山茱萸总甙滴眼液眼内药代动力学及药效学的实验研究

目的 :研制出山茱萸总甙 (COG)滴眼液 ,对该滴眼液的药代动力学进行研究 ,并观察其局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :用高效液相色谱法对该滴眼液的药代动力学参数进行研究。建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,随机分为 4组 :A组为空白对照组 ,B、C、D组分别为使用质量分数 0 5 %、1%和 2 %COG滴眼液组。用裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜排斥反应发生时间。结果 :COG滴眼液在新西兰白兔眼内为一室模型 ,主要药代动力学参数为 :A =4 316 μg/mL ,Ke=2 0 5 6h- 1,Ka=2 5 79h- 1,LagTime =0 198h ,t1/ 2 ,Ka=0 0 2 3h ,t1/ 2 ,Ke=0 2 5 7h ,Tmax=0 986h ,ρmax=1 2 94 μg/mL ,AUC =1 6 0 1μg·h/mL ,其拟合的动力学方程为 ρ(t) =10 6 0 5×Dose×(e- 2 0 56× (t- 0 198) -e- 2 579× (t- 0 198) )。术后各组发生角膜移植排斥时间 ,A组与B、C、D组、B组与C、D组、C组与D组间两两比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。其中作用最强的为C组。结论 :COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应。COG滴眼液眼内有效峰浓度出现在点药后 0 986h 。

山茱萸总甙对去势大鼠骨生物力学影响的实验研究

目的:以去势大鼠为研究对象,通过观察骨生物力学指标的变化以探讨山茱萸总甙对骨质疏松症的治疗机制。方法:将50只Wister大鼠随机分为5组,即假手术组,模型组,山茱萸总甙高剂量组,山茱萸总甙中剂量组及山茱萸总甙低剂量组。造模后,山茱萸总甙组依剂量每日灌胃给药。各组大鼠在灌胃满3个月后取双侧胫骨和股骨,进行骨生物力学实验。结果:山茱萸总甙各剂量组最大载荷、最大应力、最大变形和伸长率均明显优于模型组。结论:山茱萸总甙对去势后大鼠的骨生物力学指标有良性调整作用。

山茱萸总甙滴眼液防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 :观察山茱萸总甙 (COG)滴眼液局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,用裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜排斥反应发生时间 ;并进行病理学和扫描电镜检查。结果 :病理学检查B、C组 15d时的角膜植片淋巴细胞浸润及新生血管明显少于A组。免疫组化显示 :ICAM - 1的表达在 15d时B、C组明显少于A组。结论 :COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应。

山茱萸总甙滴眼液局部应用的兔眼通透性研究

目的 本研究首次研制出山茱萸总甙 (cornus officinalis glycosides,COG)滴眼液 ,并用高效液相色谱法 (high performance liquid chromatography,HPLC)对不同剂量该滴眼液在兔眼房水经时过程的异同进行研究。方法 将 3种不同剂量 COG滴眼液 50 μL分别滴入 3组兔眼下睑结膜囊内 ,在 4h内定时采取房水作为测试样本 ,经处理后 ,用高效液相色谱仪测定样本中的没食子酸的质量浓度。结果 COG滴眼液滴眼后 ,能被吸收进入房水。给药后 1 h时 ,3组房水药物浓度均为最高值。统计分析显示 :A组 (5g· L-1COG)与 B(1 0 g· L-1COG)、C(2 0 g·L-1COG)组之间有显著差异性 (P<0 .0 5)。结论 COG滴眼液滴眼能被吸收进入房水 ,在给药 1 h时 。

