鼠李糖苷抗炎作用的研究

目的研究山柰酚-3-O-鼠李糖苷的体内外抗炎作用。方法体外采用酶联免疫法检测山柰酚-3-O-鼠李糖苷对脂多糖刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞264.7细胞释放炎症细胞因子的影响;体内采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验和角叉菜胶致大鼠足肿胀实验评价山柰酚-3-O-鼠李糖苷的抗炎作用。结果山柰酚-3-O-鼠李糖苷在50~200μg·ml^(-1)浓度范围内,可显著抑制脂多糖刺激的RAW264.7细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α及白介素-6的释放,且对细胞活力无明显影响(P>0.05);山柰酚-3-O-鼠李糖苷200、400 mg·kg^(-1)对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀以及角叉菜胶所致的大鼠足肿胀有明显的抑制作用(P<0.01)。结论山柰酚-3-O-鼠李糖苷具有一定的抗炎作用。

HPLC法测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量

目的采用高效液相色谱法测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法采用岛津LC-20AD高效液相色谱仪,以乙腈-0.4%甲酸（16∶84）为流动相,流速1.0m L·min-1,检测波长346nm,柱温：35℃。结果山奈酚-3-O-芸香糖苷线性范围为6.92~69.2μg·m L-1（r=0.9997）,平均回收率（n=6）为98.69%.结论本法可测定枫蓼肠胃康片中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量,可用于该产品的质量控制。

LC-MS/MS法测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度及其在大鼠药动学研究中的应用

目的：建立能够灵敏、特异、准确、可靠地测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度的分析方法。方法：优化山奈酚-3-O-芸香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，NFR）的离子化及其断裂方式，确定相关液相色谱条件，选择能有效地从血浆样品中提取NFR的样品前处理方法；开展方法学考察，以验证新建分析方法的准确性、精密度等，在此基础上将该方法用于分析大鼠静脉注射NFR后所得的实际血浆样品，以验证新建分析方法的适用性。结果：ESI（＋）为NFR提供最佳的离子化条件，采用SRM工作模式，用m／z595→287来检测NFR。同时，以左旋千金藤啶碱（1-Stepholidine）为内标物化合物（IS），其SRM检测采用m／z328→178。NFR及IS的色谱保留时间（tR）分别为2．3和2．2min。用乙酸乙酯（EtOAc）提取经HCl酸化的大鼠血浆样品，NFR和IS的回收率分别为58．5％～70．1％和72．5％。NFR和IS在整个分析过程中稳定。在0．192～600ng·ml^-1的浓度范围内，对NFR与IS的峰面积比值和NFR的血药浓度进行线性回归，其回归曲线线性良好（r=0．9999，n=6×5）。批内准确性为92％～107％，其精密度为1．0％～5．7％；批间准确性为94％～99％，其精密度为1．5％～8．4％。本方法的LLOQ为0．192ng·ml^-1。大鼠静脉给药单剂量NFR（30 mg·kg^-1）后，NFR的消除半衰期（T1/2）为1．27 h、体内平均滞留时间（MRT）为0．32 h，NFR在大鼠体内的清除率（CL）为2．73 L·h·kg^-1、稳态分布体积（VSS）为0．92 L·kg^-1。结论：应用LC-MS／MS技术建立的测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度的新方法灵敏可靠，这项研究工作为全面开展NFR注射液的临床前药代动力学研究打下了重要的分析方法学基础。

高效液相色谱法测定龙脷叶中山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定龙脷叶中山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的含量。方法色谱柱为Inersil ODS-3 C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（48∶52）,检测波长为349nm,柱温为35℃,流速为1.0 mL·min-1。结果山柰酚-3-O-龙胆二糖苷在0.110 8-1.108 0μg与峰面积线性关系良好（r=1.000）。平均加样回收率为103.3%,RSD为1.2%（n=6）。结论所建立方法操作简便,准确可靠,可用于龙脷叶的质量控制。

