一株山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定与分子特征

从送检的山羊肺炎肺脏中成功分离到一株支原体,经过3次克隆纯化后进行生化试验、电镜观察、PCR及酶切、基因特征鉴定,结果显示分离物SD3属于山羊支原体山羊肺炎亚种成员。将培养物经气管接种2只山羊可引起1只山羊典型发病,体温升高至41.5℃,IgG和IgM抗体效价明显升高,其中IgG抗体变化与临床表现基本同步。剖检发现肺脏发生严重病变,并从中再次分离到该病原体。

山羊支原体性肺炎流行病学调查

山羊支原体性肺炎是威胁山羊养殖的重要传染病,为了解其流行情况,对四川省主要山羊养殖地区的山羊支原体性肺炎进行了流行病学调查。从四川省7个地区山羊养殖场采集肺脏和鼻腔棉拭子样本共135份,经过分离鉴定得到42株支原体,其中绵羊肺炎支原体36株,丝状支原体6株;其中6个羊场仅分离到绵羊肺炎支原体,1个羊场同时分离到绵羊肺炎支原体和丝状支原体。本试验结果表明,绵羊肺炎支原体是引起四川省山羊支原体性肺炎的主要病原,个别地方存在绵羊肺炎支原体和丝状支原体混合感染。

山羊支原体山羊肺炎亚种湖北株的鉴定及其外膜蛋白的免疫原性研究

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并用抗Y98血清和抗PG3血清进行比较,筛选GH2株特异性的外膜蛋白,结果表明GH2株为山羊支原体山羊肺炎亚种,存在于GH2外膜蛋白中的相对分子质量大约为60和49.7ku的蛋白可能是其主要的免疫原性蛋白,也是GH2株区别于丝状支原体山羊亚种标准株PG3和绵羊肺炎支原体标准株的主要特异性抗原。这一结果为山羊支原体山羊肺炎亚种的诊断和疫苗研制提供了良好的理论基础。

从山羊中检测山羊支原体山羊肺炎亚种

山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasmacapricolumsub—sp．capripneumonia，Mccp）最早由MacOwan和Minette于1976年分离，是引起山羊传染性胸膜肺炎（Contagiouscap—rineplemopneumonia，CCPP）的病原体。CCPP是山羊的一种急性或慢性呼吸道传染病，以纤维素性胸膜怖炎为主要特征，被感染羊群无年龄和性别差异，发病率和死亡率都很高。该病的发生最早可追溯到1873年的阿尔及利亚，现广泛流行于非洲和亚洲养羊国家，危害极大，被世界动物卫牛组织（OIE）列入重要疾病名录。

山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定

从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中采集12个鼻拭子及4个肺组织病料,进行病原分离培养和特异性PCR检测。结果从9个鼻拭子和4个肺组织中分离到支原体,经鉴定均为绵羊肺炎支原体,未发现丝状支原体簇成员及多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌。结果表明,绵羊肺炎支原体是引起该山羊群发生胸膜肺炎的病原,同时说明绵羊肺炎支原体也是山羊支原体性肺炎的重要病原之一。

一种山羊支原体山羊肺炎亚种多重抗原肽的小鼠免疫试验

旨在构建一种由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum Subsp.capripneumoniae,Mccp)六个B细胞表位和三个T细胞表位组成的多重抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),将其在大肠杆菌中表达后免疫小鼠,评估其体液免疫和细胞免疫。分别用MAP、单个B细胞表位及全菌超破抗原作为抗原,检测免疫小鼠抗体水平,结果显示三种抗原均能和小鼠免疫血清发生很好的反应(P<0.01)。体外代谢抑制试验显示,1∶64倍稀释的免疫小鼠血清可以有效抑制Mccp的生长。淋巴细胞增殖试验显示,当用单个T细胞表位及Mccp超破抗原分别刺激免疫小鼠的淋巴细胞时均产生明显的增殖现象(P<0.01)。细胞因子检测结果显示,免疫小鼠的IFN-γ、TNF-α、IL-1β和IL-10产量明显升高(P<0.001),而IL-12产量明显下降(P<0.001)。数据显示,构建的MAP能够引起小鼠的免疫反应,这一结果为由Mccp引起的山羊传染性胸膜肺炎亚单位疫苗的研制奠定了一定的基础。