山茱萸总甙对实验性变态性脑脊髓炎大鼠外周一氧化氮的影响

[目的]初步观察山茱萸总甙(TGCO)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠及外周血清一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响。[方法]将Wistar大鼠分为3组:Control组、EAE组和TGCO组,采用动物行为学、常规HE和Luxol Fast Blue(LFB)染色观察动物的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化,硝酸还原酶法观察血清NO的变化。[结果]EAE组7只大鼠出现典型的EAE行为学改变、CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失,而TGCO组只有3只大鼠出现EAE行为学改变,评分最高为2分,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润和髓鞘明显减轻。Control组未见上述变化。EAE组大鼠总血清NO值明显升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.001);TGCO组大鼠血清NO值(109.83±68.03),与EAE组比较有统计学差异(P<0.05)。[结论]TGCO对EAE大鼠有抑制作用,可能与抑制血清NO合成有关。

山茱萸总甙干预骨质疏松模型大鼠骨代谢:TRPV6、TRPV5通路的变化

背景:钙离子通道的调控直接影响骨的代谢,但骨代谢与TRPV6、TRPV5通路的联系及相互作用目前尚未明确。研究认为山茱萸具有防治骨质疏松作用。目的:探讨山茱萸总甙调节TRPV6、TRPV5通路表达防治骨质疏松症的机制。方法:健康6月龄雌性SD大鼠50只,体质量(350±15) g,由广州中医药大学实验动物中心提供。随机将大鼠分为5组,即正常对照组,模型组,山茱萸总甙干预低剂量组、中剂量组及高剂量组。除正常对照组外,其余各组大鼠行双侧卵巢切除术建立骨质疏松模型。造模后山茱萸总甙干预各组依剂量每天予药物灌胃,正常对照组及模型组予等量生理盐水灌胃,共12周。实验结束时,双能X射线骨密度仪扫描各组大鼠获取骨密度,取右侧股骨组织RT-PCR检测TRPV6、TRPV5 RNA基因表达情况。结果与结论:(1)山茱萸干预各组大鼠骨密度均较模型组提高(P<0.05);(2)各组大鼠骨组织均有TRPV6、TRPV5表达,其中山茱萸总甙干预各组TRPV6、TRPV5表达均较正常对照组及模型组增加,以中剂量组表达升高最明显,但高剂量组TRPV6/TRPV5倍比关系为最高,成骨效能最好;(3)结果说明,山茱萸总甙可调节骨质疏松大鼠骨组织TRPV6、TRPV5通道蛋白表达,改变TRPV6/TRPV5倍比关系,影响成骨细胞和破骨细胞功能,促进成骨方向的骨代谢转变及提高骨密度。

山茱萸总甙的抗炎免疫抑制作用

为了研究山茱萸总甙的体内抗炎免疫抑制作用，进行实验。发现总甙２、１ｇ／ｋｇ剂量时能显著地抑制ＮＩＨ小鼠单核吞噬系统对刚果红的廓清（Ｐ＜００１）。１００、０５０、０２５ｇ／ｋｇ以及４０、２０ｇ／ｋｇ各个剂量时，能分别显著抑制角叉菜胶所致小鼠及大鼠足爪肿胀（Ｐ＜００１，Ｐ＜００５）；而在０６、０３ｇ／ｋｇ剂量时，能明显抑制由弗氏完全佐剂诱导的关节炎所引起的注射局部的早期炎症反应和１２ｄ后的再度肿胀（Ｐ＜００１；Ｐ＜００５），又明显抑制另侧后肢因迟发性超敏反应所引起的足肿胀（Ｐ＜００１；Ｐ＜００５）；当０１５ｇ／ｋｇ剂量时，连续给药１２ｄ后，表现出对再度肿胀及另侧后肢肿胀的明显抑制作用（Ｐ＜００１；Ｐ＜００５），且具有一定的量效关系。证明了山茱萸总甙有良好的抗炎免疫抑制作用。

