MiR-143在山羊卵巢组织中的表达及功能分析

旨在分析miR-143在妊娠与非妊娠山羊卵巢组织中的表达情况,并探讨其在山羊卵巢功能发挥以及其他生物学过程中所起的作用。采用Solexa测序及荧光定量PCR技术在妊娠和非妊娠山羊卵巢组织中检测miR-143的表达水平,并对其进行靶基因预测和GO富集分析。Solexa测序在山羊卵巢中检测到miR-143的表达,共发现miR-143及其异构体1 074个,总拷贝数为109 523,平均拷贝数为102;定量结果显示miR-143在妊娠山羊卵巢中的表达量是非妊娠山羊的12倍且差异显著(P<0.05);GO分析表明miR-143广泛参与机体生殖发育、细胞增值分化等多个生物学过程。miR-143在妊娠山羊卵巢中的表达水平显著高于非妊娠山羊,而且其可能在卵巢激素分泌与作用应答、妊娠维持等生殖生物学过程中发挥潜在作用。

miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响

旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制。本研究选取健康的3~4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA分析颗粒细胞的雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌,采用qRT-RCR、Western blot检测细胞凋亡、增殖、周期及类固醇激素合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平。结果显示,miR-495-3p显著促进卵巢颗粒细胞凋亡(P<0.01),并且促进BAX表达(P<0.05),抑制BCL2表达(P<0.01);过表达miR-495-3p呈时间依赖性抑制细胞增殖活力,显著降低PCNA的表达(P<0.05);过表达miR-495-3p显著增加G2/M期细胞百分比(P<0.05),并显著降低细胞周期相关基因CDK4(P<0.001)和CCND1(P<0.05)的mRNA水平,抑制miR-495-3p极显著降低CCNE1的mRNA水平(P<0.01);miR-495-3p促进颗粒细胞E2和P4分泌;过表达miR-495-3p显著提高3β-HSD(P<0.001)、CYP11A1(P<0.01)、CYP19A1(P<0.05)的mRNA和蛋白表达水平,干扰miR-495-3p极显著抑制3β-HSD(P<0.01)、促进CYP11A1的表达(P<0.01)。上述结果表明,miR-495-3p促进颗粒细胞凋亡,抑制增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,刺激类固醇激素分泌,从而影响山羊卵泡的发育。

miRNA-148a-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响

为探究miRNA-148a-3p在山羊卵巢颗粒细胞中的作用,通过过表达或抑制miRNA-148a-3p、qRT-PCR、Western blot、流式细胞术、ELISA等方法,探究miR-148a-3p对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、自噬及类固醇激素分泌的影响。结果发现,过表达miR-148a-3p显著促进卵巢颗粒细胞增殖和PCNA表达,抑制miR-148a-3p显著抑制卵巢颗粒细胞增殖和PCNA表达。过表达miR-148a-3p抑制卵巢颗粒细胞凋亡,极显著下调细胞凋亡率,显著上调Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白比值,抑制miR-148a-3p促进卵巢颗粒细胞凋亡。过表达miR-148a-3p显著促进卵巢颗粒细胞自噬,上调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,抑制miR-148a-3p上调p62表达。过表达miR-148a-3p显著促进卵巢颗粒细胞孕酮分泌,并上调3β-HSD、StAR、CYP11A1的mRNA和蛋白表达。虽然抑制miR-148a-3p下调孕酮水平,但对3β-HSD、StAR、CYP11A1及CYP19A1的mRNA和蛋白表达无显著性影响。结果表明,miR-148a-3p可促进卵巢颗粒细胞增殖、抑制细胞凋亡、诱导自噬并刺激孕酮的合成。

四环素-雌酮对去卵巢山羊髂骨的有利作用

目的切除山羊双侧卵巢(OVX山羊)建立绝经后骨质疏松(PMO)动物模型,应用骨组织形态计量学方法观察OVX山羊对四环素-雌酮(XW630)的治疗反应。方法31只雌性山羊随机分成4组,即正常对照组、假手术组、OVX术后6个月组、XW630治疗6个月组,制备山羊髂骨不脱钙骨切片,应用骨组织形态计量学方法,观察各组髂骨骨计量学参数的变化。结果正常对照组和假手术组比较各参数间差异无显著性。与正常对照组和假手术组比较,OVX术后6个月组的骨小梁体积比全部骨组织体积(TBV/TTV)、骨小梁体积比海绵骨体积(TBV/SBV)、平均骨小梁板厚度(MTPT)、四环素双标线距离(DDL)、平均类骨质宽度(MOSW)、骨矿化沉积率(MiAR)和组织水平的骨形成速率(Svf)显著减少(Svf:P<0.05,其余各参数:P<0.01),骨小梁表面比体积(S/V)则显著增加(P<0.01),说明去卵巢后山羊骨量丢失,骨小梁体积明显减小,骨小梁厚度下降、连接性降低,骨转换率降低,激活频率减慢,骨形成明显减少,表现为低转化型骨质疏松的骨代谢特征。骨质疏松山羊模型复制成功。与OVX术后6个月组相比,XW630治疗6个月组的TBV/TTV,TBV/SBV,MTPT,DDL,MOSW,MiAR和Svf显著增加(P<0.01),S/V,骨矿化延迟时间(MLT)显著减少(P<0.01);与假手术组相比,XW630治疗6个月组的TBV/TTV,TBV/SBV显著减少(P<0.01)。结论XW630有增加骨量,改善骨小梁空间结构,增加骨强度,提高骨激活频率,促进类骨质生成及矿化,增强成骨细胞活性的作用。