山羊的绵羊肺炎支原体的分离和鉴定

[目的]了解安徽省某山羊场肺炎症状的发生原因。[方法]从安徽省某山羊场采集病料样品,从山羊肺脏组织中分离致病菌并进行纯化,并通过形态学观察、生化试验、PCR对其进行鉴定。[结果]成功从患有肺炎的山羊肺脏组织中分离出致病菌,通过形态学观察、生化试验和PCR鉴定为绵羊肺炎支原体。[结论]该研究可为安徽省山羊支原体肺炎的防控及病原学研究提供科学依据。

丝状支原体山羊亚种最佳培养基的筛选

在不同条件下对丝状支原体山羊亚种进行培养,通过PPLO精氨酸培养基、牛心汤培养基、MEM-KM2培养基以及不同种类动物血清和同一动物不同浓度血清,从生长滴度、生长速度、培养基来源、造价各个方面的比较试验,结果显示,加100 mL/L马血清的MEM-KM2培养基更适合于丝状支原体山羊亚种的培养,它的生长滴度可达109,所需时间只为5 d,并且配置方便,价格合理。这一结果为丝状支原体山羊亚种抗原的大批量生产奠定了良好的基础。

青海省山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测

[目的]调查山羊传染性胸膜肺炎在青海省的流行状况。[方法]利用山羊支原体山羊肺炎亚种抗体检测间接血凝试剂盒对青海各地区的208份山羊血清进行检测。[结果]山羊血清阳性率为16.3%,不同地区山羊的阳性率范围为6.7%～24.3%。[结论]青海地区的山羊支原体山羊肺炎亚种的感染率较高,应该加强对该病的防控。

丝状支原体山羊亚种抗体间接血凝检测方法的建立及应用

将丝状支原体山羊亚种PG3株经超声波破碎处理后的产物致敏经戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测丝状支原体山羊亚种抗体的间接血凝试验方法。抗原致敏红细胞的最佳浓度是100～125μg/mL,超免血清抗体效价达1:512～1:1024。免疫山羊2周后血清抗体检出率为83.3%,对羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体阳性血清检测均为阴性,敏感性明显高于琼脂扩散试验。对628份田间血清进行检测,阳性率为44.9%。结果表明,该法敏感性较高、特异性强和重复性好,可用于山羊传染性胸膜肺炎免疫抗体水平的监测和流行病学调查。

重庆地区山羊嗜血支原体(附红细胞体)感染率调查及危险性因素评估

为调查山羊嗜血支原体(附红细胞体)在重庆地区的感染率并评估危害其感染的因素,本研究将采集于重庆14个区县的共1191份山羊血液样本,分别采用染色镜检和PCR方法进行检测,并对不同养殖方式和地理条件进行分析。结果显示:山羊嗜血支原体感染率为16.1%,其中丘陵地区感染率(13.7%)低于山区(18.6%),规模化养殖场感染率(14.3%)低于农户散养(17.1%)。危险性因素分析结果显示:山区山羊嗜血支原体感染率是丘陵地区的1.43倍(OR1.43,95%CI1.05-1.95;χ2=5.13,d.f.=1,p=0.02),并且差异显著;农户散养山羊嗜血支原体感染率是规模化养殖的1.23倍(OR1.23,95%CI0.88-1.71;χ2=1.51,d.f.=1,p=0.22),差异不显著。表明不同的地理条件与山羊嗜血支原体感染率密切相关。

山羊源绵羊肺炎支原体的耐药谱型分析

采用微量稀释法对从四川自贡、简阳、乐至等地分离的33株山羊源性绵羊肺炎支原体进行19种抗菌药物MIC值测定,试验数据利用WHONET5.4软件处理并分析其耐药谱型。试验结果表明,33株绵羊肺炎支原体对19种抗菌药物表现出多重耐药性,其耐药谱型以耐氯霉素、链霉素、红霉素、头孢噻呋、阿米卡星、利福平为主,约占78.79%。

山羊主要支原体感染的研究

山羊支原体感染普遍发生于世界各养羊国家和地区,山羊支原体病主要有传染性无乳症、山羊传染性胸膜肺炎、绵羊传染性胸膜肺炎、传染性角膜结膜炎等。虽然这些疾病导致的死亡率低,但却给养羊业造成了巨大的经济损失。文章简述了无乳支原体、绵羊肺炎支原体、丝状支原体簇和结膜支原体等几种在临床上主要感染山羊的支原体,以及它们感染病畜后的临床症状、病理变化、诊断及预防治疗。

