山羊干扰素-τ的原核表达及其在猫肾细胞中的抗病毒效果检测

为制备重组山羊干扰素-τ(rGoIFN-τ)并检测其在猫肾细胞(F81)中的抗病毒活性,本研究根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成GoIFN-τ基因后,将该基因克隆至pColdII载体,获得重组质粒pColdII-rGoIFN-τ,经鉴定正确后将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达后SDS-PAGE鉴定,利用镍离子亲和层析柱纯化蛋白,纯化的rGoIFN-τ经western blot检测后采用BCA法测定蛋白浓度。结果显示,rGoIFN-τ在大肠杆菌DE3中得到可溶性高效表达,表达量占菌体总蛋白的28.70%,纯化后蛋白浓度为100 mg/L,且具有良好的反应性。采用CCK8法检测rGoIFN-τ对F81细胞活力的影响,结果显示,其在0.0055 ng/mL~5500 ng/mL时对细胞的活力基本无影响。以水疱性口炎病毒(VSV)为模式病毒感染已与rGoIFN-τ共孵育24 h后的F81细胞,通过微量细胞病变抑制法检测rGoIFN-τ在F81/VSV系统中的抗病毒活性,结果显示,rGoIFN-τ抗VSV活性单位数为4.55×105 U/mg。经不同浓度的rGoIFN-τ(55 ng/mL、550 ng/mL、5500 ng/mL)共孵育后的F81细胞分别感染VSV,经Reed-Muench法和荧光定量PCR法检测rGoIFN-τ的抗病毒能力,结果显示,感染24 h和48 h后rGoIFN-τ可显著抑制VSV的病毒滴度和VSV-L基因转录水平(P<0.05),尤其是5500 ng/mL rGoIFN-τ的作用最佳。综上所述,本研究实现了rGoIFN-τ原核可溶性高效表达,并首次证实其在猫F81细胞中具有较好的抗病毒活性,为进一步研究rGoIFN-τ在猫抗病毒性感染中的作用奠定了基础。