基于TGF-β_(1)/CTGF信号通路探讨山茱萸总甙对人骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的基于转化生长因子-β1(TGF-β_(1))/结缔组织生长因子(CTGF)信号通路观察山茱萸总甙对人骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法2020年4—5月于海南省儋州市人民医院实验室进行实验。取软骨组织培养软骨细胞,而后分为OA软骨细胞组、罗非昔布组(200μg/ml)及山茱萸总甙低、高剂量组(200、400μg/ml);各组细胞分别设6个平行样,培养72 h。培养结束后,噻唑蓝(MTT)染色测定细胞活力,吉姆萨染色测定细胞群落数,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(WB)法测定OA软骨细胞TGF-β_(1)、CTGF mRNA和蛋白表达水平。结果与OA软骨细胞组比较,罗非昔布组及山茱萸总甙低、高剂量组OD值、存活率、群落数明显升高(F/P=15.635/0.000、54.547/0.000、156.632/0.000),凋亡率、TGF-β_(1)及CTGF的mRNA和蛋白表达水平明显降低(F/P=54.236/0.000、36.214/0.000、39.365/0.000、19.541/0.000、23.547/0.000);与罗非昔布组比较,山茱萸总甙低剂量组OD值、存活率、群落数明显降低(q/P=8.954/0.000、8.321/0.000、149.651/0.000),凋亡率及TGF-β_(1)、CTGF mRNA和蛋白表达水平明显升高(q/P=23.458/0.000、8.654/0.000、14.548/0.000、15.458/0.000、22.154/0.000);山茱萸总甙高剂量组OD值、存活率、群落数、凋亡率及TGF-β_(1)、CTGF mRNA和蛋白表达水平与罗非昔布组比较差异无统计学意义(P>0.05);且山茱萸总甙高剂量组OD值、存活率、群落数高于山茱萸总甙低剂量组(q/P=10.654/0.000、8.324/0.000、89.695/0.000),凋亡率及TGF-β_(1)、CTGF mRNA和蛋白表达水平低于山茱萸总甙低剂量组(q/P=38.419/0.000、16.874/0.000、25.654/0.000、19.545/0.000、26.524/0.000)。结论山茱萸总甙能明显促进人骨关节炎软骨细胞增殖,抑制其凋亡,且呈剂量依赖性;其机制与山茱萸总甙抑制人骨关节炎软骨细胞TGF-β_(1)/CTGF信号通路激活有关。

山茱萸总甙对正常小鼠T淋巴细胞免疫功能影响的实验研究

研究了从山茱萸中提取的山茱萸总甙对正常小鼠T淋巴细胞及其亚群和产生IL 2的影响 ,以期探讨山茱萸总甙的免疫抑制机理。结果表明 :山茱萸总甙不同剂量均可抑制T淋巴细胞增殖(P <0 0 1)、T淋巴细胞膜表面CD3的表达 (P <0 0 1)和抑制T淋巴细胞膜表面CD4、CD8的表达(P <0 0 5或P <0 0 1) ,中大剂量还可以提高CD4 /CD8的比值 ,说明山茱萸总甙抑制CD8的作用比抑制CD4的作用更明显。不同剂量的山茱萸总甙还可以抑制T淋巴细胞产生IL 2 (P <0 0 5或P <0 0 1)。抑制IL 2的产生可能是山茱萸总甙抑制机体免疫功能的主要机理之一。

山茱萸总甙滴眼液防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 :观察山茱萸总甙 (COG)滴眼液局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,随机分组 :A、B、C、D组为Wistar SD组间同种异体角膜移植 ,Wistar为受体 ,SD为供体 ,其中A组为空白对照组、B组为 0 5 %COG滴眼液组、C组为 1%COG滴眼液组 ,D组为 2 %COG滴眼液组 ,E组为Wis tar Wistar对照组 ,即Wistar大鼠间同种异体移植组。用裂隙灯显微镜记录及比较各组 :角膜植片透明度、水肿度、新生血管度、移植排斥指数 (RI)及角膜排斥发生时间。结果 :术后各组移植排斥指数及发生角膜移植排斥时间 ,A组与B组、A组与C组、A组与D组、B组与C组、C组与D组比较均有显著性差异 ,P <0 0 1;B组与D组之间比较P >0 0 5 ,无显著性差异。结论 :COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应 ,1%COG滴眼液更有效。

