岗田酸诱导大鼠脑神经细胞表达谷氨酸转运体EAAT1

为研究tau蛋白高度磷酸化与谷氨酸转运体功能之间的关系,实验采用免疫组织化学、荧光双标记技术及大鼠额叶皮质定位注射的方法,观察了蛋白磷酸酶抑制剂岗田酸（okadaic acid,OA）所致神经细胞退化对谷氨酸转运体亚型EAAT1表达的影响。结果如下:（1）在OA注射中心区神经元早期出现胞体固缩、肿胀、核移位,在注射3d时细胞破碎,发生坏死,并有大量炎性细胞浸润等病理现象;边周区细胞呈AT8（微管相关蛋白tau磷酸化指标）免疫阳性反应;（2）OA首先诱导神经细胞突起远端tau蛋白磷酸化,并逐渐向胞体发展,形成营养不良的神经细胞突起和神经纤维缠结样病理改变;（3）AT8免疫阳性反应脑区的神经细胞高表达谷氨酸转运体EAAT1,在12h阳性表达细胞数显著增多（P<0.01）,1d时达峰值（P<0.001）,3d时明显减少。在OA作用下EAAT1表达于星形胶质细胞和神经元。结果提示,OA致微管相关蛋白tau高度磷酸化时可诱导该区星形胶质细胞和神经元高表达谷氨酸转运体EAAT1。EAAT1高表达的病理生理意义有待进一步的阐明。

头顶一颗珠对岗田酸致阿尔茨海默病大鼠脑组织抗氧化酶和过氧化脂质的影响

目的观察头顶一颗珠(TTM)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马、皮质抗氧化酶和过氧化脂质表达的影响。方法用岗田酸(OA)大鼠侧脑室注射制备大鼠阿尔茨海默病大鼠模型,TTM注射液(750、500、250 mg/kg)腹腔注射,并用维生素C(V it C)腹腔注射作阳性对照。测定正常组、模型组、阳性对照组、药物实验组海马、皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的含量。结果模型组与正常组比较,SOD、GSH-Px降低(P<0.05,P<0.001),MDA增高(P<0.001)。药物实验组与阳性对照组比较,SOD、GSH-Px和MDA在TTM高、中剂量组差异明显(P<0.05),低剂量组差异不明显(P>0.05)。结论TTM抗衰老作用与增强脑组织SOD、GSH-Px活性、减少MDA蓄积有关。

头顶一颗珠对岗田酸致阿尔彩默病大鼠脑组织抗氧化酶、过氧化脂质和tau蛋白影响的实验研究

目的观察头顶一颗珠(TTM)对阿尔彩默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马、皮质抗氧化酶、过氧化脂质和tau蛋白表达的影响。方法用岗田酸(Okadaic acid,OA)大鼠侧脑室注射造模,TTM注射液腹腔注射,并用维生素C(VtiC)腹腔注射作阳性对照。测定正常组、模型组、阳性对照组、药物实验组海马、皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和tau蛋白的含量。结果模型组与正常组比较,SOD,GSH-Px降低(P<0.05?P<0.001),MDA,tau蛋白增高(P<0.001)。药物实验组与阳性对照组比较,SOD,GSH-Px,MDA和tau蛋白在TTM高,中组差异明显(P<0.05),低组差异明显或不明显(P<0.05?P(0.05)。结论TTM的抗衰老作用,与能增强脑组织SOD,GSH-Px活性、减少MDA蓄积、降低tau蛋白水平有关。

岗田酸促癌作用过程中对Balb/c 3T3细胞凋亡的影响

目的初步探讨促癌物岗田酸(OA)在促进Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响及其分子机制。方法以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为启动剂,OA为促癌剂,建立Balb/c 3T3细胞转化模型。台盼蓝染色法检测OA的细胞毒性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,小鼠毒理基因芯片分析OA促癌作用过程中的基因表达变化,同时采用荧光定量RT-PCR方法验证部分基因的表达情况。结果MNNG 1 mg.L-1启动后,7.8μg.L-1OA持续处理能促进Balb/c3T3细胞的转化。OA处理3,5和7 d后细胞存活率降低,同时细胞凋亡率显著升高;基因表达谱分析显示,Bnip3,Cycs和caspase3等细胞凋亡相关基因以及Gstp2,Txn1和Prdx1等抗氧化基因的表达发生明显改变。RT-PCR检测显示OA处理3,7 d时,SPP1和Txn1基因的表达变化与芯片检测结果相似。结论OA在促癌过程能诱导Balb/c 3T3细胞凋亡,影响线粒体凋亡通路相关基因和抗氧化基因的表达。