去卵巢骨质疏松山羊骨髓基质细胞成骨分化能力的研究

目的：研究在构建的去卵巢骨质疏松山羊动物模型中,骨髓基质细胞(MSCs)的生物学特性以及其成骨能力。方法：建立去卵巢骨质疏松山羊动物模型,使用全骨髓法获取去卵巢骨质疏松山羊(实验组)和正常山羊(对照组)MSCs,流式细胞仪检测实验组和对照组细胞用期及增殖指数(PI)；地塞米松诱导21d时油红O染色,观察成脂分化比例；成骨诱导液诱导14d,碱性磷酸酶(ALP)染色、检测ALP表达量。结果：对照组PI高于实验组；地塞米松诱导后实验组脂肪细胞比例明显高于对照组；成骨诱导第7d,对照组ALP的表达量明显高于实验组。结论：去卵巢骨质疏松山羊的MSCs增殖和成骨分化能力都降低,可能与骨质疏松症的发病机理有关。

四环素-雌酮对去卵巢山羊髂骨的有利作用

目的 山羊双侧卵巢切除 (OVX)建立绝经后骨质疏松 (PMO)动物模型 ,应用骨组织形态计量学方法观察OVX山羊对四环素 雌酮 (XW 63 0 )的治疗反应。方法 3 1只雌性山羊随机分成 4组 ,即正常对照组、假手术组、OVX术后 6个月组、XW 63 0治疗 6个月组。在处死前第 2 1天和第 9天 ,给山羊口服四环素以标记骨组织和进行动力学研究。制备山羊髂骨不脱钙骨切片 ,应用骨组织形态计量学方法 ,观察各组髂骨骨计量学参数的变化。结果 与正常对照组和假手术组比较 ,OVX术后 6个月组的骨小梁体积比全部骨组织体积 (TBV/TTV)、骨小梁体积比海绵骨体积 (TBV/SBV)、平均骨小梁板厚度 (MTPT)、四环素双标线距离 (DDL)、平均类骨质宽度 (MOSW )、骨矿化沉积率 (MiAR)和组织水平的骨形成速率 (Svf)显著减少 (Svf:P <0 .0 5 ,其余各参数 :均P <0 .0 1) ,骨小梁表面比体积 (S/V)则显著增加 (P <0 .0 1) ,说明OVX山羊骨量丢失 ,骨小梁体积明显减小 ,骨小梁厚度下降、连接性降低 ,骨转换率降低 ,激活频率减慢 ,骨形成明显减少 ,表现为低转化骨质疏松的骨代谢特征。以上结果提示 ,骨质疏松山羊模型复制成功。与OVX术后 6个月组相比 ,XW63 0治疗 6个月组的TBV/TTV ,TBV/SBV ,MTPT ,DDL ,MOSW ,MiAR和Svf显著增加 (均P <0 .0 1)

Qualitative and quantitative analysis of goat ovaries, follicles and oocytes in view of in vitro production of embryos

Goat ovaries were collected from the slaughterhouse and categorized as right, left, corpus luteum （CL）-present and -absent group and evaluated on the basis of weight （g）, length （cm）, width （cm）, number of follicles, follicles aspirated and number and state ofcumulus-oocyte-complexes （COCs）. Comparatively higher weight [（0.66±0.02） vs （0.64±0.02） g], length [（1.17±0.02） vs （1.1 ±0.02） cm] and width [（0.77±0.02） vs （0.74±0.02） cm] were found in right ovaries than those of left. On the other hand significantly （P〈0.05） higher weight [（0.71±0.03） vs （0.64±0.01） g] and width [（0.76±0.03） vs （0.75±0.01） cm] were found in CL-present group than those of CL-absent group of ovaries. The left ovaries contained comparatively higher number of normal COCs [（1.06±0.09） per ovary] than fight ovaries [（1.03±0.10） per ovary] and the similar trend was found in total number of follicles [（4.51±0.25） vs （4.30±0.23） per ovary] and follicles aspirated [（2.55±0.14） vs （2.52±0.12） per ovary]. But the total COCs per ovary was almost similar in both ovaries [right and left： （1.85±0.12） and （1.85±0.11） per ovary, respectively]. Higher number of total COCs [（1.87±0.09） vs （1.76±0.16） per ovary], total number of follicles [（4.45±0.19） vs （4.16±0.37） per ovary], follicles aspirated [（2.55±0.10） vs （2.48±0.21） per ovary] and normal COCs [（1.12±0.07） vs （0.76±0.14） per ovary] were found in CL-absent group than those of CL-present group of ovaries.