山茱萸总甙对人脐静脉内皮细胞表达α4β7整合素影响

为了进一步探讨山茱萸总甙的抗炎和免疫抑制机制。以ECV3 0 4作为研究HUVEC对象 ,研究了山茱萸总甙对HUVEC表达α4和 β7整合素影响。用rTNF α和rIL 1诱导血管内皮细胞活化 ,模拟血管内皮细胞在炎性条件下的环境 ,采用Cell ELISA方法分析α4整合素、β7整合素的表达 ,结果 ,rTNF α和rIL 1均可诱导血管内皮细胞活化而明显增加α4和 β7整合素的表达 ,地塞米松和山茱萸总甙均可抑制rTNF α和rIL 1诱导ECV3 0 4表达α4和β7整合素 (P <0 0 1)。抑制血管内皮细胞表达α4 β7整合素可能是山茱萸总甙主要抗炎和免疫抑制机制之一。

山茱萸总甙对IgA肾病大鼠血清白细胞介素-18、转化生长因子-β1水平及肾组织病理变化的影响

目的探讨山茱萸总甙治疗IgA肾病（IgAN）的作用机制。方法将50只SD大鼠按随机数字表法随机分为正常对照组、IgAN模型组、地塞米松组、山茱萸总甙高剂量组、山茱萸总甙低剂量组。采用口服牛血清清蛋白（BSA）皮下注射四氯化碳（CCl4）、蓖麻油和尾静脉注射脂多糖（LPS）方法建立IgAN大鼠模型。观察给药10周后大鼠各时相尿红细胞计数、24h尿蛋白定量（24h-UTP）变化，造模成功后地塞米松组、山茱萸总甙组再给药8周，然后检测不同组大鼠尿液、血清白细胞介素-18（IL-18）、转化生长因子-β1（TGF-β1）水平及肾组织病理变化。结果与IgAN模型组相比，18周末各组大鼠24h-UTP均有所下降，其中山茱萸总甙高剂量组下降最为显著，差异有统计学意义[（8．8±3．2）rag／24h比（35．2±5．6）mg／24h，t=10．511，P=0．000]；山茱萸总甙高剂量组尿红细胞计数明显减少，差异有统计学意义[（148．2±41．8）个／乩比（683．8±24．6）个／μL，t=10．909，P=0．000]；地塞米松组尿中红细胞计数有轻微下降，但差异无统计学意义（t=3．014，P=0．061）。与正常对照组比较，IgAN模型组大鼠尿液、血清中IL-18、TGF-β1，水平均明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与IgAN模型组比较，山茱萸总甙高剂量组大鼠尿液、血清中IL-18、TGF-β1，均明显减少，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；肾组织病理变化与IgAN模型组相比，山茱萸总甙高剂量组在M1T1/2上，所占比例明显减少。结论山茱萸总甙延缓肾损害的作用机制可能与下调IL-18、TGF-β1。的表达、减轻肾组织IgA沉积有关，山茱萸总甙可以抑制大鼠肾系膜细胞增生、肾小管萎缩及间质纤维化等，对IgAN大鼠有一定程度的治疗作用。

山茱萸分离提取物对脾淋巴细胞增殖的影响

观察山茱萸提取物总甙、第一部分多酚、第二部分多酚等对脾淋巴细胞增殖的影响 ,寻找山茱萸总甙中抑制免疫的有效成分 ,并初步探讨山茱萸总甙抗类风湿关节炎的作用机理。采用 3H TdR参入法测定各种提取物对鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果提示各部分对鼠脾淋巴细胞增殖皆有抑制作用 ,第二部分多酚作用最强。山茱萸总甙的抗类风湿关节炎作用可能与它抑制抗原特异刺激的T淋巴细胞增殖有关。