菠菜胆碱单加氧酶基因cDNA的克隆及重组植物表达载体的构建

从菠菜叶片中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增到菠菜胆碱单加氧酶(CMO)基因cDNA,然后将CMO cDNA克隆至pBluescript SK+载体上,序列分析结果表明,该CMO cDNA全长为1 424 bp,开放阅读框1 320 bp,编码440个氨基酸。核酸序列同源性分析表明,该cDNA与已发表的菠菜CMO基因具有99.8%同源性,氨基酸序列同源性达99.6%。在此基础上以pBI121和pBIrd为基础,构建了组成型启动子CaMV 35S和逆境诱导表达启动子rd29A驱动的CMO基因的植物表达载体。

转AhCMO基因玉米后代的获得及耐盐性鉴定

试验采用超声波辅助花粉介导法将山菠菜胆碱单加氧酶似hCMO）基因转入玉米自交系‘郑58’中，经抗生素筛选、PCR检测及白花授粉获得转CMO基因的T2代玉米种子。选取5份T2代玉米种子盆栽进行耐盐性鉴定试验。首先针对其非转基因受体材料筛选出耐盐性鉴定浓度，其后通过生理生化指标对转基因T3代株系进行耐盐性鉴定，同时筛选耐盐性强的株系。结果表明：耐盐性筛选及鉴定的适宜浓度为250mmol／L；依据对苗期生理生化指标的测定分析，在250mmol／LNaCl胁迫下，转基因玉米植株的超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性及叶绿素含量高于非转基因玉米，丙二醛（MDA）含量低于非转基因玉米。SOD活性提高了2％-208％；POD活性提高了22％～65％；叶绿素含量增加了8％～61％；MDA含量减少了3％～93％。试验表明，耐盐基因CMO的转化提高了玉米的耐盐性。依据生理生化指标变化情况建立的耐盐性级别评价方法显示，5份参试株系中耐盐性比对照提高3级的有2份。