山豆根水提物对类风湿关节炎骨破坏及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察山豆根水提物对类风湿关节炎(RA)的干预影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路研究其抗RA骨破坏的作用及机制。方法:采用高效液相色谱(HPLC)测定山豆根水提物中主要活性物质的含量,应用Ⅱ型胶原诱导法建立类风湿关节炎模型(CIA)小鼠,设正常组、模型组、甲氨蝶呤组(0.5 mg·kg^(-1))、山豆根水提物低、高剂量组(100、200 mg·kg^(-1))。观察CIA小鼠关节红肿畸形表现及关节炎临床积分;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠关节组织病理改变;微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测小鼠关节骨破坏程度;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察小鼠关节组织中破骨细胞形成情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路关键蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠关节红肿畸形程度、关节炎临床积分、滑膜增生及炎性细胞浸润程度显著升高(P<0.01),关节组织骨破坏程度、破骨细胞形成数目及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织蛋白酶K(CTSK)、活化T细胞核因子1蛋白(NFATc1)、PI3K和磷酸化(p)-Akt蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,山豆根水提物各剂量组能明显改善CIA小鼠关节畸形程度及关节炎临床积分(P<0.05,P<0.01),缓解小鼠关节组织病理改变(P<0.01),且降低小鼠关节骨破坏程度和破骨细胞形成情况(P<0.05,P<0.01),此外还显著下调小鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达(P<0.01)。结论:山豆根水提物能够显著延缓RA炎症反应,尤其抑制骨破坏,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。