脑纹状体边缘区注射岗田酸对大鼠逃避性长期记忆的影响

目的观察大鼠纹状体边缘区注射蛋白磷酸酶1(protein phosohatase ,PP1)抑制剂岗田酸(okadaic acid,OA)对大鼠逃避性长期记忆功能的影响。方法 SD成年大鼠,分为OA组(n=10)与盐水组(n=9),以Y迷宫训练作为强化学习的刺激,大鼠在Y迷宫训练第三次后立即进行双侧边缘区显微注射OA(0.5μl,40ng/μl)或等量生理盐水,并于一周后测试大鼠Y迷宫长期记忆。结果注药前OA组与盐水对照组动物第三次Y迷宫训练成绩分别为22.00±3.10和21.83±2.92无显著差异(P=0.923),但一周后OA注射组与盐水注射组动物的Y迷宫长期记忆测试成绩分别为24.71±2.21和20.00±3.46,OA注射组明显好于生理盐水注射组(P=0.013)。结论 训练后立即双侧纹状体边缘区内注射OA可增强实验大鼠在电Y迷宫中的逃避性长期记忆,提示PP1参与了边缘区相关的长期记忆。PP1抑制剂OA可增强大鼠纹状体边缘区相关的逃避性长期记忆。

冈田酸诱导SH-SY5Y细胞后tau蛋白磷酸化与PTEN蛋白水平的变化

目的研究冈田酸(OA)诱导SH-SY5Y细胞后tau蛋白磷酸化程度和PTEN蛋白水平的变化。方法40 nmol/L OA孵育SH-SY5Y细胞不同时间(0,3,6,12,18,24,36,48 h)后,倒置显微镜观察细胞的形态变化,免疫印迹检测各时间点tau蛋白ser396位点的磷酸化及PTEN蛋白水平的变化。结果SH-SY5Y细胞随OA孵育时间的延长逐渐出现细胞胞体变圆,突起回缩,悬浮生长至死亡。细胞tau蛋白ser396位点磷酸化水平于OA作用3 h开始升高,18 h达高峰,随后逐渐下降,48 h低于基础水平;而PTEN蛋白水平于OA作用3 h开始升高,6 h达高峰,之后逐渐下降,18 h开始低于基础水平。结论OA诱导SH-SY5Y细胞后tau蛋白磷酸化水平和PTEN蛋白水平均呈先上升后降低的变化趋势。

Tau蛋白过度磷酸化对脑淀粉样蛋白生成的影响

目的研究tau蛋白过度磷酸化对脑淀粉样蛋白生成的影响。方法用蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸(OA)在大鼠侧脑室内注射,每天1次连续8周。用Morris水迷宫和免疫组化方法观察OA组大鼠行为学改变、神经原纤维缠结及淀粉样蛋白的表达;并与对照组比较。结果与对照组相比,OA组大鼠Morris水迷宫平均潜伏期显著延长,学习获取能力较差,空间记忆能力衰退。OA组大鼠的海马CA1区、CA3区、CA4区、齿状回、大脑皮质出现tau蛋白磷酸化,神经原纤维缠结;大脑皮质及海马CA1区、CA3区、齿状回等部位出现β淀粉样蛋白沉积。结论Tau蛋白过度磷酸化可以增加脑部淀粉样蛋白的沉积。

OA诱导大鼠基底核Ach降低及τ蛋白过度磷酸化

研究了磷酸酯酶 (proteinphosphatase ,PP)对胆碱能神经元功能的影响 .将PP抑制剂岗田酸 (okadaicacid ,OA)注入大鼠双侧Meynert基底核 ,并经免疫印迹检测τ(tau)蛋白磷酸化程度、经微渗透结合HLPC检测Ach、经Morris水迷宫检测大鼠的空间记忆能力 .结果发现 ,Meynert基底核注射OA后 ,Ach水平降低 ,τ蛋白在Ser 198/Ser 199/Ser 2 0 2 ,Ser 396 /Ser 4 0 4位点发生过度磷酸化 ,并伴有大鼠空间记忆障碍 .本研究结果提示PP活性降低可能参与了神经元纤维缠结形成、胆碱能神经元功能及认知功能障碍 ,在AD发病机制中起重要作用 .

