山麻黄内生菌Myrothecium roridum LLY的化学成分及其体外细胞毒活性研究

目的研究山麻黄Ephedra equisetina内生真菌Myrothecium roridum LLY固体发酵产物的化学成分,并进行体外细胞毒活性研究。方法采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱法进行分离纯化,利用高分辨质谱、核磁共振谱等方法鉴定化合物的结构。MTT法进行化合物体外细胞毒活性筛选,并采用流式细胞术和Western blotting法进行化合物细胞毒活性机制初步研究。结果从M.roridum LLY固体发酵产物中分离得到9个化合物,分别鉴定为吩嗪-1-羧酸(1)、1-甲氧基吩嗪(2)、N-methyl-1H-indole-2-carboxamaide(3)、甲基硫赭曲菌素(4)、ditryptophenaline(5)、7,8-二甲基异咯嗪(6)、deoxyleporin B(7)、尿嘧啶(8)和胸腺嘧啶(9)。MTT测定发现,化合物3对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖具有一定的抑制活性,其IC50值为38.0μg/m L,阳性对照顺铂的IC_(50)值为11.5μg/m L。细胞周期分析发现,化合物3可导致SMMC-7721细胞S期阻滞;Western blotting分析发现,化合物3可使SMMC-7721细胞中细胞周期负调控蛋白p27的表达上调,并且Cleaved-PARP蛋白被明显活化。结论化合物7为1个新的天然产物。化合物3能诱导SMMC-7721细胞凋亡;其对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用与S期细胞周期阻滞相关,并受到p27蛋白的调控。

山麻黄不同炮制品中麻黄碱与伪麻黄碱含量测定

目的探讨不同炮制方法对山麻黄中麻黄碱,伪麻黄碱的影响。方法分析采用Waters Bridge C18柱(4.6 mm×150mm,5μm);流动相为乙腈-20 mmoL/L磷酸氢二氨水溶液(用氨水调pH=10)溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;检测波长为215 nm。结果麻黄碱、伪麻黄碱分别在0.1454~2.9080 μg(r=0.9999),0.0848~1.6960 μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,盐酸麻黄碱的加样回收率在96.27%-99.88%之间,盐酸伪麻黄碱的加样回收率在95.39%~98.66%之间,RSD值分别为1.54%和1.12%。结论该方法准确稳定,重复性好,可为山麻黄饮片的质量控制提供参考,也为其临床应用提供依据。