山羊关节炎脑炎病毒甘肃株全基因组克隆和序列分析

根据GenBank中发表的山羊关节炎脑炎病毒CAEV-CO株(caprine arthritis encephalitis virus-CO,CAEV-CO)的全基因组序列(序列号:NC-001463),设计合成了7对引物,对CAEV甘肃株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果表明,CAEV-甘肃株基因组全长为9 186nt。与国际标准毒株CAEV-CO株相比,在编码区有12个碱基的缺失,二者的核苷酸同源性为91.0%;在非编码区有27个核苷酸的插入,核苷酸同源性为97.0%。gag、pol、蛋白Q、tat、env基因编码的氨基酸同源性分别为94.6%、94.7%、87.9%、94.7%和91.5%。

山羊关节炎脑炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立检测山羊关节炎脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus,CAEV)的快速诊断方法,本研究根据CAEV甘肃株Gag基因设计1对引物,并以含有CAEV甘肃株全基因组序列的质粒pUC57-CAEV为模板,建立CAEV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.19×109~1.19×10^1 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.997,斜率为-3.74,检测下限为1.19×10^1 copies/μL,且对痘苗病毒、山羊痘病毒均无扩增。重复性试验结果显示,批间与批内变异系数均小于1%,重复性好。本研究首次建立了CAEVGag基因的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法,为CAEV的快速检测和病毒感染预防提供了技术手段。

山羊关节炎-脑炎病毒P28蛋白的表达与间接ELISA方法的建立

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的CAEV P28蛋白作为检测抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对反应条件的优化建立了CAEV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对CAEV血清检测为阳性,对口蹄疫、山羊痘和蓝舌病病毒的阳性血清检测结果均为阴性;敏感性试验表明标准阳性血清1∶3 200倍稀释时,检测结果仍为阳性。该方法的批内和批间重复试验的变异系数分别小于7%和10%。对人工感染山羊血清进行检测,该ELISA方法最早可以在第2周检出抗体,琼脂凝集免疫扩散试验(AGID)最早可以在第4周检出抗体;与AGID试验方法相比,ELISA检出率提高27.2%。结果表明,本研究所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性,为该病的诊断和监测提供了有效的技术手段。

山羊关节炎-脑炎病毒甘肃株env基因的克隆和序列分析

本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。

奶山羊CAEV感染血清抗体的消长规律

【目的】研究山羊感染关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)后血清总抗体的消长规律,为CAEV检疫、净化方案的制订提供参考数据。【方法】采用我国分离的CAEV山东株(试验组)、参考株ATCC VR-905(参考株对照组)和细胞培养基(阴性对照组)经颈静脉注射感染3~5月龄关中奶山羊9只(每组3只),选用OIE推荐的CAEV/MVV总抗体检测试剂盒(IDEXX)定期检测抗体。【结果】阴性对照组始终为阴性,试验组和参考株对照组在感染后第24 d出现抗体转阳个体,试验组在第42 d时全部转阳,参考株对照组在第71 d时全部转阳,且在后续监测期内抗体OD值均处较高水平并。【结论】山羊感染CAEV后能够产生较好的体液免疫应答,前2个月内抗体水平差异较大,抗体刺激起来后将持续处在较高水平。血清中CAEV总抗体水平可作为山羊CAE检疫的判断标准,但必须进行间隔期不少于60 d的2次以上的检疫。

山羊关节炎-脑炎病毒陕西分离株全基因组的克隆和序列分析

为了解山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)陕西分离株全基因组的特点及基因演化变化,根据Gen-Bank中登录的CAEV CO株的全基因组序列,设计合成了5对引物,对CAEV陕西株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果显示,CAEV陕西株的基因组全长为9 065nt,获得的GenBank登录号为GU120138,包括两端的长末端重复序列,结构蛋白编码基因gag、pol、env和调节蛋白编码基因tat和rev,以及辅助蛋白编码基因vif。核苷酸序列比对表明,CAEV陕西株和CAEV甘肃株的同源性为99.6%,与CAEV CO株的同源性为92.4%,根据全基因组序列和gag基因序列构建的遗传进化分析结果显示,CAEV陕西分离株属于SRLV B2亚型。

三种动物慢病毒形态及形态发生的比较研究

用电镜检查确定了不同感染时间的马传染性贫血病毒 (EIAV)、维斯纳 梅迪病毒 (MVV)和山羊关节炎脑炎病毒 (CAEV)的形态和形态发生。成熟的病毒粒子为电子致密的球形 ,有囊膜 ,直径约 10 0nm ,含有 1个 (有时有 2个或 2个以上 )的核芯。维斯纳 梅迪病毒和山羊关节炎脑炎病毒的核芯为球形 ,马传染性贫血病毒为杆形或锥形。在大部分病毒里能清晰地看到核芯壳 ,成熟的病毒从感染细胞的胞浆膜上出芽 。

小反刍动物慢病毒通用PCR检测方法的建立与初步评价

为建立通用的小反刍动物慢病毒(山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒)病原学检测技术方法,本研究对Gen Bank公布的31株小反刍动物慢病毒前病毒基因组序列进行比对,筛选出vif基因上约150 bp的序列作为诊断标记物并设计简并引物;通过全基因合成方法获得该序列作为PCR反应的阳性对照模板,以此建立了小反刍动物慢病毒PCR检测方法,研究结果初步证实其可用于山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒野毒株RNA和前病毒DNA的检测,说明该方法有望用于我国小反刍动物慢病毒病的检测与流行病学调查。

羊梅迪-维斯纳病及其防控策略

小型反刍动物慢病毒主要包括绵羊Maedi-Visna病毒和山羊关节炎脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus)。这两种病毒感染进展缓慢,通常是亚临床的。如今的分子流行病学研究表明,这两种病毒经历一系列变异后,在野外通常只能够感染绵羊的某些病毒经过变种可以感染山羊,已经有研究表明,变种会发生自然的跨物种感染。

应用ELISA检测血清和乳样抗体

法国学者Benoit等应用ELISA检测血清和乳样中抗山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)抗体。被检样本采集于368头山羊,其中乳样包括鲜乳和冷藏乳(加溴硝丙二醇防腐)。经检测,血清、鲜乳冷藏乳的抗体阳性数分别为216份(58.7％)、192份(52.2％)和190份(51.6％)。与血清样本相比。