损伤杏仁核制备阳虚阿尔茨海默病大鼠模型

目的采用岗田酸(Okadaic acid OA)损伤实验大鼠杏仁核后,观察这些大鼠能否表达人阿尔茨海默病类(AD)的主要症状和主要病理特征。方法用OA注于实验大鼠杏仁核,而后采用避暗法和穿梭箱法测试实验大鼠的学习记忆能力,用免疫组化方法显示实验大鼠的脑组织内Aβ表达的变化,观察实验大鼠造模后活动量多少、是否喜欢群聚取暖,对照组用紫河车干预后,观察这些症状有否改变来判断是否有阳虚的表现。结果用OA注于实验大鼠杏仁核后,实验大鼠学习记忆能力明显减退、静默少动、喜欢群聚取暖,其脑组织内表达量明显高于假手术组,对照组用紫河车干预后实验大鼠的学习记忆能力有改善、活动增多、群聚取暖现象减少,其脑组织内β淀粉样蛋白(Aβ)表达量相对减少。结论OA注于实验大鼠杏仁核后可制成阳虚阿尔茨海默病模型。

佛波酯等3种促癌物诱导BALB/c3T3细胞骨桥素基因表达升高

目的探讨促癌物佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA),岗田酸(okadaic ac id,OA)和氯化镉(cadm ium chloride,CdC l2)在促进BALB/c 3T3细胞转化过程中对骨桥素基因(OPN)转录表达的影响。方法以N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为启动剂,TPA,OA和CdC l2分别为促癌剂,建立BALB/c 3T3细胞转化模型。采用小鼠毒理基因芯片分别检测促癌物处理过程中和转化细胞集落中的基因表达变化,同时采用实时RT-PCR验证部分细胞样本的OPN基因表达。结果基因芯片检测结果显示,3种促癌物在作用过程中均能诱导OPN基因表达升高,其中TPA处理后4 h,7 d和17 d,OA处理后3,7 d和24 d,CdC l2处理后3 d和7 d,OPN基因的表达较对照组增强;同时在促癌物诱导形成的9个转化细胞集落中,有8个转化集落检测到OPN基因表达升高。此外,实时RT-PCR检测也验证了OPN基因的表达升高。结论OPN基因与TPA,OA和CdC l2的促癌作用存在密切联系。

Tau蛋白过度磷酸化诱导Aβ生成抑制THP-1细胞ABCA1的表达

目的:探讨过度磷酸化Tau蛋白在动脉粥样硬化发生中的作用及其可能机制。方法:体外培养人单核细胞系THP-1,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞,建立人盐洗血小板与THP-1(人单核细胞)源性巨噬细胞共孵育生成泡沫细胞的体外模型。免疫细胞化学法检测过磷酸化Tau蛋白和β淀粉样蛋白的生成。用岗田酸(OA)诱导其Tau蛋白过磷酸化,Western blot观察Tau蛋白T231和S396两个位点磷酸化程度及β淀粉样蛋白水平,RT-PCR法检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达水平。结果:OA引起Tau蛋白剂量依赖的过度磷酸化,并增加β淀粉样蛋白的生成,同时下调ABCA1 mRNA水平的表达(P<0.05)。结论:Tau蛋白过度磷酸化诱导β淀粉样蛋白的生成并下调ABCA1 mRNA水平的表达,可能是动脉粥样硬化斑块形成和发展的机制之一。

丘陵地区小麦高产障碍因子及调控技术

丘陵地区地形地貌复杂,岗、塝、冲田梯度分布,农田生态条件差异较大。80年代以来,小麦单产提高较快,但由于受生产条件及栽培水平的制约,单产仍徘徊在200～250公斤之间,蕴藏着很大的增产潜力。通过近几年试验研究和调查分析,初步明确了本区小麦高产的主要障碍因子及其调控技术。