猪流行性腹泻病毒山西分离株ORF3基因序列分析

为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传变异情况,2014-2015年从山西地区11个地市收集的PEDV阳性病料中扩增到4株PEDV的ORF3基因,并进行序列比对及遗传分析。序列分析结果表明,4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因与CV777毒株相比,无核苷酸插入和缺失,有部分核苷酸及氨基酸发生变异;4株PEDV山西分离毒株的ORF3基因之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.6%~100.0%和98.7%~99.6%,与CV777、疫苗株CV777 truncated和attenuated DR13核苷酸同源性分别为96.6%~97.0%,90.6%,97.6%~98.1%,氨基酸同源性分别为95.1%~96.0%,88.0%,97.1%~98.1%。遗传进化分析结果显示,4株PEDV山西分离毒株与12株2010-2015年我国各地方分离的毒株和2009年分离的CH/JL/09毒株亲缘关系较近;与CV777、LZC、Brl/87和2个疫苗株(CV777truncated和attenuated DR13)亲缘关系较远。

猪流行性腹泻病毒山西分离株M基因序列分析

为了研究山西地区猪流行性腹泻病毒M基因的遗传变异情况,从2014年10月~2015年4月山西地区11个地市收集的猪流行性腹泻病毒(PEDV)病料中扩增到4株PEDV的M基因,并进行序列比对及遗传分析。结果表明,4株PEDV的M基因与CV777毒株比较,部分核苷酸及氨基酸发生改变。4株PEDV的M基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.6%~100%和99.1%~99.6%,与参考毒株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为96.3%~99.9%和96.0%~99.1%。遗传进化分析显示,4株PEDV与2010-2013年中国分离株(BJ2010、HB/BD、HB/FN、HLJ-2012、GDHZ-1202、SHQP/YM/2013)、2008年泰国KU04RB08株亲缘关系较近;与2株泰国株(M_NIAH2013_95和M_NIAH1795_04)、2株欧洲株(CV777和Br1/87)和2006年中国分离株LZC亲缘关系较远。

鸡传染性支气管炎病毒山西株的分离鉴定及致病性分析

为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)并研究其致病性,本研究对山西运城疑似传染性支气管炎(IB)感染的送检临床样品研磨后反复冻融,提取基因组进行RT-PCR检测,结果显示其为IBV核酸阳性;进一步对样品研磨液过滤后接种9日龄~11日龄SPF鸡胚,并传至F3代,RT-PCR检测仍为IBV阳性;将阳性样品F11代鸡胚尿囊液接种SPF鸡胚后能引起典型的“侏儒胚”病变,接种气管环能导致气管环纤毛失去活性,表明分离到一株IBV,命名为YC181031。提取分离株基因组进行S1基因的PCR扩增及测序分析,结果显示YC181031株属于致肾病变型的GI-22基因型IBV。将该分离株感染7日龄SPF雏鸡以鉴定其致病性,结果显示YC181031分离株感染能引起雏鸡张口呼吸、精神沉郁、排水样稀粪等临床症状以及死亡,雏鸡死亡率为20%;剖检感染鸡和死亡鸡,能观察到肾脏肿大,并发生明显的尿酸盐沉积等病变;取感染雏鸡和死亡雏鸡的各脏器制备病理切片,观察各脏器的病变,并送公司制备各组鸡各组织的免疫组化切片,检测IBV感染情况。结果显示肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾脏、肝脏均能观察到明显病变及病毒感染。对感染鸡每两天采集各组鸡的咽肛拭子,采用RT-PCR检测排毒情况,结果显示感染鸡在试验期14 d内均能持续检测到排毒。采用荧光定量PCR检测各组织器官病毒的载量,结果显示各组织病毒载量由高到低依次为肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾脏、肝脏,其中肾脏病毒载量显著高于其他组织的病毒载量(P<0.05)。本研究首次系统研究了GI-22基因型IBV的致病特征,为该病的防制提供了参考依据。