长效山羊促卵泡素类似物真核表达载体的构建及其在CHO细胞内的稳定表达

通过PCR重叠延伸法将人绒毛膜促性腺激素(hCG)的羧基末端延长肽(CTP)基因连接至山羊促卵泡素(FSH)β亚基的羧基末端,克隆入双表达载体pVITRO,测序证实后将表达载体转染CHO细胞,用潮霉素B筛选稳定表达的CHO细胞株。结果表明获得了长效山羊FSH基因,并得到稳定表达的CHO细胞株,表达量为0.105mU/mL,为进一步研究CTP结构与功能的关系,以及长效激素的理化特性奠定了基础。

山羊重组促卵泡素长效类似物基因在毕赤酵母中表达

为了获得长效FSH制剂,利用重叠PCR技术将山羊FSH的α,β亚单位,通过hCGβ亚单位羧基末端延长肽(CTP)基因序列的连接,构建成单链长效类似物基因FSHβ-CTP-α。将其克隆至表达载体pPIC9K,重组载体线性化处理后电转化至毕赤酵母GS115中,经判型和G418筛选后获得高拷贝菌株His+Mut+。经甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析表明:重组FSHβ-CTP-α的转化子可以正确有效地表达目的蛋白,分子量约为29kD。放射免疫分析法(RIA)测定表达上清,高拷贝转化子的平均表达量为91.849mIU/mL,显著高于低拷贝转化子的平均37.419mIU/mL的表达量,为FSH的结构研究和长效FSH制剂的生产奠定了基础。

山羊FSH类似物基因构建及其表达

以HCGβ亚基羧基末端延长肽CTP基因为连接序列,重组山羊FSHα和β亚基基因,获得单链gFSHβ-CTP-α,克隆入表达载体pVITRO,测序后转染CHO细胞。结果表明,成功完成了单链山羊FSH类似物表达载体的构建,并得到稳定表达的CHO细胞株,其表达量为0.120 mIU/mL,为进一步研究CTP结构与功能的关系,以及长效FSH制剂的研制奠定了分子基础。

山羊FSH真核表达载体pVITRO-FSHαβ构建及在CHO细胞内稳定表达

在对山羊促卵泡素α、β亚基基因克隆和瞬时表达的基础上,构建促卵泡素αβ双表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary Cells,CHO),在潮霉素B的抗性筛选下,进行稳定表达,获得了稳定表达的CHO细胞株,为重组激素制剂的研制提供了必备条件。