山羊支原体山羊肺炎亚种培养基的筛选及生长曲线测定

为筛选出山羊支原体山羊肺炎亚种的适宜培养基,将山羊支原体山羊肺炎亚种分离株M1601分别接种Thiaucourt肉汤、MEM-KM2和TSA 3种不同的培养基,测定其在3种不同培养基中生长滴度、生长速度,并测定了M1601在最适培养基中在不同培养阶段的生长滴度。结果表明,添加2g/L丙酮酸钠和150mL/L马血清的Thiaucourt肉汤培养基最适宜山羊支原体山羊肺炎亚种的生长,生长滴度可达109 CCU/mL,在培养6h后开始进入对数生长期,培养60h后进入稳定期,培养72h时后进入衰亡期。此试验结果为山羊支原体山羊肺炎亚种培养特性研究提供了参考数据。

丝状支原体山羊亚种FJ-GT株的分离和鉴定

为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S r RNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起;分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,血细胞吸附试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性,溶血试验为β溶血;PCR结果扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)特异大小为394 bp的目的片段;菌株16S r RNA序列与丝状支原体山羊亚种标准株PG3的序列比较,同源性为99.5%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为丝状支原体山羊亚种。本研究首次从病原学角度证明了福建省存在由丝状支原体山羊亚种引起的羊支原体性肺炎,对福建省羊支原体性肺炎的诊断和有效防控具有重要的指导意义。

山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。

山羊支原体山羊肺炎亚种重组酶聚合酶扩增技术的建立

为检测山羊传染性胸膜肺炎,选择Mccp-arcA假基因作为靶基因,用Primer 3 plus设计筛选生物素标记的特异引物和荧光素标记的探针,将双标记扩增产物结合到核酸检测试纸条,通过优化反应温度和时间,建立了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的重组酶聚合酶扩增技术,对其灵敏度、重复性、准确性和特异性进行了试验,并初步用于临床样品的检测。结果显示,山羊传染性胸膜肺炎核酸阳性样品能够在核酸检测试纸条上显示阳性条带,阴性样品无条带。试验具有良好的重复性和敏感性(达到10 copies/μL)。用建立的重组酶聚合酶扩增技术与普通PCR方法同时检测疑似山羊传染性胸膜肺炎8份样品,结果均为3份阳性和5份阴性,符合率100%。该检测方法适用于山羊传染性胸膜肺炎的快速诊断,为Mccp的快速检测提供了新的技术。

山羊传染性胸膜肺炎支原体和绵羊肺炎支原体对抗菌药物敏感性的研究

测定了环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素、罗红霉素、泰乐菌素、泰妙菌素、四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y 98和Y goat的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y goat和四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y 98的联合药敏作用。结果表明,这8种抗菌药物对Y goat和Y 98的MIC(μg/mL)分别为:环丙沙星0.223、0.00223,氧氟沙星0.281、0.0140,单诺沙星0.136、0.0140,红霉素0.0218、无效,罗红霉素0.0327、无效,泰乐菌素0.0422、0.0390,泰妙菌素0.0217、0.0520,四环素0.195、0.0520。红霉素与氧氟沙星的联合药敏指数为1,是相加作用;红霉素与泰乐菌素对Y goat的联合药敏指数为1.5,是无关作用;四环素与氧氟沙星、泰乐菌素对Y 98的联合药敏试验指数均为0.375,是协同作用。

利用PCR技术检测波杂肉山羊中的绵羊肺炎支原体

在江苏省泰州市某波杂肉山羊场开展了疑似山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)感染的流行病学调查、病理剖检,并以疑似病例肺病变组织、胸腔渗出液、心包液为病料,采用PCR技术检测,证实泰州地区山羊传染性胸膜肺炎病原中存在绵羊肺炎支原体,同时为当地临床诊断该病提供了分子生物学方法。

山羊支原体山羊肺炎亚种的PCR测定及动物回归试验

江苏省泰州市肉山羊养殖业时常发生山羊支原体性肺炎,基于临床上山羊支原体性肺炎病原的多样性以及支原体分离培养的困难性,以疑似山羊支原体肺炎病例肺组织、胸腔渗出液、心包液为病料,采用PCR技术检测并进行动物回归试验,首次证实泰州地区山羊支原体性肺炎病例中存在山羊支原体山羊肺炎亚种病原,为当地临床防治该病提供了科学依据。