山莨菪碱对血管内皮细胞表达组织因子的影响

通过研究山莨菪碱对内毒素脂多糖致血管内皮细胞组织因子表达的影响 ,探讨山莨菪碱抗血栓形成以及治疗感染性休克的机制。采用酶消化法培养人脐静脉内皮细胞 ;用一步凝固法检测培养的内皮细胞组织因子活性 ;Northernblot检测内皮细胞组织因子mRNA的表达 ;为了评估上述作用是否通过核因子κB途径转导 ,采用电泳迁移变动检测法检测培养的内皮细胞核提取物核因子κBDNA结合活性。结果发现 ,内毒素脂多糖使内皮细胞组织因子活性及其mRNA表达显著增强 ;加入山莨菪碱后 ,内毒素脂多糖的这种作用明显减弱 ,并与山莨菪碱呈量效关系。且山莨菪碱能完全阻止内毒素脂多糖致内皮细胞核提取物核因子κBDNA结合活性。结果提示 ,山莨菪碱治疗感染性休克的机制之一是通过拮抗内毒素脂多糖致血管内皮细胞组织因子的表达 ,且这种拮抗作用可能通过。

恒磁场对人脐静脉内皮细胞活性及超微结构的影响

目的探讨恒磁场对血管内皮细胞活性、超微结构及凋亡的影响。方法将人脐静脉内皮细胞暴露于0.05、0.11、及5 mT恒磁场中,四唑盐比色法测定细胞增殖,采用透射电镜观察内皮细胞超微结构,流式细胞仪观测内皮细胞凋亡。结果0.05 mT恒磁场促进内皮细胞的增殖活性,0.1 mT恒磁场对细胞增殖无明显影响,1 mT、5mT恒磁场抑制细胞增殖。0.05 mT0、.1 mT1、mT恒磁场不引起细胞坏死,但1 mT恒磁场可引起部分细胞变性,5mT恒磁场不但引起细胞变性,还可以导致细胞坏死。0.05 mT、0.1 mT1、mT恒磁场没有引起细胞凋亡,5 mT恒磁场导致8.4%细胞凋亡。结论恒磁场对人脐静脉内皮细胞的生物学效应与磁感应强度有关,5 mT恒磁场对人脐静脉内皮细胞具有损害作用。

L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用

目的通过研究L-精氨酸和NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响以探讨L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用。方法不同浓度L-精氨酸、NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯、葡萄糖和胰岛素加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,24 h后分别测定细胞培养液中一氧化氮合酶和超氧化物歧化酶活性及一氧化氮和超氧阴离子浓度。结果25 mmol/L葡萄糖使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高,一氧化氮产生增加,超氧化物歧化酶活性下降,超氧阴离子产生增加;L-精氨酸对一氧化氮合酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶的影响与对照组相比无显著性差异(P>0.05),但可以使超氧阴离子产生减少;25 mmol/L葡萄糖+L-精氨酸使内皮细胞一氧化氮合酶活性增强,一氧化氮产生增加,L-精氨酸可以改善高糖引起的超氧阴离子升高。不同浓度的胰岛素使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高,一氧化氮产生增加,对超氧化物歧化酶活性和超氧阴离子产生无明显影响;不同浓度胰岛素+L-精氨酸使内皮细胞一氧化氮合酶活性增强,一氧化氮产生增加,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但可以使超氧阴离子水平降低。100μmol/L NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但使超氧阴离子产生增加;25 mmol/L葡萄糖+NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,但对高糖引起的超氧化物歧化酶活性下降和超氧阴离子升高无明显影响。10 mu胰岛素+10μmol/L NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯和100 mu胰岛素+100μmol/L NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但使超氧阴离子升高。结论L-精氨酸对一氧化氮合酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶无明显影响,但可以使超氧阴离子产生减少;NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降,一氧化氮产生减少,对超氧化物歧化酶活性无明显影响,但使超氧阴离子产生增加。

自噬对氧化低密度脂蛋白损伤内皮细胞的保护作用

目的 探讨自噬对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的作用.方法 将培养的HUVEC分为正常对照组,ox-LDL组,ox-LDL加雷帕霉素组和ox-LDL加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,分别收集细胞和上清,其细胞用免疫印迹技术检查自噬标记蛋白LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ的变化,四氮唑蓝（MTT）法和流式细胞技术检测细胞的增殖及凋亡 上清用于检测乳酸脱氢酶（LDH）活力和内皮素-1（ET-1）的含量.结果 ox-LDL作用能上调HUVEC的LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ表达（P＜0.01）,增加培养上清中LDH活力（P＜0.01）及ET-1含量（P＜0.05）,诱导细胞发生增殖（P=0.028）、凋亡（P＜0.05）.雷帕霉素能增加ox-LDL诱导的自噬水平上调,减少其培养上清中LDH活力及ET-1含量的增加（P＜0.05）,抑制ox-LDL诱导的细胞增殖.相反,3-MA在下调ox-LDL诱导自噬水平（P＜0.01）的同时,会增加细胞的凋亡及死亡.结论 ox-LDL能通过增加HUVEC LDH漏出率及ET-1分泌水平,促进细胞增殖、凋自噬 脂蛋白类,LDL 内皮细胞 内皮缩血管肽1