紫丁香花中山奈酚-3-O-芸香糖苷的提取工艺优化及含量动态变化规律

〔目的〕优化紫丁香花中山奈酚⁃3⁃O⁃芸香糖苷(KR)的提取工艺,探讨其含量的动态变化规律。〔方法〕以KR为指标,用高效液相色谱法测定紫丁香花中KR的含量,在单因素试验基础上,采用正交试验法确定KR的最佳提取工艺。〔结果〕固液比为1∶180,粉碎目数为70目,超声时间为50 min,离心转速为4000 r/min是紫丁香中KR最优提取条件。固液比和粉碎目数两因素对KR的提取量影响最大;在紫丁香开花的中期KR含量最高(8.58 mg/g),KR的含量整体呈现出先增加后降低的趋势。〔结论〕优化的提取工艺方法简单、可靠,稳定性好,可为后期KR的高效开发利用提供参考。

HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量

目的:采用高效液相色谱法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法:采用岛津LC-20AD高效液相色谱仪,以乙腈-0.4%甲酸(16:84)为流动相,流速1.0ml·min^(-1),检测波长346nm,柱温:35℃,检测牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷含量。结果:山奈酚-3-O-芸香糖苷线性范围为6.92~69.2μg·ml^(-1)(r=0.9997),平均回收率(n=6)为98.69%。结论:HPLC法测定牛耳枫中山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量准确性高,可用于牛耳枫的质量标准控制。

不同产地不同采收时间枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷含量的比较

目的:比较不同产地、不同采收期枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。方法:采收相同产地下不同采收期和相同采收期下不同产地的枫香树叶,称重、晒干,并用HPLC法测定异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量。结果:24批枫香树叶,同一采收期中江西余江、江西鹰潭、江西弋阳三个产地的枫香树叶异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量均较高;同一产地的8个采收期中,以5,6,7月份采收的枫香树叶异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量较高,12月份采收的异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的总含量最低。结论:不同产地、不同采收期枫香树叶中异槲皮苷和山奈酚-3-O-芸香糖苷的含量存在明显差异,应注意生长环境和采收季节对枫香树叶药材质量的影响。

HPLC法测定金钱草中紫云英苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素

目的建立HPLC-UV法测定金钱草中紫云英苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素。方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为甲醇–0.4%磷酸水,梯度洗脱,检测波长360 nm,体积流量0.5 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。结果紫云英苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素分别在22.10~176.80、21.14~169.12、17.40~174.00、51.12~408.96、23.30~186.40μg/mL呈现良好线性关系(R^(2)>0.9991);平均加样回收率分别为99.50%、100.39%、99.93%、105.58%、98.96%,RSD值分别为1.07%、1.44%、0.57%、0.24%、0.65%(n=6)。结论方法的重复性好,操作简单,结果准确,可以用来控制金钱草药材及其制剂的质量。

RP-HPLC测定芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的含量

目的:对芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷(tiliroside)的含量进行测定。方法:采用反相高效液相色谱,ZORBAX XDB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.1%醋酸水溶液(B),梯度洗脱,0～18 min A:B 26∶74,18～33 mim A:B 80∶20;流速1.0 mL.min-1,检测波长310 nm,柱温25℃。结果:山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷在进样量0.1~5.0μg与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=6)。山柰酚-3-O-β-D-(6″-P-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷的平均回收率101.50%,RSD 0.90%(n=6)。结论:该方法可准确地测定芫花中山柰酚-3-O-β-D-(6″-p-香豆酰)-吡喃葡萄糖苷,方法精密度高、简便、快速。

HPLC法测定布渣叶中牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定布渣叶中牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷含量。方法:采用KromasilC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,二元梯度洗脱,流速1.0mL.min-1,检测波长276nm,柱温35℃。结果:牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的线性范围分别为0.0412～0.412μg(r=0.9992)和0.0424～0.424μg(r=0.9991);平均回收率(n=9)分别为96.2%和96.0%。结论:该方法简便、准确,可用于布渣叶中牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷含量的同时测定。

牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的电喷雾飞行时间质谱研究

目的:研究牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的电喷雾质谱裂解规律。方法:利用超高效液相色谱串联电喷雾四极杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF/CID/MS/MS),结合源内碰撞诱导解离技术进行分析。结果:ESI-MS谱给出的主要是m/z431.095 8和m/z623.156 6的[M-H]-基峰。牡荆苷的CID-MS/MS显示了5个主要的特征碎片离子,其中3个对应于葡萄糖基的环破裂m/z353,341和311;另外2个分别为黄酮苄基离子m/z283,苷元离子m/z269。此外,还有2个低丰度的特征离子,即RDA裂解产生的m/z161和m/z117。异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的CID-MS/MS显示了有6个主要特征碎片离子,分别对应于鼠李糖基的中性丢失m/z477和芸香糖基的环破裂m/z387,357和311,以及异鼠李素苷元离子m/z315。此外,还有B环产生的m/z300和m/z271和C环产生的m/z243以及RDA裂解产生的m/z151和m/z125。结论:上述质谱裂解规律可作为牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的鉴定依据。

UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷大鼠肠道菌群代谢产物的研究

目的:分析异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷经体外培养大鼠肠道菌群代谢转化的产物。方法:在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷,采用HPLC检测代谢进程,采用超高效液相色谱串联电喷雾飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS-MS)对转化产物进行分析,结合对照品、化合物精确分子量和CID-MS-MS裂解碎片信息进行化合物结构解析。结果:从异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的大鼠肠道代谢产物中鉴定了槲皮素-3-O-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山奈酚和异鼠李素,另一化合物是否为5,7,3',4'-四甲氧基黄酮-3-O-葡萄糖苷还需进一步确证。结论:肠道菌群代谢对异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的转化主要是苷水解、脱羟基和甲基化,增加了化合物疏水性和化学多样性。

苦荞活性组分在SC-CO2/CH3OH中无限稀释扩散系数的测定及计算

为了测定苦荞活性组分(芦丁与山奈酚-3-O-芸香糖苷)在超临界二氧化碳-甲醇(SC-CO2/CH3OH)体系中的无限稀释三元扩散系数,采用色谱峰扩展法在温度为308.15~323.15K,压力为8~14MPa进行实验,考察了压力、温度、密度及夹带剂等因素对扩散系数的影响规律,结果表明三元扩散系数随压力、密度及夹带剂质量分数的升高而减小,随温度的升高而增大。分别采用了修正的Wilke-Chang、He-1997及Dymond-Hildebrand-Batschinski模型对相关溶质分子在SC-CO2/CH3OH中的三元扩散系数进行理论关联及预测,计算结果与实验数据比较发现,Dymond-Hildebrand-Batschinski模型的预测效果最佳,芦丁与山奈酚-3-O-芸香糖苷组分的平均绝对偏差分别为2.48%和3.71%。

HPLC法测定香椿叶中山柰酚-3-O-鼠李糖苷的含量

目的：建立测定香椿叶中山柰酚-3-O-鼠李糖苷含量的方法，为其质量控制提供参考。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Thermo Hypersil ODS（150mm×4．6mm，5um），流动相为甲醇-水（55：45，V／V），流速为1．0ml／min，检测波长为254nm，柱温为35℃。结果：山柰酚-3-O-鼠李糖苷的质量浓度在5．14-51．40μg／ml范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9997）；精密度、重复性、稳定性试验的RSD〈2％；平均加样回收率为96．77％～103．02％，RSD为3．75％～4．64％（n=3）。结论：该方法准确、重复性和稳定性好，可用于香椿叶中山柰酚．3．D．鼠李糖苷的含量测定。

UPLC-MS法同时测定玉簪花中3种成分

目的建立超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)法同时测定玉簪花中3种成分的含有量。方法玉簪花60%乙醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX RRHD Ecilipse Plus-C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱;检测波长265、350 nm;柱温30℃;体积流量0.4 mL/min。结果山柰酚、山柰酚-7-O-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷分别在0.08~2.5、0.16~5.0、3.75~120.0μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999),平均加样回收率96.4%~102.9%,RSD 1.2%~2.7%。结论该方法专属性强,重复性好,可用于玉簪花的质量控制。